本文公开了制备含有寡核苷酸的组合物的方法。本公开的方法涉及对寡核苷酸的水溶液进行超滤/渗滤(UF/DF)以形成含有所述寡核苷酸的渗余物，其中所述超滤/渗滤(UF/DF)使用含有一种或多种盐的水性缓冲溶液进行。本文还公开了通过这些方法获得的含有寡核苷酸的组合物。了通过这些方法获得的含有寡核苷酸的组合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用超滤/渗滤制备寡核苷酸组合物的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35U.S.C.
§
119(e)要求2020年2月21日提交的美国临时申请号62/979,687的申请日的权益，其全部内容以引用方式并入本文。
[0003]本申请总体涉及生物制药技术，更具体地涉及使用能够控制寡核苷酸组合物中盐含量的过滤技术制备高纯度寡核苷酸组合物的方法。本公开的方法成功地将超滤/渗滤(UF/DF)的使用与冻干联系起来，其方式是避免需要进行通常用于生产冻干(固体)活性药物成分(API)的额外的加工步骤。
技术介绍
[0004]寡核苷酸是可以化学合成用于研究和医学目的的短DNA或RNA寡聚物。寡核苷酸通常通过逐步添加核苷酸残基以产生特定序列来制备。在完成所需序列中的寡核苷酸的合成之后，目标寡核苷酸通常作为与失败序列和其他过程和产品相关杂质的混合物一起获得。
[0005]用于治疗用途的寡核苷酸的制备，诸如由FDA批准使用的商业寡核苷酸，由于严格的商业规格和药物产品验证要求而变得更加复杂。治疗性寡核苷酸的合适纯化和配制技术必须考虑产品的化学组成和稳定性，以及施用方式。
[0006]治疗性寡核苷酸通常使用水基平台方法或冻干API平台方法制备，具体取决于所需药物产品的形式。对于一些基于稳定性特征、易于储存和易于加工的产品，冻干(固体)药物产品可能优于液体药物产品。
[0007](诺西那生钠)是一种用于治疗脊髓性肌肉萎缩症(SMA，一种罕见的神经肌肉疾病)的反义寡核苷酸(ASO)药物。市售的药物产品是源自溶剂密集型方法的冻干API。需要将水基平台方法与具有特定盐(例如钠和乙酸盐)含量的冻干API相结合，该水基平台方法结束于经由超滤/渗滤(UF/DF)产生的液体药物物质。该方法将使药物产品验证最小化并满足现有的商业规格，而无需添加任何非平台液体减容步骤和/或设备。
技术实现思路
[0008]本公开描述了使用超滤/渗滤(UF/DF)来浓缩和缓冲液交换寡核苷酸的方法，以获得适合于冻干的寡核苷酸水溶液而无需额外的(中间)处理步骤。图1示出了本公开的方法如何能够以消除通常在冻干步骤之前进行基于溶剂的沉淀的需要的方式将使用UF/DF的水基平台方法与冻干API平台方法相结合。
[0009]特别地，本文公开的方法能够控制寡核苷酸API中冻干前和冻干后的钠含量以及冻干后的乙酸盐含量以满足预定的钠盐和乙酸盐规格。这通过控制UF/DF水性缓冲溶液中的组分(例如盐)来实现。本文所述的方法还能够在制造商推荐的跨膜压力(TMP)条件下进行UF/DF步骤的同时控制寡核苷酸的膜渗透通量和渗余物浓度。
[0010]本公开的一个方面涉及一种制备包含寡核苷酸的组合物的方法，其中该方法包括
对寡核苷酸的水溶液进行超滤/渗滤(UF/DF)以形成包含寡核苷酸的渗余物，并且其中超滤/渗滤(UF/DF)使用包含一种或多种盐的水性缓冲溶液进行。
[0011]本公开的另一方面涉及包含寡核苷酸的组合物，其中组合物通过本文所述的方法之一获得。
[0012]在一些实施方案中，组合物是包含寡核苷酸的水溶液的形式。
[0013]在一些实施方案中，组合物是包含寡核苷酸的冻干组合物的形式。
[0014]本公开的另外的目的、优点和其他特征将部分地在下面的描述中阐述，并且部分地对于本领域普通技术人员在检查以下内容后将变得显而易见，或者可以从本公开的实践中获知。如所附权利要求中特别指出的，可以实现和获得本公开的优点。如将认识到的，本公开能够具有其他和不同的实施方案，并且其若干细节能够在各种明显方面进行修改，所有这些均不脱离本公开。在这点上，本文的描述应被理解为本质上是说明性的，而不是限制性的。
附图说明
[0015]图1描绘了溶剂密集型方法与本公开的水基方法的示例性结合。
[0016]图2是示出当在不同乙酸铵浓度下进行UF/DF时在缓冲液交换期间渗透通量下降的图。
[0017]图3是示出当DF缓冲液电导率增加时DF缓冲液对第二稳态渗透通量的影响的图。
[0018]图4是示出渗余物中最大ASO浓度与UF/DF缓冲液中乙酸盐总浓度的关系图。
[0019]图5是示出钠和铵含量的冻干之后(冻干后)趋势的图。
[0020]图6是示出UF/DF后渗余物中的钠(Na)含量与含有不同量乙酸铵(NH4OAc)的UF缓冲液中乙酸钠(NaOAc)的百分比(％)的关系图。
[0021]图7是具有LyoGuard托盘的示例性冻干室的图片。
[0022]图8是托盘和袋中的示例性冻干ASO材料的图片。
[0023]图9是示出当在水中进行UF/DF时渗透通量如何随着渗余物中寡核苷酸浓度的增加而下降的图。
[0024]图10是示出固体API中剩余的乙酸盐(OAc)的质量百分比(％)与UF缓冲液中乙酸盐(OAc)的总浓度的关系图。
[0025]图11示出了示例性水基平台方法与包括乙醇沉淀步骤的示例性冻干API平台方法之间的比较。
[0026]图12示出了钠(Na
+
)离子和铵(NH
4+
)离子如何占据沿带负电荷的硫代磷酸根寡核苷酸主链的不同抗衡离子位置。
具体实施方式
[0027]本文公开了将超滤/渗滤(UF/DF)的使用结合到传统上用于制备固体形式的寡核苷酸活性药物成分(API)的冻干API平台方法中的方法。本公开的实施方案包括制备用于治疗用途的寡核苷酸的方法，诸如反义寡核苷酸(诺西那生钠)。
[0028]水基平台方法通常包括一个或两个色谱分离步骤、一个脱保护步骤，并以超滤/渗滤(UF/DF)步骤结束，该超滤/渗滤步骤浓缩感兴趣的寡核苷酸并将缓冲液交换成适于鞘内
(IT)施用的液体制剂。该平台将液体药物物质从UF/DF操作递送到肠胃外填充设备，用于最终稀释、过滤和填充。相比之下，冻干API平台方法通常利用溶剂基纯化方法。图11示出了用于制备(诺西那生钠)的即填(ready
‑
to
‑
fill)液体形式的水基平台方法与用于制备该产品的冻干(固体)形式的冻干API平台方法之间的差异。如图11所示，的水基平台方法包括离子交换色谱步骤，然后是超滤/渗滤(UF/DF)步骤，以获得(诺西那生钠)的即填液体形式。相比之下，冻干API平台方法包括乙醇沉淀步骤，然后是冻干和复合以获得药物产品的冻干(固体)形式。
[0029]通过将乙醇沉淀步骤替换为水基平台方法中使用的UF/DF步骤来改进目前用于制备商业(诺西那生钠)的冻干API平台方法将是有利的。首先，出于环境和监管方面的原因，在该商业产品的最终制备中不使用有机溶剂将是有利的。其次，由于UF/DF通常可用于精确控制加工产品中的盐含量，因此通过使用UF/DF代替溶剂沉淀可以更好地控制盐含量。然而，如下所述，由于UF/DF和大规模冻干的实际限制，以前不可能在不包括额外步骤的情况下将这些方本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备包含寡核苷酸的组合物的方法，所述方法包括对所述寡核苷酸的水溶液进行超滤/渗滤(UF/DF)以形成包含所述寡核苷酸的渗余物，其中所述超滤/渗滤(UF/DF)使用包含一种或多种盐的水性缓冲溶液进行。2.如权利要求1所述的方法，其中所述缓冲溶液中所述一种或多种盐的总浓度在10mM至200mM、20mM至100mM或30mM至60mM的范围内。3.如权利要求2所述的方法，其中所述缓冲溶液中所述一种或多种盐的总浓度为40mM。4.如权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述水性缓冲溶液包含选自乙酸钠、乙酸钾和乙酸铵的至少一种盐。5.如权利要求4所述的方法，其中所述水性缓冲溶液包含乙酸钠和乙酸铵。6.如权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述水性缓冲溶液包含乙酸钠和乙酸钾。7.如权利要求5或6所述的方法，其中所述水性缓冲溶液包含乙酸钠和乙酸铵，并且乙酸钠和乙酸铵的总浓度范围为10mM至200mM、或20mM至100mM、或30mM至60mM，或为40nM；或者所述水性缓冲溶液包含乙酸钠和乙酸钾，并且乙酸钠和乙酸钾的总浓度范围为10mM至200mM、或20mM至100mM、或30mM至60mM，或为40nM。8.如权利要求5
‑
7中任一项所述的方法，其中所述缓冲溶液中乙酸钠与乙酸铵的摩尔比或乙酸钠与乙酸钾的摩尔比范围为1:20至20:1、或1:1至19:1、或5:1至19:1、或5:1至6:1、或5:1至6:1.8或12:1至15:1。9.如权利要求8所述的方法，其中：所述水性缓冲溶液包含乙酸钠和乙酸铵，并且所述水性缓冲溶液中乙酸钠与乙酸铵的摩尔比为17:3；或者所述水性缓冲溶液包含乙酸钠和乙酸钾，并且所述水性缓冲溶液中乙酸钠与乙酸钾的摩尔比为17:3。10.如权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述水性缓冲溶液包含34mM乙酸钠和6mM乙酸铵，或者所述水性缓冲溶液包含34mM乙酸钠和6mM乙酸钾。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的方法，其中所述超滤/渗滤(UF/DF)以至少5L
·
m
‑2·
hr
‑1的渗透通量进行。12.如权利要求11所述的方法，其中所述超滤/渗滤(UF/DF)以范围为5L
·
m
‑2·
hr
‑1至25L
·
【专利技术属性】
技术研发人员：RS格朗克，JP伊梅尔布朗，G戈文丹，
申请(专利权)人：渤健马萨诸塞州股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。