尿液中DNA的提取方法、试剂盒及基因标志物在制备诊断膀胱癌的试剂盒中的应用技术

本发明专利技术提供了一种尿液中DNA的提取方法、试剂盒及基因标志物在制备诊断膀胱癌的试剂盒中的应用。其中，该提取方法包括：a)将尿液离心后获得尿沉渣，b)利用TE缓冲液洗涤尿沉渣，c)提取尿沉渣中DNA。能够解决现有技术中难以从尿液中提取大量DNA的问题，涉及生物样品中DNA提取领域。DNA提取领域。DNA提取领域。

【技术实现步骤摘要】
尿液中DNA的提取方法、试剂盒及基因标志物在制备诊断膀胱癌的试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及生物样品中DNA提取领域，具体而言，涉及一种尿液中DNA的提取方法、试剂盒及基因标志物在制备诊断膀胱癌的试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]尿液可以作为癌症早期发现、复发监测效果的非侵入性方法，对于泌尿系肿瘤，尿液在很多情况下是首选的“液体活检”来源。尿液及膀胱在过去被认为是无菌的，但通过细胞培养或16S rDNA测序发现，尿液中有细菌存在，微生物群在泌尿生殖系统肿瘤中的作用是一个新兴的研究领域，值得进一步的研究。然而尿液中微生物的含量较少以及PCR抑制剂的存在会阻碍DNA的有效PCR扩增，用普通的微生物提取试剂盒很难提取足够的细菌DNA用于后续实验。另外基于多组学的研究，需要基于同一份尿液样本同时提取宿主基因组DNA和微生物DNA。
[0003]目前膀胱癌的诊断和监测方法主要是膀胱镜检查和尿脱落细胞学检查。膀胱镜检查具有侵入性；脱落细胞学检查取材繁琐，不易获得满意的标本，临床应用少。若有方便准确的生物标记方法，能够最大程度的推动膀本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种尿液中DNA的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括：a)将尿液离心后获得尿沉渣，b)利用TE缓冲液洗涤所述尿沉渣，c)提取所述尿沉渣中DNA。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述c)包括：在利用所述TE缓冲液洗涤所述尿沉渣后，向所述尿沉渣中加入溶菌酶，孵育，以破坏细菌细胞壁；或向所述尿沉渣中加入玻璃砂，震荡，以破坏所述细菌细胞壁；优选地，所述TE缓冲液与所述尿液的体积比为1:10～30，更优选为1:20；优选地，对洗涤后的所述尿沉渣进行重悬，得到重悬液，将所述溶菌酶与所述重悬液按体积比1～2:3的比例混合，优选为体积比7:11，混合后置于35～37℃下处理30min～120min，优选45～60min。3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，破坏所述细菌细胞壁后，使用DNA提取试剂盒，提取所述尿液中DNA；优选地，所述DNA提取试剂盒包括吸附柱、蛋白酶K、GB缓冲液、乙醇、GD缓冲液、PW漂洗液；优选地，所述尿液中DNA包括尿液微生物DNA和宿主DNA。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述提取方法还包括：设置空白对照的步骤；优选地，按如下方法设置所述空白对照：向空白对照管中加入含有核酸助沉剂或糖原的无菌水；更优选地，所述无菌水中所述核酸助沉剂或糖原的体积含量为0.5～1.5％。5.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括检测尿沉渣中DNA含量的试剂。6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测尿沉渣中DNA含量的试剂为检测尿沉渣中微生物DNA含量的试剂；优选地，所述检测尿沉渣中微生物DNA含量的试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：李南南，杨琴，吴逵，林从，李甫强，罗甜，罗慧娟，赵鑫，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：