一种mRNA的加帽方法技术

本发明专利技术公开了一种mRNA加帽的方法。所述方法包括：将mRNA连接在固定相后进行加帽反应，得到加帽的mRNA。本发明专利技术创造性地建立了一种基于固定化mRNA的加帽反应

【技术实现步骤摘要】
一种mRNA的加帽方法


[0001]本专利技术属于核酸
，涉及一种mRNA的加帽方法。

技术介绍

[0002]天然mRNA具有单链结构，由5
’
端甲基鸟苷酸帽(5
’‑
cap)、3
’
端多聚腺苷酸尾(3
’‑
polyA)以及中间的蛋白翻译区和非翻译区组成。其中，5
’‑
cap可以消除mRNA序列中的游离磷酸基团，防止核糖核酸酶和核酸外切酶对mRNA的消化，从而显著提高mRNA的稳定性，同时，5
’‑
cap能够促进核糖体识别mRNA，并通过与真核翻译起始因子4E(eIF4E)结合来提高翻译效率。根据5
’‑
cap中甲基化的程度，mRNA中存在三种类型的帽，即cap
‑
0(m7GpppN)、cap
‑
1(m7GpppNm)和cap
‑
2(m7GpppNmNm)。免疫细胞中的模式识别受体(PRRs)可以识别未加帽的mRNA或具有cap
‑<br/>0帽的mRN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种mRNA加帽的方法，其特征在于，所述方法包括：将mRNA连接在固定相后进行加帽反应，得到加帽的mRNA。2.根据权利要求1所述的mRNA加帽的方法，其特征在于，所述mRNA由体外转录获得；优选地，所述体外转录的反应体系包括RNA聚合酶和DNA模板；优选地，所述RNA聚合酶包括T7RNA聚合酶、SP6RNA聚合酶或T3RNA聚合酶中任意一种或至少两种的组合；优选地，所述DNA模板为具有编码蛋白质功能的DNA序列，包括线性化质粒、PCR产物、合成的DNA片段中任意一种或至少两种的组合。3.根据权利要求1或2所述的mRNA加帽的方法，其特征在于，所述mRNA通过非共价作用与固定相连接；优选地，所述非共价作用包括疏水作用、静电作用、亲和作用中任意一种或至少两种的组合；优选地，所述固定相包括表面修饰有能和mRNA结合的配基的固体材料；优选地，所述能和mRNA结合的配基包括疏水配基、阳离子配基、亲和配基中任意一种或至少两种的组合。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的mRNA加帽的方法，其特征在于，所述加帽反应包括将mRNA与mRNA加帽酶接触，在mRNA的5
’
端添加帽子结构。5.根据权利要求4所述的mRNA加帽的方法，其特征在于，所述mRNA加帽酶包括mRNA加帽酶1和mRNA加帽酶2；优选地，所述mRNA加帽酶1包括由D1和D12两个亚基组成的异质二聚体，更优选来源于牛痘病毒的加帽酶；优选地，所述mRNA加帽酶2包括2
‑
O
’
甲基转移酶。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的mRNA加帽的方法，其特征在于，所述加帽的mRNA的5
’
端帽子结构包括cap
‑
0(m7GpppN)、cap
‑
1(m7GpppNm)或cap
‑
2(m7GpppNmNm)中任意一种。7.根据权利要求1
‑
6任一项所述的mRNA加帽的方法，其特征在于，所述的mRNA加帽的方法包括以下步骤：(1)将mRNA连接到固定相上；(2)对连接在固定相上的mRNA进行加帽反应；(3)洗去未反应的组分；(4)将加帽后的mRNA从固定相上解离。8.根据权利要求7所述的mRNA加帽的方法，其特征在于，所述mRNA连接到固定相上的方法包括：将mRNA与结合缓冲液混合，加热后至于冰浴上冷却，后将mRNA加入预先用结合缓冲液平衡后的固定相中，进行结合；优选地，所述结合缓冲液包括Tris
‑
盐酸、氯化钠、乙二胺四乙酸、硫酸铵中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述Tris
‑
盐酸的浓度为0<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张松平，苏志国，车诗怡，李正军，林旋，冯雪，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：