一种提取植物DNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种提取植物DNA的方法。所述方法包括：将研磨后的植物组织样品与裂解缓冲液混合，加热孵育，离心获取上清液，将所述上清液与沉淀液混合低温处理，再次离心获取最终上清液，进行分离纯化处理，得到DNA，所述裂解缓冲液含有：醋酸盐、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠。本发明专利技术的方法提取获得的DNA满足三代测序平台对DNA质量的要求，该方法提取的DNA可以获得较多大片段、纯度和核酸总量都较高，此方法具有成本低、步骤简单、安全高效等优点，适合大规模的推广和应用。和应用。和应用。

【技术实现步骤摘要】
一种提取植物DNA的方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，涉及一种提取植物DNA的方法。

技术介绍

[0002]近年来Pacific Biosciences、Oxford Nanopore Technologies、Bionano Genomics和10x Genomics等公司的长读长测序技术越来越受欢迎，随着相关技术的推广应用，而获得大片段、高纯度、高含量和高完整性的基因组DNA显得尤为重要。高质量DNA分子(high
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molecular
‑
weight DNA)是指片段长度在200bp
‑
1Mb之间，目前已应用于基因组测序、甲基化研究和突变鉴定等多个研究领域。
[0003]传统DNA提取方法获得的DNA片段长度在50kb左右，很少有大片段DNA，而以NanoPore、PacBio为代表的三代测序平台具有长读长的优点，三代测序技术对DNA质量要求较高，即：OD260/280比值范围在1.7
‑
2.0，OD260/230比值范围在1.6
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提取植物DNA的方法，其特征在于，所述方法包括：将研磨后的植物组织样品与裂解缓冲液混合，加热孵育，离心获取上清液，将所述上清液与沉淀液混合并进行低温处理，再次离心获取最终上清液，进行分离纯化处理，得到DNA；所述裂解缓冲液含有：醋酸盐、乙二胺四乙酸二钠、十二烷基硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和氯化钠，所述沉淀液含有醋酸盐。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分离纯化处理具体包括：向最终上清液中加入异丙醇和羟基磁珠溶液进行核酸吸附，用漂洗液漂洗磁珠，用第一洗脱液进行洗脱获得DNA粗提液；向DNA粗提液中加入羧基磁珠溶液进行纯化，收集磁珠，用漂洗液漂洗磁珠，用第二洗脱液进行洗脱获得高质量DNA溶液。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述研磨在液氮环境中进行。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其特征在于，所述裂解缓冲液的pH为4.0
‑
6.5；优选地，所述裂解缓冲液中所述醋酸盐的浓度为20
‑
200mM；优选地，所述裂解缓冲液中所述乙二胺四乙酸二钠的浓度为20
‑
300mM；优选地，所述裂解缓冲液中所述十二烷基硫酸钠质量百分比为0.5
‑
5％；优选地，所述裂解缓冲液中所述聚乙烯吡咯烷酮质量体积百分比为0.5
‑
5％；优选地，所述裂解缓冲液中所述氯化钠的浓度为200
‑
1500mM；优选地，所述裂解缓冲液中所述醋酸盐包括醋酸钠、醋酸钾或醋酸铵中任意一种；优选地，所述裂解缓冲液中所述聚乙烯吡咯烷酮包括PVPK30、PVPK10或PVP40中任意一种；优选地，所述沉淀液中醋酸盐包括醋酸钠、醋酸钾或醋酸铵中任意一种。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其特征在于，所述植物组织样品与裂解缓冲液的质量体积比为1g:(3
‑
10)mL。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其特征在于，所述低温处理包括：3
‑
10℃条件下放置5
‑
3...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁婷婷，董亚晨，
申请(专利权)人：上海美吉生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：