【技术实现步骤摘要】
一种防治立枯丝核菌病害的dsRNA纳米农药的制备及其应用
[0001]本专利技术涉及一种防治立枯丝核菌病害的dsRNA纳米农药的制备及其应用,涉及植物病害的生物防治,属于植物保护学科中的生物防治研究与应用领域。
技术介绍
[0002]立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)是一种寄主多、分布范围广、腐生性强的土传病原真菌,由其引起的病害发生受环境影响较大,常用的农业和物理措施对其防效并不理想,生产上主要依靠化学药剂,但过量过频使用化学药剂易造成非靶标性杀灭及“3R”问题。因此,研发新的病害防治药剂和方法是当前立枯丝核菌病害研究的重要任务。
[0003]RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种成熟的病原真菌基因功能研究和农作物病害防治方法,但以往基于RNAi的技术均建立在转基因基础之上,而许多植物和病原真菌很难被遗传操作,再加上世界各国对转基因农产品接受度低,因此这些方法的安全性和广适性也一直倍受质疑。最近发展起来的喷施诱导的基因沉默技术(Spray
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induced ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种防治立枯丝核菌病害的dsRNA纳米农药的制备方法,其特征是,包括以下步骤:步骤1):通过体外转录合成靶向立枯丝核菌多聚半乳糖醛酸酶基因RsPG1、过氧化氢酶基因RsCAT和钙调神经磷酸酶敏感的锌指蛋白基因RsCRZ13个基因的组合RsPG1
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RsCAT
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RsCRZ1
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dsRNA,简称RsPCC
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dsRNA片段,设带有同源臂的引物将RsPG1、RsCAT、RsCRZ1三个基因串联起来;其中:RsCAT
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dsF引物序列为:acagcatctcgaaccgacactgctcgcgaccc;RsCAT
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dsR引物序列为:tccgacagaacgagcccacttaaaggtatgtccagagt;RsPG1
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dsF引物序列为:acgggggacgagctccgggaaagggtatcacattcaa;RsPG1
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dsR引物序列为:gtcgcgagcagtgtcggttcgagatgctgtaggtatg;RsCRZ1
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dsF引物序列为:catacctttaagtgggctcgttctgtcggagatg;RsCRZ1
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dsR引物序列为:ccatgtcgactctagctcatgtcgcttgcagtcat;步骤2):利用引物对RsPG1
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dsT7F/RsCRZ1
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dsR和引物对RsPG1
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dsF/RsCRZ1
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dsT7R分别扩增出正义链5
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端带...
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