用于被固定样品的组合物和方法技术

公开了用于改善被固定生物颗粒、被固定膜结合颗粒、被固定细胞、核和/或被固定细胞或核的生物分子(例如，核酸、RNA)的去固定或去交联的组合物、试剂、方法、试剂盒和系统。公开了核酸的加工和对核酸加条形码。公开了用于增加来自被固定细胞或核的去固定生物分子(例如，核酸、RNA)的量和质量的方法。聚合物比如聚乙二醇(PEG)增加从去固定细胞或核获得的核糖核酸(RNA)的量和质量。公开了用于在各种测定中使用去固定细胞/核和来自去固定细胞/核的生物分子的方法。聚合物比如PEG增加去固定剂存在下核酸聚合酶反应(例如，DNA聚合酶、逆转录酶)的效率。在一些实例中，当反应中包括PEG时，PEG增加蛋白酶存在下的逆转录酶活性。增加蛋白酶存在下的逆转录酶活性。增加蛋白酶存在下的逆转录酶活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于被固定样品的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月16日提交的美国临时申请第63/010,768号和2020年12月30日提交的美国临时申请第63/132,278号的优先权，所述美国临时申请中的每一个在此整体并入，包括所有表、图和权利要求。
[0003]序列表
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技术介绍

[0005]被固定生物样品中的分析物在处理样品中的生物颗粒(例如，细胞或核)以逆转固定对颗粒内的生物分子的影响(即，去固定或去交联)之后的检测和定量是一个活跃的研发领域。目标是获得可用于检测和定量颗粒中或来自颗粒的各种分析物/生物分子的测定的去固定生物颗粒。理想本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于加工核酸分子的方法，所述方法包括：a)提供隔室，所述隔室包含：(i)包含有包含核酸序列的核酸分子的被固定生物颗粒或被固定膜结合颗粒和(ii)核酸条形码分子；b)使所述隔室经受足以生成与所述核酸条形码分子联接的包含所述核酸序列的核酸分子的条件；c)从所述隔室释放与所述核酸条形码分子联接的包含所述核酸序列的所述核酸分子以生成与所述核酸条形码分子联接的包含所述核酸序列的释放的核酸分子；以及d)使与所述核酸条形码分子联接的包含所述核酸序列的所述释放的核酸分子经受足以使用所述核酸序列作为模板延伸所述核酸条形码分子以生成加有条形码的核酸分子的条件。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸分子为交联的核酸分子。3.根据权利要求2所述的方法，其中b)包括：(i)从所述交联的核酸分子生成未连接的核酸分子，和(ii)让所述未连接的核酸分子与所述核酸条形码分子联接。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述隔室还包含切割剂。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述切割剂为蛋白酶并任选地还包含催化剂。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述被固定生物颗粒或被固定膜结合颗粒为被固定的单个细胞。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述被固定生物颗粒或被固定膜结合颗粒为被固定的单个核。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述隔室还包含聚乙二醇。9.根据权利要求1所述的方法，其中b)包括加热所述隔室。10.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括在b)之后并在c)之前冷却所述隔室或让所述隔室冷却。11.根据权利要求1所述的方法，其中d)在蛋白酶抑制剂的存在下进行。12.根据权利要求1所述的方法，其中d)在聚乙二醇的存在下进行。13.根据权利要求1所述的方法，其中d)包括使用逆转录酶来延伸所述核酸分子条形码分子。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述逆转录酶包含RNA酶活性。15.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸条形码分子包含配置为退火至所述被固定生物颗粒或所述被固定膜结合颗粒的核酸分子的捕获序列。16.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括将另外的序列附加到所述加有条形码的核酸分子。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述另外的序列为poly
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C序列。18.根据权利要求16所述的方法，其中所述附加通过连接酶或聚合酶进行。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述聚合酶为逆转录酶。20.根据权利要求16所述的方法，其中所述附加包括使用夹板核酸分子。21.根据权利要求16所述的方法，其中所述隔室还包含模板转换寡核苷酸(TSO)。22.根据权利要求21所述的方法，所述方法还包括使所述隔室经受足以使所述TSO与所述另外的序列杂交的条件。
23.根据权利要求21所述的方法，所述方法还包括延伸所述加有条形码的核酸分子以生成包含与所述TSO互补的序列的延伸的加有条形码的核酸分子。24.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸条形码分子联接到支持物。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述支持物为珠。26.根据权利要求24所述的方法，其中所述核酸条形码分子通过不稳定部分联接到所述支持物。27.根据权利要求1所述的方法，其中所述隔室为液滴或孔。28.根据权利要求2所述的方法，其中所述交联的核酸分子包含核糖核酸(RNA)分子。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述RNA分子为信使RNA(mRNA)分子。30.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括(e)对所述加有条形码的核酸分子或其扩增产物测序。31.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括提供多个隔室。32.根据权利要求31所述的方法，所述方法还包括在a)之前将多个被固定生物颗粒或多个被固定膜结合颗粒分隔到所述多个隔室中。33.根据权利要求31所述的方法，其中在b)之后并在c)之前，所述多个隔室包含与核酸条形码分子联接的多个核酸分子。34.根据权利要求33所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：莎莉尼，
申请(专利权)人：一零X基因组学有限公司，
类型：发明
国别省市：