一种细胞RNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种细胞RNA的提取方法，所述提取方法：向细胞PBS溶液中加入RNA酶抑制剂，得到混悬液；将混悬液先置于液氮中冷冻、水浴加热，然后，再置于液氮中冷冻，随后，水浴至室温后加入RNAiso Plus并进行超声处理；向超声处理后的混合液中加入氯仿，然后静置、离心处理，收集上清液；向上清液中加入异丙醇并混匀，再经静置、离心，收集沉淀物；向沉淀物中加入乙醇溶液并混匀，再经静置、离心，收集沉淀，即得所述细胞RNA。本发明专利技术细提取方法能够对不同种类细胞RNA进行提取，而且能够充分破碎细胞并能够避免RNA的讲解，进而显著提高了RNA的得率，此外，本发明专利技术提取方法提取效率较高，且提取RNA具有较高的纯度，能够满足后续实验要求。能够满足后续实验要求。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞RNA的提取方法


[0001]本专利技术涉及RNA提取
，具体涉及一种细胞RNA的提取方法。

技术介绍

[0002]现代分子生物学实验、临床分子诊断中常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA，而RNA的质量高低常常会影响cDNA库、RT
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PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。
[0003]分离提取高质量的RNA是基因表达、调控与基因工程等研究的基础，而RNA酶、多糖及多酚类物质严重干扰RNA的分离提取过程。目前已经有大量的RNA分离提取方法。但现有提取方法存在起始样本量较多，而RNA得率较低的问题。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种细胞RNA的提取方法，本专利技术提供方法经过冻融、超声以及RNAiso Plus处理能够充分破坏细胞，有利于RNA的提取，提高RNA的提取得率。
[0006]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0007]本专利技术第一方面提供了一种细胞RNA的提取方法，所述提取方法包括如下步骤：
[0008](a)向细胞PBS溶液中加入RNA酶抑制剂，得到混悬液；
[0009](b)将混悬液先置于液氮中冷冻、水浴加热，然后，再置于液氮中冷冻，随后，水浴至室温后加入RNAiso Plus并进行超声处理；
[0010](c)向超声处理后的混合液中加入氯仿，然后静置、离心处理，收集上清液；
[0011](d)向上清液中加入异丙醇并混匀，再经静置、离心，收集沉淀物；
[0012](e)向沉淀物中加入乙醇溶液并混匀，再经静置、离心，收集沉淀，即得所述细胞RNA。
[0013]优选地，所述步骤(a)中，细胞PBS溶液与RNA酶抑制剂的体积比为100∶(4～6)。
[0014]优选地，所述步骤(a)中，RNA酶抑制剂的活性浓度为60～80U/μL。
[0015]优选地，所述步骤(b)中，混悬液先置于液氮中冷冻3～5min。
[0016]优选地，所述步骤(b)中，水浴加热至90～100℃。
[0017]优选地，所述步骤(b)中，再置于液氮中冷冻2～3min。
[0018]优选地，所述步骤(b)中，RNAiso Plus的添加量与细胞PBS溶液体积比为1∶(3～5)。
[0019]优选地，所述步骤(b)中，超声处理包括：
[0020]每间隔2～3s超声处理4～6s，连续处理3～5次，其中，超声频率为20～25Khz，超声功率为50～200W。
[0021]优选地，所述步骤(c)中，氯仿的添加体积与混合液体积比为1∶(5～20)。
[0022]优选地，所述步骤(d)中，异丙醇的添加体积与上清液的体积比为1∶(0.8～2)。
[0023]与现有技术相比，本专利技术的有益效果至少包括：
[0024]本专利技术细胞RNA提取方法通过特定的冻融超声以及RNAiso Plus处理，能够对不同种类细胞RNA进行提取，而且能够充分破碎细胞并能够避免RNA的讲解，进而显著提高了RNA的得率，此外，本专利技术提取方法提取效率较高，且提取RNA具有较高的纯度，能够满足后续实验要求。
具体实施方式
[0025]下面将结合实施例对本专利技术技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0026]需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域技术人员所理解的通常意义。
[0027]本专利技术实施例提供了一种细胞RNA的提取方法，该提取方法包括如下步骤：
[0028](a)向细胞PBS溶液中加入RNA酶抑制剂，得到混悬液；
[0029](b)将混悬液先置于液氮中冷冻、水浴加热，然后，再置于液氮中冷冻，随后，水浴至室温后加入RNAiso Plus并进行超声处理；
[0030](c)向超声处理后的混合液中加入氯仿，然后静置、离心处理，收集上清液；
[0031](d)向上清液中加入异丙醇并混匀，再经静置、离心，收集沉淀物；
[0032](e)向沉淀物中加入乙醇溶液并混匀，再经静置、离心，收集沉淀，即得所述细胞RNA。
[0033]本专利技术细胞RNA提取方法通过特定的冻融超声以及RNAiso Plus处理，能够对不同种类细胞RNA进行提取，而且能够充分破碎细胞并能够避免RNA的讲解，进而显著提高了RNA的得率，此外，本专利技术提取方法提取效率较高，且提取RNA具有较高的纯度，能够满足后续实验要求。
[0034]在一些实施方式中，步骤(a)中，细胞PBS溶液与RNA酶抑制剂的体积比为100∶(4～6)；具体可以为100∶4、100∶5或100∶6。
[0035]进一步地，步骤(a)中，RNA酶抑制剂的活性浓度为60～80U/μL。
[0036]通过对RNA酶抑制剂的添加能够避免RNA的降解，有利于提高其提取得率。
[0037]在一些实施方式中，步骤(b)中，混悬液先置于液氮中冷冻3～5min。
[0038]在一些实施方式中，步骤(b)中，水浴加热至90～100℃。
[0039]在一些实施方式中，步骤(b)中，再置于液氮中冷冻2～3min。
[0040]通过上述特定的冻融工艺，能够更好的促进细胞的破裂，有利于RNA的提取。
[0041]在一些实施方式中，步骤(b)中，RNAiso Plus的添加量与细胞PBS溶液体积比为1∶(3～5)。
[0042]在一些实施方式中，步骤(b)中，超声处理包括：
[0043]每间隔2～3s超声处理4～6s，连续处理3～5次，其中，超声频率为20～25Khz，超声功率为50～200W。
[0044]采用上述RNAiso Plus溶剂以及超声联合提取RNA，能够显著提高RNA的提取率。
[0045]在一些实施方式中，步骤(c)中，氯仿的添加体积与混合液体积比为1∶(5～20)。
[0046]在一些实施方式中，步骤(d)中，异丙醇的添加体积与上清液的体积比为1∶(0.8～
2)。
[0047]以下通过具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步详细说明。
[0048]实施例1
[0049]本实施例为一种细胞RNA的提取方法，所述细胞RNA的提取方法包括如下步骤：
[0050](a)按照细胞PBS溶液与RNA酶抑制剂的体积比为100∶4，向细胞PBS溶液中加入RNA酶抑制剂，得到混悬液，其中，RNA酶抑制剂的活性浓度为80U/μL；
[0051](b)将混悬液先置于液氮中冷冻3min、水浴加热至100℃，然后，再置于液氮中冷冻2min，随后，水浴至室温后加入RNAiso Plus并每间隔2s超声处理6s，连续处理3次，其中，RNAiso Plus的添加量与细胞PBS溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞RNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)向细胞PBS溶液中加入RNA酶抑制剂，得到混悬液；(b)将混悬液先置于液氮中冷冻、水浴加热，然后，再置于液氮中冷冻，随后，水浴至室温后加入RNAiso Plus并进行超声处理；(c)向超声处理后的混合液中加入氯仿，然后静置、离心处理，收集上清液；(d)向上清液中加入异丙醇并混匀，再经静置、离心，收集沉淀物；(e)向沉淀物中加入乙醇溶液并混匀，再经静置、离心，收集沉淀，即得所述细胞RNA。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(a)中，细胞PBS溶液与RNA酶抑制剂的体积比为100∶(4～6)。3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(a)中，RNA酶抑制剂的活性浓度为60～80U/μL。4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(b)中，混悬液先置于液氮...

【专利技术属性】
技术研发人员：张向阳，初国海，刘济忠，钟春燕，叶雪怡，
申请(专利权)人：深圳东亿医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：