本发明专利技术公开了一种血液基因组DNA的提取方法，该提取方法采用两种细胞裂解液进行裂解，再采用蛋白酶K和SDS进行处理，然后，经盐析去除杂质，再经DNA沉淀处理洗涤纯化，最终提取到纯度较高的DNA；本发明专利技术提取方法通过特定工艺以及裂解液等试剂的限定，能够充分破坏血液样本中的细胞，促进DNA的对血液样本进行处理，能够充分提取血液样本中的DNA并有效去除杂质，进而能够提高DNA的提取率和纯度，为后续实验提供质量保障。提供质量保障。
【技术实现步骤摘要】
一种血液基因组DNA的提取方法
[0001]本专利技术涉及DNA提取
，具体涉及一种血液基因组DNA的提取方法。
技术介绍
[0002]DNA提取是分子生物学研究的基础技术，目前已经发展了多种从血样中提取DNA的方法。在血液中含有大量的蛋白质及盐类，其性质与核酸的物理性质非常相似。在血样DNA提取过程中处理不当极易与DNA共同沉淀下来，并且难以分离，直接导致DNA纯度较低，影响后续实验结果。
[0003]目前的血液基因检测实验中，常用方法是购买核酸提取试剂盒进行提取或纯化；然而，现有试剂盒的DNA提取方法对DNA的提取效率和纯度较低，直接影响检测结果。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一种血液基因组DNA的提取方法，本专利技术提取方法通过特定裂解液对血液样本进行处理，能够充分提取血液样本中的DNA并有效去除杂质。
[0006]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0007]本专利技术第一方面提供了一种血液基因组DNA的提取方法，所述提取方法包括如下步骤：
[0008](a)获取血液样本，向血液样本中加第一细胞裂解液并混匀，然后，再经离心，收集沉淀，得到第一沉淀物，其中，所述第一细胞裂解液包括以下组分：
[0009]0.3～0.5M的氯化铵、0.01M～0.2M的碳酸氢钾、0.5～1.5％(v/v)的曲拉通100、0.001～0.05M的乙二胺四乙酸；
[0010](b)向第一沉淀物中加入第二细胞裂解液并混匀，然后，再经离心，收集沉淀，得到第二沉淀物，其中，所述第二细胞裂解液包括以下组分：
[0011]pH值为7.5～9的Tris
‑
HCl 0.01～0.05M，氯化钠0.1～0.2M、乙二胺四乙酸0.05～0.2M、SDS 0.8％～1.2％和蔗糖0.3～0.4M；
[0012](c)向第二沉淀物中加入蛋白酶K溶液并反复吹打，再加入SDS溶液进行处理，得到处理液；
[0013](d)向处理液中加入氯化钠溶液并混匀，离心，收集上清液；
[0014](e)向上清液中加入乙酸钠溶液和异丙醇并静置、离心，收集沉淀，得到第三沉淀物；
[0015](f)向第三沉淀物中加入乙醇溶液并混匀、离心，收集沉淀，即得所述血液基因组DNA。
[0016]优选地，所述步骤(a)中，血液样本与第一细胞裂解液的体积比为1∶(1～5)。
[0017]优选地，所述步骤(a)中，离心转速为10000～12000r/min，离心时间为4～6min。
[0018]优选地，所述步骤(b)中，第二细胞裂解液与血液样本的体积比为(1～3)∶1。
[0019]优选地，所述步骤(b)中，离心转速为10000～12000r/min，离心时间为4～6min。
[0020]优选地，所述步骤(c)中，蛋白酶K溶液浓度为5～15mg/ml，蛋白酶K溶液与血样样本的体积比为1∶(10～100)；SDS溶液浓度为1％～2％，SDS溶液与血液样本的体积比为1∶(3～5)。
[0021]优选地，所述步骤(c)中，处理温度为50～60℃，时间为20～30min。
[0022]优选地，所述步骤(d)中，氯化钠溶液的浓度为5.5～6mol/L；离心转速10000～12000r/min，时间为4～6min。
[0023]优选地，所述步骤(e)中，乙酸钠溶液的pH值为4～6，乙酸钠溶液与上清液的体积比为1∶(8～12)；异丙醇添加至体积浓度为60％～70％；
[0024]静置时间为30～40min；离心转速为10000～12000r/min，离心时间为4～6min。
[0025]优选地，所述步骤(f)中，乙醇溶液的体积浓度为60％～70％。
[0026]与现有技术相比，本专利技术的有益效果至少包括：
[0027]本专利技术提取方法通过特定工艺以及裂解液等试剂的限定，能够充分破坏血液样本中的细胞，促进DNA的对血液样本进行处理，能够充分提取血液样本中的DNA并有效去除杂质，进而能够提高DNA的提取率和纯度，为后续实验提供质量保障。
具体实施方式
[0028]下面将结合实施例对本专利技术技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0029]需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域技术人员所理解的通常意义。
[0030]实施例1
[0031]本实施例为一种血液基因组DNA的提取方法，所述提取方法包括如下步骤：
[0032](a)获取血液样本，按照血液样本与第一细胞裂解液的体积比为1∶1，向血液样本中加第一细胞裂解液并混匀，然后，再以10000r/min离心6min，收集沉淀，得到第一沉淀物，其中，所述第一细胞裂解液包括以下组分：
[0033]0.3M的氯化铵、0.01M的碳酸氢钾、1.5％(v/v)的曲拉通100、0.05M的乙二胺四乙酸；
[0034](b)按照第二细胞裂解液与血液样本的体积比为1∶1，向第一沉淀物中加入第二细胞裂解液并混匀，然后，再以10000r/min离心6min，收集沉淀，得到第二沉淀物，其中，所述第二细胞裂解液包括以下组分：
[0035]pH值为7.5的Tris
‑
HCl 0.01M，氯化钠0.2M、乙二胺四乙酸0.05M、SDS1.2％和蔗糖0.3M；
[0036](c)按照蛋白酶K溶液与血样样本的体积比为1∶10，向第二沉淀物中加入15mg/ml蛋白酶K溶液并反复吹打，再按照SDS溶液与血液样本的体积比为1∶3加入2％的SDS溶液在50℃处理30min，得到处理液；
[0037](d)向处理液中加入5.5mol/L的氯化钠溶液并混匀，以10000r/min离心6min，收集上清液；
[0038](e)按照乙酸钠溶液与上清液的体积比为1∶8，向上清液中加入pH值为4的乙酸钠溶液并加入异丙醇至体积浓度为70％，然后静置30min、10000r/min离心6min，收集沉淀，得到第三沉淀物；
[0039](f)向第三沉淀物中加入70％乙醇溶液并混匀、离心，收集沉淀，即得所述血液基因组DNA。
[0040]实施例2
[0041]本实施例为一种血液基因组DNA的提取方法，所述提取方法包括如下步骤：
[0042](a)获取血液样本，按照血液样本与第一细胞裂解液的体积比为1∶5，向血液样本中加第一细胞裂解液并混匀，然后，再以12000r/min离心4min，收集沉淀，得到第一沉淀物，其中，所述第一细胞裂解液包括以下组分：
[0043]0.5M的氯化铵、0.2M的碳酸氢钾、0.5％(v/v)的曲拉通100、0.001M的乙二胺四乙酸；
[0044](b)按照第二细本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种血液基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)获取血液样本，向血液样本中加第一细胞裂解液并混匀，然后，再经离心，收集沉淀，得到第一沉淀物，其中，所述第一细胞裂解液包括以下组分：0.3～0.5M的氯化铵、0.01M～0.2M的碳酸氢钾、0.5～1.5％(v/v)的曲拉通100、0.001～0.05M的乙二胺四乙酸；(b)向第一沉淀物中加入第二细胞裂解液并混匀，然后，再经离心，收集沉淀，得到第二沉淀物，其中，所述第二细胞裂解液包括以下组分：pH值为7.5～9的Tris
‑
HCl 0.01～0.05M，氯化钠0.1～0.2M、乙二胺四乙酸0.05～0.2M、SDS 0.8％～1.2％和蔗糖0.3～0.4M；(c)向第二沉淀物中加入蛋白酶K溶液并反复吹打，再加入SDS溶液进行处理，得到处理液；(d)向处理液中加入氯化钠溶液并混匀，离心，收集上清液；(e)向上清液中加入乙酸钠溶液和异丙醇并静置、离心，收集沉淀，得到第三沉淀物；(f)向第三沉淀物中加入乙醇溶液并混匀、离心，收集沉淀，即得所述血液基因组DNA。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(a)中，血液样本与第一细胞裂解液的体积比为1∶(1～5)。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(a)中，离心转速为10000～12000r/m...
【专利技术属性】
技术研发人员：张向阳，初国海，刘济忠，屈阳，钟瑶，
申请(专利权)人：深圳东亿医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：
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