PDRN纯化方法及产品技术

本发明专利技术提供了一种PDRN纯化方法及产品，属于生物技术领域。本发明专利技术提供的纯化方法中包括：PDRN粗品溶于水，每1L粗品溶液中，加入3

【技术实现步骤摘要】
PDRN纯化方法及产品


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及PDRN纯化方法及产品。

技术介绍

[0002]PDRN（PolyDeoxyRiboNucleotide），又称多聚脱氧核糖核苷酸，是从三文鱼生殖细胞中提取的特定规格的DNA片段，分子量在50
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1500kDa之间。PDRN可以促进人体细胞再生，迅速恢复伤口，并减少疤痕生成，也可减轻痛症。
[0003]PDRN用途广泛，且具有良好的开发前景，不断发展PDRN的提取和纯化技术能够为其实际应用提供保障。与大部分物质纯化相同，PDRN的纯化很难用单一方法实现，最终目的产品的纯度和回收率两者难以兼顾。当需要提纯氨基酸及多肽等产物时，要根据其物理、化学性质等特性，选择适当的提纯方法以获取高纯度的目标产物，同时得到尽量多的产品。
[0004]现有技术中对与PDRN的纯化方法研究较少，一般通过优化制备步骤保证PDRN的纯度。
[0005]中国专利申请CN201911191251.1公开了一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Small molecule polydeoxyribonucleotide，SMPDRN)产品及其可控精准制备方法，以及其在化妆品、药品、营养食品、保健食品领域的应用。该专利技术中的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50bp
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1000bp，其分子量位于50bp
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500bp片段的质量占其总质量的的85％以上。该专利技术中的SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，功效更稳定，获得的产品经细胞、动物、人体实验证实在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著效果，优于现有PDRN产品。但其最终产品的产率和纯度有待提高。
[0006]中国专利申请CN202211007267.4提供了一种多聚脱氧核糖核苷酸的制备方法及应用。制备方法包括使用裂解液对鱼的精细胞进行裂解；所述裂解液中包括酶和缓冲液，所述缓冲液包括：1
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20mM尿素，10
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100mM Tris
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HCl，100
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500nM NaCl，100
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500nM CaCl2，1
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10mM Na2EDTA。该制备方法中裂解缓冲液更接近中性，便于配制，且裂解时间短，应用于实际生产时可提高效率，生产的多聚脱氧核糖核苷酸纯度高，具有较好的应用前景。但其裂解采用的为蛋白酶K，且裂解对象为精液，不同于精巢组织，操作成本较高。
[0007]现有技术中所制备的PDRN虽然已经能够投入市场应用，但进一步提高PDRN的纯度有利于其更好地发挥功效。

技术实现思路

[0008]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种PDRN纯化方法及产品。通过对常规方法制备的精巢组织来源的PDRN进行进一步纯化，去除鱼精蛋白杂质，提高了PDRN的提取纯度。
[0009]本专利技术采用的技术方案如下。
[0010]本专利技术提供了一种PDRN的纯化方法。
[0011]具体地，所述纯化方法包括以下步骤：PDRN粗品溶于水，每1L粗品溶液中，加入3
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4mol/L的KOH溶液50mL；再加入柠檬酸和碳酸的混合溶液10mL，混合溶液中柠檬酸的浓度为2
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4mol/L，碳酸的浓度为2
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4mol/L，离心取上清液；再加入1.1
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1.3mol/L的氯化钠溶液100mL，离心取沉淀。
[0012]优选地，所述KOH溶液的浓度为3.6
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4mol/L；所述柠檬酸的浓度为3
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4mol/L；所述碳酸的浓度为2
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3mol/L，所述氯化钠溶液的浓度为1.2
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1.3mol/L。
[0013]进一步地，所述KOH溶液的浓度为3.6mol/L；所述柠檬酸的浓度为4mol/L；所述碳酸的浓度为3mol/L，所述氯化钠溶液的浓度为1.2mol/L。
[0014]优选地，所述混合溶液或氯化钠溶液加入后，静置10
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15min；优选为静置10min。所述静置前可以包括搅拌操作。
[0015]优选地，所述离心为低速离心，所述离心条件为≤4000r/min，优选为2500r/min。
[0016]所述PDRN粗品可以是冻干前粗品或冻干后粗品。
[0017]优选地，所述PDRN粗品由三文鱼精巢组织中制得。
[0018]优选地，所述PDRN粗品在纯化前的纯度＜1.800。
[0019]所述纯度为产物溶于生理盐水后使用分光光度计分别检测260nm和280nm下的吸光度，根据以下公式计算产物中多聚脱氧核糖核苷酸的纯度：纯度=OD
260
/OD
280
。
[0020]在一些实施例中，所述PDRN粗品的制备方法为：（1）称取三文鱼精巢组织10g，加入碱裂解液150mL（1mol/L EDTA，5mol/L NaOH，5wt％SDS），破碎组织，颠倒混匀，100℃恒温水浴15min；（2）冰浴至40℃以下，加入浓度为4M的Tris
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HCl（pH8.0）150mL；颠倒混匀；（3）加入300mL 0.5M的盐酸，颠倒混匀；（4）0
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4℃条件下，12000rpm离心5min；收集上清；（5）DNA打断仪600 J/s破碎5min；（6）加入10M NH4AC溶液150mL，再加入
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20℃预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃至
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20℃放置30min；（7）0
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4℃条件下，12000rpm离心5min；去上清，加入70wt％乙醇，轻吹使沉淀泛起，轻缓颠倒数次，然后12000rpm离心5min，取沉淀；（8）真空冻干，计算得率并测定纯度。
[0021]所述的步骤（7）中的沉淀或者步骤（8）中的冻干产物均可以作为前述纯化方法的PDRN粗品。
[0022]当使用所述步骤（7）中的沉淀作为PDRN粗品时，PDRN粗品溶液的浓度为30
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50g/L，优选为40g/L。
[0023]当使用所述步骤（8）中的冻干产物作为PDRN粗品时，PDRN粗品溶液的浓度为10
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20g/L，优选为15g/L。
[0024]另一方面，本专利技术提供了前述纯化方法制备的PDRN。
[0025]具体地，所述的PDRN纯度≥1.900。
[0026]优选地，所述的PDRN纯度≥1.964。
[0027]进一步优选地，所述的PDRN纯度≥1.977。
[0028]更进一步地，所述的PDRN纯度≥1.985。
[0029]又本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PDRN的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：PDRN粗品溶于水，每1L粗品溶液中，加入3
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4mol/L的KOH溶液50mL；再加入柠檬酸和碳酸的混合溶液10mL，混合溶液中柠檬酸的浓度为2
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4mol/L，碳酸的浓度为2
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4mol/L，离心取上清液；再加入1.1
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1.3mol/L的氯化钠溶液100mL，离心取沉淀。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的KOH溶液的浓度为3.6
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4mol/L；所述的柠檬酸的浓度为3
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4mol/L；所述的碳酸的浓度为2
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3mol/L，所述的氯化钠溶液的浓度1.2
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1.3mol/L。3.根据权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述的KOH溶液的浓度为3.6mol/L；所述的柠檬酸的浓度为4mol/L；所述的碳酸的浓度为3mol/L，所述的氯化钠溶液的浓度1.2mol/L。4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：董书萍，王绪敏，
申请(专利权)人：瑞吉明山东生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：