植物DNA提取试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，提出了植物DNA提取试剂盒，包括裂解液、磁珠吸附液、洗涤液I、洗涤液II；所述磁珠吸附液包括binding buffer、异丙醇和磁珠；还提出了植物DNA提取试剂盒的使用方法，包括以下步骤：S1、在样品中加入裂解液震荡，孵育后，离心，收集上清液；S2、将所述上清液与磁珠吸附液混匀后，弃去液体；S3、依次使用洗涤液I、洗涤液II分别洗涤两次，弃去液体；S4、加入RNase

【技术实现步骤摘要】
植物DNA提取试剂盒


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体的，涉及植物DNA提取试剂盒。

技术介绍

[0002]DNA是生物体中主要的遗传物质，从植物组织中提取核酸是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。从植物组织中提取纯度高、完整性好的核酸更是很多研究的关键所在。
[0003]传统的核酸分离方法主要有化学法、抽提法、冷冻法、煮沸法和硅基质柱膜法。最常见的提取步骤为裂解、萃取、离心、沉淀、洗涤。大部分样本利用传统技术虽然可以得到质量和得率都相对较好的DNA，但耗时费力，且对于富含多糖多酚类的植物组织来讲，很难从粘稠的多糖溶液中有效分离DNA，造成DNA损失，影响下游试验。所以如何从植物中快速高效获得高质量DNA仍旧是一个难题。

技术实现思路

[0004]本专利技术提出植物DNA提取试剂盒，解决了相关技术中DNA的获取耗时费力，且获得的DNA质量和收率低的问题。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]植物DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、磁珠吸附液、洗涤液I、洗涤液II；
[0007]所述磁珠吸附液包括binding buffer、异丙醇和磁珠。
[0008]作为进一步的技术方案，所述裂解液的组成为：300～500mM缓冲液、20～30mM核酸酶抑制剂、1～3M氯化物、1～5M蛋白变性剂和1～5％(v/v)表面活性剂。
[0009]作为进一步的技术方案，所述缓冲液为Tris
‑
HCl；
[0010]所述氯化物为NaCl；
[0011]所述蛋白变性剂为异硫氰酸胍；
[0012]所述表面活性剂为吐温
‑
20；
[0013]所述核酸酶抑制剂包括EDTA和DTT。
[0014]作为进一步的技术方案，所述EDTA和DTT的摩尔比为(3～7):1。
[0015]作为进一步的技术方案，所述EDTA和DTT的摩尔比为5:1。
[0016]作为进一步的技术方案，所述binding buffer、异丙醇和磁珠的体积比为(5～15):10:1。
[0017]作为进一步的技术方案，所述binding buffer、异丙醇和磁珠的体积比为10:10:1。
[0018]作为进一步的技术方案，所述binding buffer的组成为：3～5M氯化物、3～5％(v/v)表面活性剂。
[0019]作为进一步的技术方案，所述氯化物为NaCl；
[0020]所述表面活性剂包括吐温
‑
20和曲拉通
‑
100。
[0021]作为进一步的技术方案，所述吐温
‑
20和曲拉通
‑
100的体积比为(1.5～2.5):2。
[0022]作为进一步的技术方案，所述吐温
‑
20和曲拉通
‑
100的体积比为1:1。
[0023]作为进一步的技术方案，所述洗涤液I的组成为80～100mM缓冲液，1～5M氯化物和50～70％醇溶液；
[0024]所述洗涤液II的组成为40～60mM缓冲液和60～80％醇溶液。
[0025]作为进一步的技术方案，包括裂解液、磁珠吸附液、洗涤液I、洗涤液II；还包括RNase
‑
free。
[0026]本专利技术还提出了植物DNA提取试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
[0027]S1、在样品中加入裂解液震荡，孵育后，离心，收集上清液；
[0028]S2、将所述上清液与磁珠吸附液混匀后，弃去液体；
[0029]S3、依次使用洗涤液I、洗涤液II分别洗涤两次，弃去液体；
[0030]S4、加入RNase
‑
free振荡混匀，得到的液体即为DNA。
[0031]作为进一步的技术方案，所述样品与裂解液的质量体积比为(30～100)mg:400μL。
[0032]作为进一步的技术方案，所述上清液与磁珠吸附液的体积比为1:2.1。
[0033]作为进一步的技术方案，所述上清液与洗涤液I的体积比为3:5。
[0034]作为进一步的技术方案，所述上清液与洗涤液II的体积比为1:2。
[0035]作为进一步的技术方案，所述上清液与RNase
‑
free的体积比为6:(1～2)。
[0036]作为进一步的技术方案，植物DNA提取试剂盒的使用方法，具体步骤如下：
[0037]S1、将植物组织碾磨后，加入裂解液震荡，孵育，离心，收集上清液；
[0038]S2、取上清液加入磁珠吸附液混匀、静置，弃去液体；
[0039]S3、加入洗涤液I振荡、静置，弃去液体；
[0040]S4、加入洗涤液I振荡、静置，弃去液体；
[0041]S5、加入洗涤液II振荡、静置，弃去液体；
[0042]S6、加入洗涤液II振荡、静置，弃去液体；
[0043]S7、晾干后，加入RNase
‑
free振荡、静置，得到的液体，即为DNA。
[0044]作为进一步的技术方案，所述静置时，在磁力架上静置。
[0045]本专利技术的工作原理及有益效果为：
[0046]本专利技术利用磁珠对DNA的特异性吸附作用，提供了一种快速简便的从各类植物材料中提取高质量、高收率DNA的方法。该方法不需使用酚、氯仿等有毒有害试剂，且操作过程只有30～40min，过程简便迅速，适合大通量自动化提取。
具体实施方式
[0047]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本专利技术保护的范围。
[0048]实施例1
[0049]S1、将南瓜的新鲜组织100mg加入液氮碾磨，加入400μL裂解液震荡后，在70℃下孵育10min，离心，收集上清液；
[0050]S2、取300μL上清液加入630μL磁珠吸附液颠倒混匀5min、静置于磁力架上0.5min，吸弃液体，
[0051]S3、加入500μL洗涤液I振荡30s、静置于磁力架上30s，吸弃液体；
[0052]S4、加入500μL洗涤液I振荡30s、静置于磁力架上30s，吸弃液体；
[0053]S5、加入600μL洗涤液II振荡30s、静置于磁力架上30s，吸弃液体；
[0054]S6、加入600μL洗涤液II振荡30s、静置于磁力架上30s，吸弃液体；
[0055]S7、室温晾干5min，加入50μL RNase
‑
free在56℃振荡混匀10min、静置于磁力架上1min，得到的液体，即为DNA。
[0056]磁珠吸附液由体积比为10:10:1的bi本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.植物DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、磁珠吸附液、洗涤液I、洗涤液II；所述磁珠吸附液包括binding buffer、异丙醇和磁珠。2.根据权利要求1所述的植物DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液的组成为：300～500mM缓冲液、20～30mM核酸酶抑制剂、1～3M氯化物、1～5M蛋白变性剂和1～5％(v/v)表面活性剂。3.根据权利要求2所述的植物DNA提取试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为Tris
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HCl；所述氯化物为NaCl；所述蛋白变性剂为异硫氰酸胍；所述表面活性剂为吐温
‑
20；所述核酸酶抑制剂包括EDTA和DTT。4.根据权利要求3所述的植物DNA提取试剂盒，其特征在于，所述EDTA和DTT的摩尔比为(3～7):1。5.根据权利要求1所述的植物DNA提取试剂盒，其特征在于，所述binding buffer、异丙醇和磁珠的体积比为(5～15):10:1。6.根据权利要求1或5所述的植物DNA提取试剂盒，其特征在于，所述binding buffer的组成为：3～5M氯...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁杉，齐硕，赵瑞，穆胜群，郭文彬，边帅，王海鑫，
申请(专利权)人：蓝景科信河北生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：