一种分离植物低分子量RNA的方法技术

本发明专利技术属于分离植物低分子量RNA技术领域，公开了一种分离植物低分子量RNA的方法，本发明专利技术采用裂解植物组织的细胞壁和细胞膜，释放内含物并去除多酚物质和多糖物质；去除蛋白质、DNA和大分子量RNA，在RNA上清液中加入1/4体积的25％～31％聚乙二醇6000(PEG6000)溶液，混匀后冰浴31min，5℃，13000rpm离心11min；将离心管中的上清液转移至新的离心管中，加入1/3体积的无水乙醇，混匀后5℃，13000rpm离心6min，从而实现DNA和大分子量RNA的去除，分离出植物低分子量RNA。本发明专利技术通过聚乙二醇制备方法可以制备纯度较高的聚乙二醇，从而大大提高分离植物低分子量RNA的效率；同时，通过氯化钠制备方法可以制备高质量氯化钠，大大提高分离植物低分子量RNA效果。离植物低分子量RNA效果。离植物低分子量RNA效果。

【技术实现步骤摘要】
一种分离植物低分子量RNA的方法


[0001]本专利技术属于分离植物低分子量RNA
，尤其涉及一种分离植物低分子量RNA的方法。

技术介绍

[0002]核糖核酸(缩写为RNA，即Ribonucleic Acid)，存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶)，其中，U(尿嘧啶)取代了DNA中的T(胸腺嘧啶)。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成；然而，现有分离植物低分子量RNA的方法采用的聚乙二醇纯度不高，影响分离植物低分子量RNA的效率；同时，采用的氯化钠质量差，导致分离植物低分子量RNA效果差。
[0003]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：
[0004](1)现有分离植物低分子量RNA的方法采用的聚乙二醇纯度不高，影响分离植物低分子量RNA的效率。
[0005](2)采用的氯化钠质量差，导致分离植物低分子量RNA效果差。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种分离植物低分子量RNA的方法。
[0007]本专利技术是这样实现的，一种分离植物低分子量RNA的方法包括：
[0008]步骤一，裂解植物组织的细胞壁和细胞膜，释放内含物并去除多酚物质和多糖物质；
[0009]步骤二，去除蛋白质、DNA和大分子量RNA，在RNA上清液中加入1/4体积的25％～31％聚乙二醇6000(PEG6000)溶液，混匀后冰浴31min，5℃，13000rpm离心11min；
[0010]步骤三，将离心管中的上清液转移至新的离心管中，加入1/3体积的无水乙醇，混匀后5℃，13000rpm离心6min，从而实现DNA和大分子量RNA的去除，分离出植物低分子量RNA。
[0011]进一步，所述裂解植物组织的细胞壁和细胞膜，释放内含物并去除多酚物质和多糖物质方法：
[0012]用RNA提取缓冲液对所述植物组织进行抽提，取RNA上清液；
[0013]所述RNA提取缓冲液由缓冲液A和β
‑
巯基乙醇组成，缓冲液A和β
‑
巯基乙醇的体积比100∶101∶9；
[0014]每1升所述缓冲液A由200mL STE缓冲液、41g十二烷基磺酸钠、31g聚乙烯吡咯烷酮、151mL乙醇和水组成，用水补足体积，pH值为8；
[0015]每200mL所述STE缓冲液由7.0g三羟甲基氨基甲烷、9.2g氯化钠、4.7g乙二胺四乙酸和水组成，用水补足体积，pH值为8.0。
[0016]进一步，所述聚乙二醇制备方法如下：
[0017](1)配置反应釜工作参数，向一反应釜中加入二缩三乙二醇和催化剂，密闭所述反应釜，氮气置换并升温至111℃后向所述反应釜中加入环氧乙烷，
[0018](2)控制所述反应釜压力不超过0.5MPa进行乙氧基化反应；待反应完成后，冷却至61℃，用乳酸中和反应所得物至中性，制得所述聚乙二醇。
[0019]进一步，所述聚乙二醇的重均分子量为300～800；
[0020]所述乙氧基化反应的反应温度为111℃～161℃；
[0021]所述乙氧基化反应的反应时间为2～7小时；
[0022]所述乙氧基化反应的反应压力为0.3～0.7MPa；
[0023]所述催化剂选自碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属氢化物、碱金属醇盐、碱土金属醇盐中的一种或几种。
[0024]进一步，所述催化剂的用量为0.3～6wt％，以所述起始剂的重量为基准。
[0025]进一步，所述氯化钠制备方法如下：
[0026]1)将煤矸石除杂并破碎成细小颗粒，与盐酸溶液以1:3的质量比反应于耐腐蚀容器中；
[0027]2)过滤由所述煤矸石与盐酸溶液生成的改性氯化铝、氯化铁及少量的氯化物混合溶液，得到滤饼及滤液，并将所述滤液用氢氧化铝进行净化，产生改性氯化铝及氢氧化物沉淀；
[0028]3)过滤所述用氢氧化铝净化的滤液，得到含有氢氧化物的滤饼及改性氯化铝澄清溶液；将所述改性氯化铝澄清溶液与碳酸钠以1:2的质量比反应于耐腐蚀容器中，过滤由所述改性氯化铝澄清溶液与碳酸钠生成的氢氧化铝沉淀与氯化钠溶液；将过滤后的氯化钠溶液经减压蒸馏、冷却结晶得到氯化钠晶体。
[0029]进一步，所述煤矸石的主要成分为三氧化二铝及二氧化硅；
[0030]所述滤饼主要成分为二氧化硅，可用于含有硅的产品研发；
[0031]所述过滤所述用氢氧化铝净化的滤液，得到含有氢氧化物的滤饼及改性氯化铝澄清溶液之后还包括：
[0032]将所述含有氢氧化物的滤饼与盐酸溶液以1:1.02的质量比反应；
[0033]过滤由所述含有氢氧化物的滤饼与盐酸溶液生成的以氯化铁为主的氯化物溶液，得到杂质及含有氯化铁的滤液；
[0034]将所述含有氯化铁的滤液用氢氧化铁净化，得到氯化铁溶液及氢氧化物沉淀，并将过滤后的氯化铁溶液与碳酸钠以1:0.98的质量比反应于耐腐蚀容器中；
[0035]过滤由所述氯化铁溶液与碳酸钠反应生成的氢氧化铁沉淀及氯化钠溶液，并将过滤后的氯化钠溶液经减压蒸馏、冷却结晶得到氯化钠晶体；
[0036]所述含有氢氧化物的滤饼的主要成分为氢氧化铁。
[0037]进一步，所述三羟甲基氨基甲烷的制备方法包括如下步骤：
[0038]步骤A：三羟甲基硝基甲烷的制备：向反应釜中加入改性甲醇、开启搅拌，加入多聚甲醛、碱、溶解搅拌41分钟至溶液无色透明；缓慢滴加硝基甲烷，滴加硝基甲烷的温度控制在36℃，滴加时间控制在1
‑
1.5小时，滴加完毕后控制反应温度为36℃，反应4
‑
6小时，加草酸调节pH为8
‑
9；
[0039]步骤B：三羟甲基氨基甲烷粗品的制备：将反应液打入加氢釜中，加入改性甲醇、催化剂，控制温度36℃，压力1.3
‑
1.5Mpa，加氢3
‑
3小时；加氢完毕后，将反应液打入脱色釜中，升温至56℃，加入活性炭脱色，过滤除去活性炭，降温至0℃
±
3℃，析出晶体，过滤，得到三羟甲基氨基甲烷粗品；
[0040]步骤C：精制：将得到的三羟甲基氨基甲烷粗品、混合溶剂加入精制釜中，升温至84℃，搅拌1.5小时，降温至0℃
±
3℃，析出晶体，过滤，干燥得到三羟甲基氨基甲烷；
[0041]所述的步骤A中，所述的多聚甲醛与硝基甲烷的重量比为(1.70
‑
1.83):1；
[0042]所述的步骤A中，所述的改性甲醇与硝基甲烷的重量比为(1.70
‑
1.95):1；
[0043]所述的步骤A中，所述的碱与硝基甲烷的重量比为(4
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离植物低分子量RNA的方法，其特征在于，所述分离植物低分子量RNA的方法包括以下步骤：步骤一，裂解植物组织的细胞壁和细胞膜，释放内含物并去除多酚物质和多糖物质；步骤二，去除蛋白质、DNA和大分子量RNA，在RNA上清液中加入1/4体积的25％～31％聚乙二醇6000(PEG6000)溶液，混匀后冰浴31min，5℃，13000rpm离心11min；步骤三，将离心管中的上清液转移至新的离心管中，加入1/3体积的无水乙醇，混匀后5℃，13000rpm离心6min，从而实现DNA和大分子量RNA的去除，分离出植物低分子量RNA。2.如权利要求1所述分离植物低分子量RNA的方法，其特征在于，所述裂解植物组织的细胞壁和细胞膜，释放内含物并去除多酚物质和多糖物质方法：用RNA提取缓冲液对所述植物组织进行抽提，取RNA上清液；所述RNA提取缓冲液由缓冲液A和β
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巯基乙醇组成，缓冲液A和β
‑
巯基乙醇的体积比100∶101∶9；每1升所述缓冲液A由200mL STE缓冲液、41g十二烷基磺酸钠、31g聚乙烯吡咯烷酮、151mL乙醇和水组成，用水补足体积，pH值为8；每200mL所述STE缓冲液由7.0g三羟甲基氨基甲烷、9.2g氯化钠、4.7g乙二胺四乙酸和水组成，用水补足体积，pH值为8.0。3.如权利要求1所述分离植物低分子量RNA的方法，其特征在于，所述聚乙二醇制备方法如下：(1)配置反应釜工作参数，向一反应釜中加入二缩三乙二醇和催化剂，密闭所述反应釜，氮气置换并升温至111℃后向所述反应釜中加入环氧乙烷，(2)控制所述反应釜压力不超过0.5MPa进行乙氧基化反应；待反应完成后，冷却至61℃，用乳酸中和反应所得物至中性，制得所述聚乙二醇。4.如权利要求3所述分离植物低分子量RNA的方法，其特征在于，所述聚乙二醇的重均分子量为300～800；所述乙氧基化反应的反应温度为111℃～161℃；所述乙氧基化反应的反应时间为2～7小时；所述乙氧基化反应的反应压力为0.3～0.7MPa；所述催化剂选自碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属氢化物、碱金属醇盐、碱土金属醇盐中的一种或几种。5.如权利要求3所述分离植物低分子量RNA的方法，其特征在于，所述催化剂的用量为0.3～6wt％，以所述起始剂的重量为基准。6.如权利要求2所述分离植物低分子量RNA的方法，其特征在于，所述氯化钠制备方法如下：1)将煤矸石除杂并破碎成细小颗粒，与盐酸溶液以1:3的质量比反应于耐腐蚀容器中；2)过滤由所述煤矸石与盐酸溶液生成的改性氯化铝、氯化铁及少量的氯化物混合溶液，得到滤饼及滤液，并将所述滤液用氢氧化铝进行净化，产生改性氯化铝及氢氧化物沉淀；3)过滤所述用氢氧化铝净化的滤液，得到含有氢氧化物的滤饼及改性氯化铝澄清溶液；将所述改性氯化铝澄清溶液与碳酸钠以1:2的质量比反应于耐腐蚀容器中，过滤由所述
改性氯化铝澄清溶液与碳酸钠生成的氢氧化铝沉淀与氯化钠溶液；将过滤后的氯化钠溶液经减压蒸馏、冷却结晶得到氯化钠晶体。7.如权利要求6所述分离植物低分子量RNA的方法，其特征在于，所述煤矸石的主要成分为三氧化二铝及二氧化硅；所述滤饼主要成分为二氧化硅，可用于含有硅的产品研发；所述过滤所述用氢氧化铝净...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明，张洁，叶剑秋，肖鑫辉，李开绵，陆小静，薛茂富，韦卓文，万仲卿，符乃方，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：