一种活体无损伤提取贝类高质量DNA的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种活体无损伤提取贝类高质量DNA的方法，包括S1：壳皮采集、S2：壳皮清洗、S3：DNA提取：取壳皮组织置于研钵中，加入液氮研磨至粉状，转移至离心管中；加入STE裂解缓冲液，再加入SDS溶液和蛋白酶K，充分混匀，置于恒温水浴锅中消化过夜，直至裂解液澄清；加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀、抽提后多次离心处理，取上清液，加入NaAc，无水乙醇，缓慢摇匀，置于

【技术实现步骤摘要】
一种活体无损伤提取贝类高质量DNA的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及贝类DNA提取
，具体而言，涉及一种活体无损伤提取贝类高质量DNA的方法及其应用。

技术介绍

[0002]DNA作为遗传信息的载体和最基本的遗传物质，在遗传变异、分子调控等方面发挥着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的主要对象。随着分子生物学技术的发展，群体遗传学和分子标记辅助育种技术已广泛应用到重要经济贝类遗传育种研究中，而提取高质量的DNA是进行贝类分子遗传学研究的前提。然而，贝类DNA的提取一般需要鲜活组织样品，即需将贝类活体打开贝壳、壳上钻孔甚至杀死个体等取其部分软体部组织用于DNA提取，该方法对个体损害极大，往往造成较强的机械损伤或致死，不利于贝类种质资源保存、遗传育种，尤其是对珍稀贝类的研究工作。在贝类中，关于非致死取样进行DNA提取已有相关报道。
[0003]包振民等公布了专利技术专利(CN103320425A，2013.09.25)“一种用于大规模、高通量基因分型的贝类DNA快速提取方法”，通过取用少量鳃丝组织进行DNA提取，对贝类生存、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种活体无损伤提取贝类高质量DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：壳皮采集：将健康无病、活力好的待检贝类活体清洗解剖后得到条状和/或块状壳皮；S2：壳皮清洗：将所述步骤S1得到的壳皮放入离心管中，加水并进行震荡；然后将所述壳皮转移到另一离心管中，重复上述步骤，从而除去壳皮表面的污物、细菌；S3：DNA提取：包括：S31：取壳皮组织置于研钵中，加入液氮研磨至粉状，转移至离心管中；加入STE裂解缓冲液，再加入SDS溶液和蛋白酶K，充分混匀，置于恒温水浴锅中消化过夜，直至裂解液澄清；S32：加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀、抽提后离心处理；取上清液，加入等体积的氯仿/异戊醇(24:1)，混匀、抽提10min，12000rpm离心10min；S33：取上清液，加入NaAc，无水乙醇，缓慢摇匀，置于
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20℃冰箱中以进行沉淀；离心后得到DNA沉淀；S34：弃去上清，用乙醇溶液洗涤所述步骤S33得到的沉淀；之后离心并弃去上清液，将得到的DNA沉淀在通风橱中进行干燥处理，加入灭菌双蒸水溶解DNA沉淀得到DNA溶液，完成提取。2.根据权利要求1所述的活体无损伤提取贝类高质量DNA的方法，其特征在于：所述步骤S34完成提取后还包括步骤S35：取步骤S4制备得到的DNA溶液进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，其余置于
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20℃冰箱保存备用。3.根据权利要求1所述的活体无损伤提取贝类高质量DNA的方法，其特征在于：所述步骤S1中，所述清洗解剖包括：将待检贝类活体放置于解剖盘中，用软毛刷蘸蒸馏水充分清洗壳表的污物，用解剖刀沿着壳...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚韩韩，董迎辉，赵家熙，何琳，何京，吕丽媛，孙长森，林志华，
申请(专利权)人：浙江万里学院宁海海洋生物种业研究院，
类型：发明
国别省市：