一种提取微生物DNA的试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种提取微生物DNA的试剂盒及其使用方法，包括裂解液和平衡液，裂解液包括异硫氰酸胍、5

【技术实现步骤摘要】
一种提取微生物DNA的试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种提取微生物DNA的试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]环境微生物总DNA的纯化为本领域所熟知，并且在生态学、诊断及药学研究中有极为广泛的应用。随着分子生物学及生态学研究的不断进步，从环境样本中纯化的DNA可直接用于微生物基因组研究、微生物多样性的分析，进而用于动植物疾病的发生发展研究。在这些应用中，首先需要纯化DNA，随后进行聚合酶链式扩增反应或DNA序列测定，从而揭示样本中微生物多样性变化，最终用于微生物多样性研究。
[0003]但是，环境微生物样本来源多样，干扰物复杂是无法避免的情况。现有技术方法通常包含直接法与间接法进行DNA提取。直接法采用直接裂解样本中微生物细胞的方法，这种方法获得的主要是DNA粗提液，可根据后续试验应用直接使用或进行进一步纯化使用，但是该类方法需要高温处理，通常需要温度控制仪器辅助才能进行；而间接法需要通过机械破碎样本、样本匀浆、不同缓冲溶液进行细胞壁和细胞膜的裂解、最终通过乙醇沉淀或羟基/羧基材料吸附纯化得到DNA，但是该方法需要更多的专业仪器，并且操作步骤繁复，导致耗时较多，不适合进行高通量DNA样本的提取。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种提取微生物DNA的试剂盒及其使用方法，旨在解决现有的微生物DNA提取耗时较多的问题。
[0005]为实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一种提取微生物DNA的试剂盒，包括裂解液和平衡液，
[0006]所述裂解液包括异硫氰酸胍、5
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氯
‑2‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、2
‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、RNaseA、聚乙烯吡咯烷酮、2
‑
(N
‑
吗啉代)乙磺酸、溴酚红和二甲苯青FF；
[0007]所述平衡液包括3
‑
(2
‑
氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷，1
‑
(4
‑
磺酸苯基)
‑4‑
(4
‑
磺酸苯基偶氮)
‑5‑
吡唑啉酮
‑3‑
羧酸三钠和三羟甲基氨基甲烷。
[0008]其中，所述裂解液的pH为5.8～6.4。
[0009]其中，所述平衡液的pH为8.6～10。
[0010]其中，所述裂解液包括5M异硫氰酸胍、0.001％～12％的5
‑
氯
‑2‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、0.001％～10％的2
‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、0.01mM RNaseA、0.5％聚乙烯吡咯烷酮、100～200mM的2
‑
(N
‑
吗啉代)乙磺酸、0.1～0.5％的溴酚红、0.01～0.5％的二甲苯青FF。
[0011]其中，所述平衡液包括0.01～15％的3
‑
(2
‑
氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷，0.25％的1
‑
(4
‑
磺酸苯基)
‑4‑
(4
‑
磺酸苯基偶氮)
‑5‑
吡唑啉酮
‑3‑
羧酸三钠、50～200mM的三羟甲基氨基甲烷。
[0012]第二方面，本专利技术提供了一种提取微生物DNA的试剂盒的使用方法，包括以下步
骤：
[0013]将0.05g～0.1g生物样本与0.1ml裂解液充分混匀，并涡旋振荡后室温静置1分钟，得到混合溶液；
[0014]向所述混合溶液中加入0.2ml平衡液，充分混匀后室温静置10分钟，得到粗提液；
[0015]将所述粗提液于15000xg离心力条件下离心1分钟，取上清液，得到提取微生物。
[0016]本专利技术的一种提取微生物DNA的试剂盒，包括裂解液和平衡液，所述裂解液包括异硫氰酸胍、5
‑
氯
‑2‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、2
‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、RNaseA、聚乙烯吡咯烷酮、2
‑
(N
‑
吗啉代)乙磺酸、溴酚红和二甲苯青FF；所述平衡液包括3
‑
(2
‑
氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷，1
‑
(4
‑
磺酸苯基)
‑4‑
(4
‑
磺酸苯基偶氮)
‑5‑
吡唑啉酮
‑3‑
羧酸三钠和三羟甲基氨基甲烷，使用时将0.05g～0.1g生物样本与0.1ml裂解液充分混匀，并涡旋振荡后室温静置1分钟，得到混合溶液；向所述混合溶液中加入0.2ml平衡液，充分混匀后室温静置10分钟，得到粗提液；将所述粗提液于15000xg离心力条件下离心1分钟，取上清液，得到提取微生物，本专利技术的试剂盒在室温条件下即可完成操作，提取快速，解决了现有的微生物DNA提取耗时较多的问题。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1是本专利技术提供的一种提取微生物DNA的试剂盒的使用方法实施例1～实施例3所提取的微生物DNA的扩增16S rRNA基因的琼脂糖凝胶电泳图。
[0019]图2是本专利技术提供的一种提取微生物DNA的试剂盒的使用方法的流程图。
具体实施方式
[0020]下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0021]第一方面，本专利技术提供一种提取微生物DNA的试剂盒，包括裂解液和平衡液，
[0022]所述裂解液包括异硫氰酸胍、5
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氯
‑2‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、2
‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、RNaseA、聚乙烯吡咯烷酮、2
‑
(N
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吗啉代)乙磺酸、溴酚红和二甲苯青FF；
[0023]所述平衡液包括3
‑
(2
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，包括裂解液和平衡液，所述裂解液包括异硫氰酸胍、5
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氯
‑2‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、2
‑
甲基
‑4‑
异噻唑啉
‑3‑
酮、RNaseA、聚乙烯吡咯烷酮、2
‑
(N
‑
吗啉代)乙磺酸、溴酚红和二甲苯青FF；所述平衡液包括3
‑
(2
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氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷，1
‑
(4
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磺酸苯基)
‑4‑
(4
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磺酸苯基偶氮)
‑5‑
吡唑啉酮
‑3‑
羧酸三钠和三羟甲基氨基甲烷。2.如权利要求1所述的提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述裂解液的pH为5.8～6.4。3.如权利要求2所述的提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述平衡液的pH为8.6～10。4.如权利要求3所述的提取微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括5M异硫氰酸胍、0.001％～12％的5
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氯
‑2‑
甲基
‑4‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙梓健，涂波，康杰，丁泽琴，
申请(专利权)人：成都罗宁生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：