一种组合物及其试剂盒与纯化方法技术

一种组合物及其试剂盒与纯化方法，纯化方法包括：混合步骤，包括将含有核酸分子的还原体系与组合物混合，得到混合体系；吸附步骤，包括将所得的混合体系静置和/或振荡混匀，使得核酸分子吸附至磁珠；清洗步骤，包括对吸附有核酸分子的磁珠进行清洗；洗脱步骤，包括使用洗脱剂从清洗后的磁珠上洗脱核酸分子，得到纯化后的核酸分子；组合物包含磁珠以及聚乙二醇；磁珠为干粉状或悬浮液；核酸分子包含经过还原体系中的还原试剂处理后的核酸分子；还原体系的pH＜7；还原试剂包含有机硼烷以及有机酸盐。本发明专利技术的磁珠纯化方法显著提高核酸的还原回收率，显著降低成本，并显著提高还原回收率及其稳定性，且利于自动化。且利于自动化。且利于自动化。

【技术实现步骤摘要】
一种组合物及其试剂盒与纯化方法


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种组合物及其试剂盒与纯化方法。

技术介绍

[0002]早在1925年，在DNA双螺旋结构鉴定之前，DNA甲基化修饰就已经被发现。DNA甲基化修饰最主要的形式是5mC及其衍生修饰，被认为是DNA的“第五种碱基”。DNA甲基化在基因调控、遗传印迹、衰老、炎症、肿瘤等生理病理过程中发挥着重要作用。最近研究表明，cell
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free DNA(以下简称cfDNA)甲基化特征是肿瘤早期筛查的重要标志物。
[0003]重亚硫酸盐可将胞嘧啶(C)脱氨基转化为尿嘧啶(U)，在随后的PCR过程中，采用U 耐受的聚合酶，将U识别为胸腺嘧啶(T)，实现C到T的转化，从而达到将未修饰C和甲基化修饰C分开的目的。全基因组重亚硫酸盐测序(whole genome bisulfite sequencing，WGBS) 将未甲基化的胞嘧啶转化为胸腺嘧啶(约95％的C会被转化为T)，可覆盖全基因组70～99％的胞嘧啶，实现全基因组水平单碱基分辨率甲基化检测。全基因组重亚硫酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纯化方法，其特征在于，包括：混合步骤，包括将含有核酸分子的还原体系与组合物混合，得到混合体系；吸附步骤，包括将所得的混合体系静置和/或振荡混匀，使得核酸分子吸附至磁珠；清洗步骤，包括对吸附有核酸分子的磁珠进行清洗；洗脱步骤，包括使用洗脱剂从清洗后的磁珠上洗脱核酸分子，得到纯化后的核酸分子；所述组合物包含磁珠以及聚乙二醇；所述磁珠为干粉状或悬浮液；所述核酸分子包含经过还原体系中的还原试剂处理后的核酸分子；所述还原体系的pH＜7；所述还原试剂包含有机硼烷以及有机酸盐。2.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述混合步骤中，所述磁珠为悬浮液时，所述组合物中磁珠的体积与聚乙二醇的质量之比为≤1：0.25；优选地，所述混合步骤中，所述磁珠为悬浮液时，所述磁珠的体积与聚乙二醇的质量之比为1:(0.25～0.75)。3.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述混合步骤中，所述组合物包含磁珠以及聚乙二醇水溶液，所述磁珠为悬浮液时，所述磁珠与聚乙二醇水溶液的体积比≤1：0.5，优选为1：(0.5～3)；优选地，所述混合步骤中，所述聚乙二醇水溶液中聚乙二醇的质量体积百分比为50％；优选地，所述混合步骤中，所述聚乙二醇的分子量为200～20000。4.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述混合步骤中，所述含有核酸分子的还原体系为还原反应结束后得到的体系。5.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述混合步骤中，所述还原体系与组合物的体积之比≤1:1；优选地，所述混合步骤中，所述还原体系与组合物的体积之比≤1:2；优选地，所述混合步骤中，所述还原体系与所述组合物的体积之比为1：(2～8)。6.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，吸附步骤中，振荡混匀时间≥15min。7.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，吸附步骤中，振荡混匀时，混合体系的温度控制在20～40℃，优选为20～37℃，更优选为25～37℃；优选地，吸附步骤中，振荡混匀的转速≥500rpm；优选地，吸附步骤中，振荡混匀的转速≥1000rpm；优选地，吸附步骤中，振荡混匀的转速为1000～1800rpm；优选地，吸附步骤中，将混合步骤所得的混合体系置于恒温条件下振荡混匀。...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴炜，刘佳慧，任艳平，沈璐，赵美茹，易鑫，
申请(专利权)人：苏州吉因加医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：