一种尿液外泌体提取方法及其提取试剂技术

本公开提供了一种尿液外泌体提取方法及其提取试剂，涉及基因检测领域，该方法包括：将初始尿液样本加入离心管中进行预处理，得到标准尿液样本；加入裂解液进行外泌体核酸裂解，得到第一处理液；利用第一洗液对第一处理液进行核酸洗涤，得到第二处理液；加入DNA消化酶进行外泌体DNA消化，得到第三处理液；利用第二洗液对第三处理液进行核酸RNA洗涤，并进行离心、干燥，得到第四处理液；加入洗脱液进行核酸RNA洗脱，得到标准尿液样本的核酸。本申请高效回收核酸片段，通过多个清洗步骤和DNA消化酶除去杂质和DNA，纯化的RNA产量高。纯化的RNA产量高。纯化的RNA产量高。

【技术实现步骤摘要】
一种尿液外泌体提取方法及其提取试剂


[0001]本申请涉及基因检测领域，特别涉及一种尿液外泌体提取方法及其提取试剂。

技术介绍

[0002]外泌体广泛分布于各种体液中，如：尿液、唾液、血液、羊水、脑脊液及病理性腹水等。相对于其他体液，尿液具有取样安全简单、样本量大且无创等优点，因此，尿液外泌体研究对泌尿系统疾病的早期诊断、治疗、监测靶点以及疾病的机制研究具有重大的意义。尿液外泌体的形成过程如下：肾脏、膀胱、前列腺等尿路器官在生理和病理活动中，将携带各种生物信息的小分子蛋白或核酸片段，通过膜蛋白的内吞作用内化到核内体，形成腔内囊泡，再与溶酶体融合，或与质膜融合形成并释放胞外腔内小泡，即为外泌体，外泌体可以随着尿液和前列腺液的形成和排出，最终伴随尿液一起从尿道排出体外。所形成的外泌体存在于排出的尿液中，其中的组成成分可作为分子标志物来研究泌尿系统相关疾病。如肿瘤标志物，已逐渐成为学者们的研究焦点。研究表明，在进行诊断时，对患者尿液中的外泌体组成进行分析，除了RNA、miRNA、lncRNA外还存在一些特异性蛋白质等，分子的稳定性较高，所以可以真实地本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种尿液外泌体核酸提取方法，其特征在于，包括：将初始尿液样本加入离心管中进行预处理，得到标准尿液样本；向所述标准尿液样本中加入裂解液进行外泌体核酸裂解，得到第一处理液；利用第一洗液对所述第一处理液进行核酸洗涤，得到第二处理液；向所述第二处理液中加入DNA消化酶进行外泌体DNA消化，得到第三处理液；利用第二洗液所述第三处理液进行核酸RNA洗涤，并进行离心、干燥，得到第四处理液；向所述第四处理液中加入洗脱液进行核酸RNA洗脱，得到所述标准尿液样本的核酸。2.如权利要求1所述的尿液外泌体核酸提取方法，其特征在于，所述将初始尿液样本加入离心管中进行预处理，得到标准尿液样本，包括：将所述初始尿液样本放至低速离心机中以转速为3000
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4000rpm进行离心10min
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15min，得到中间尿液样本；取所述中间尿液样本的上清液转移到离心管中，加入外泌体分离液，涡旋混匀，放至高速离心机中以转速为10000
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15000rpm进行离心10min
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15min，吸除上清液后剩余液体为标准尿液样本；其中，所述外泌体分离液为含30
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45重量份PEG
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4000的Tris
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HCl溶液，所述外泌体分离液与所述初始尿液样本的体积比为1
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3:5。3.如权利要求1所述的尿液外泌体核酸提取方法，其特征在于，所述向所述标准尿液样本中加入裂解液进行外泌体核酸裂解，得到第一处理液，包括：向所述标准尿液样本中加入裂解液，涡旋混匀，低速瞬时离心；加入与所述标准尿液样本的体积比为1：4
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6的75％的乙醇和与所述标准尿液样本的体积比为1:180
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220的磁珠，旋涡混匀，低速瞬时离心后放入磁力架进行磁吸，磁吸后丢弃废液，得到第一处理液。4.如权利要求3所述的尿液外泌体核酸提取方法，其特征在于，所述裂解液包括pH为8.0的含70％NP40 Lysis Buffer，且所述裂解液与所述标准尿液样本的体积比为1
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3:9；所述磁珠为聚苯乙烯微球。5.如权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王校，赵娜，吴电云，李婧，王海阔，胡守旺，史文钊，
申请(专利权)人：神州医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：