一种分离试剂及方法技术

一种分离试剂及方法，包含溶液D～J，溶液D包含溶液A～C，溶液A包含第一蛋白变性剂，溶液B包含第二蛋白变性剂、还原剂、螯合剂、表面活性剂，溶液C包含第一pH调节剂；溶液E包含非极性有机溶剂；溶液F包含第二pH调节剂，用于调节RNA沉淀中的pH；溶液G包含助沉剂，用于降低RNA在醇溶液中的溶解度，辅助RNA沉淀；溶液H包含沉淀剂，用于分别沉淀分离的RNA、DNA、蛋白质。本发明专利技术可分离DNA、RNA或蛋白质，有效提高了生物大分子产率与纯度，且降低了过程中产生的毒性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
一种分离试剂及方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种分离试剂及方法。

技术介绍

[0002]在临床分子检测中，生物大分子的提取仍旧面临多种挑战。如DNA下游实验容易受到含有的杂质影响纯度，干扰后续酶促反应；DNA与RNA在不同的pH值下稳定存在，需要将其有效分离；RNA稳定性不佳容易降解；蛋白质容易含有其他细胞组分杂质等。同时，传统上的生物大分子分离提取方法依旧存在得率和纯度不高的限制。
[0003]现有市售产品Trizol试剂可以完成分离DNA、RNA和蛋白质的目标，但存在如下问题：在分离RNA时，RNA含量较低的样本异丙醇沉淀效果不佳，RNA得率低下；同时，trizol试剂在处理临床上最常见的福尔马林固定组织样本时，由于不能有效解除RNA
‑
蛋白质交联，RNA分离提取效果不佳。

技术实现思路

[0004]根据第一方面，在一实施例中，提供一种分离试剂，包含溶液D～J；
[0005]溶液D包含溶液A～C，溶液A包含第一蛋白变性剂，溶液B包含第二蛋白变性剂、还原剂、螯合剂、表面本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离试剂，其特征在于，包含溶液D～J；溶液D包含溶液A～C，溶液A包含第一蛋白变性剂，溶液B包含第二蛋白变性剂、还原剂、螯合剂、表面活性剂，溶液C包含第一pH调节剂；溶液E包含非极性有机溶剂；溶液F包含第二pH调节剂；溶液G包含助沉剂；溶液H包含沉淀剂。2.如权利要求1所述的分离试剂，其特征在于，所述第一蛋白变性剂包含苯酚、甲酚、间苯二酚中的至少一种；优选地，所述第二蛋白变性剂包含异硫氰酸胍、盐酸胍中的至少一种；优选地，所述还原剂包含β
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巯基乙醇、二硫苏糖醇中的至少一种；优选地，所述螯合剂包含柠檬酸钠、乙二胺四乙酸二钠、酒石酸钠、氨基三乙酸钠中的至少一种；优选地，所述表面活性剂包含氨基酸表面活性剂；优选地，所述氨基酸表面活性剂包含甘氨酸、十二烷基肌氨酸钠(SLS)、L
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赖氨酸中的至少一种；优选地，所述溶液E中的非极性有机溶剂包含1
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溴,3
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氯丙烷、氯仿、溴仿中的至少一种；优选地，所述助沉剂包含聚丙烯酸5000、聚丙烯酸2000中的至少一种；优选地，所述沉淀剂包含异丙醇、无水乙醇中的至少一种。3.如权利要求1所述的分离试剂，其特征在于，所述溶液A还包含苏丹红I号；优选地，所述溶液A包含40～60℃下的饱和苯酚水溶液；优选地，所述第一pH调节剂包含乙酸钠水溶液；优选地，所述第一pH调节剂的pH为3.5
‑
4.5；优选地，所述第二pH调节剂包含乙酸钠水溶液；优选地，所述第二pH调节剂的pH为4.5
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6。4.如权利要求1所述的分离试剂，其特征在于，所述分离试剂还包含溶液I，所述溶液I包含核酸清洗液；优选地，所述溶液I包含乙醇、异丙醇中的至少一种；优选地，所述溶液I包含75体积％乙醇、75体积％异丙醇中的至少一种；优选地，所述分离试剂还包含溶液J，所述溶液J包含蛋白质清洗液；优选地，所述蛋白质清洗液包含无水乙醇、异丙醇中的至少一种；优选地，所述分离试剂还包含溶液K，所述溶液K包含溶解剂；优选地，所述溶解剂包含非极性有机溶剂；优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：许明炎，张晓妮，林郁松，
申请(专利权)人：深圳海普洛斯医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：