一种提取肝素钠样品中核酸的方法及组合物技术

本公开提供一种核酸提取方法及组合物，属于生物技术领域，具体涉及一种肝素钠样本中病毒核酸提取的方法及其组合物。本公开的方法利用降低裂解液和/或洗涤液中的乙醇含量有效提高了核酸扩增效率。高了核酸扩增效率。高了核酸扩增效率。

【技术实现步骤摘要】
一种提取肝素钠样品中核酸的方法及组合物


[0001]本公开属于核酸提取领域，具体涉及一种肝素钠样本中核酸提取的方法及其组合物。

技术介绍

[0002]肝素作为一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。临床上可用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等多种疾病的治疗。同时肝素作为公认的PCR强抑制剂，具有和核酸相近似的特性，会结合聚合酶活性位点抑制PCR。因此含肝素的血液、血浆等生物样品在PCR前需要通过不同的前处理方法来去除肝素带来的影响，防止假阴性的发生，或是要求病人提前终止肝素治疗，使其体内肝素含量降低。目前去除肝素的方法第一种是使用肝素酶消化，此类方法耗时较长，且商品化肝素酶价格较为昂贵，Langer等报道利用肝素酶系统用于体外治疗，使用肝素酶固定血液过滤器，通过酶降解实现100％去除肝素(Langer R,Linhardt RJ,Cooney CL,Klein M,Tapper D,Hoffberg SM,LarsenA.1982.An enzymatic system for removing heparin in extracorporeal therapy.Science.217:261
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263)。第二种是使用一些介质材料来吸附生物体液中的肝素，如Kaminski等人报道利用一种对于pH敏感的京尼平交联壳聚糖微球，可以从水中高效去除肝素，未来有可能应用于生物医学领域(Kaminski K,Zazakowny K,Szczubialka K,Nowakowska M.pH
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Sensitive genipin
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cross
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linked chitosan microspheres forheparinremoval.Biomacromolecules.2008；9:3127
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3132)，再如Baydemir等人报道利用分子印迹冷冻凝胶去除血浆中的肝素。第三种则是核酸纯化的方法，可在纯化过程中去除肝素杂质。如CN103952398A所示从肝素制品中提取基因组的方法，整体耗时仅需40min，与前述方法相比，大大缩短时间成本。此外前两种方法成本较高，耗时较长，独特的材料也无法被广泛应用，且这两种方法仅仅去除了样本中的肝素，若需样本中核酸还需要额外的核酸提取试剂盒。

技术实现思路

[0003]本公开的目的是提出一种可以快速从肝素钠血浆样本中提取病毒核酸的方法，通过特异性的裂解、结合、洗涤、漂洗体系，去除样本中所含有的多种杂质，特别是肝素钠。提取的产物可直接应用于PCR等多种下游应用，同时能够兼容含肝素钠样品在内的多种液体样本，为临床应用提供方便。
[0004]在第一方面，本公开提供一种液体组合物，所述液体组合物包含缓冲物质、变性剂、表面活性剂和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为20％
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35％。所述液体组合物用于裂解含有肝素钠的血浆样本中的病毒颗粒，释放出病毒DNA和/或RNA核酸。
[0005]在一些实施方案中，所述无水乙醇的体积分数为20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。
[0006]在一些实施方案中，所述缓冲物质选自三羟甲基氨基甲烷、3
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(N
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吗啡啉)丙磺酸
(即Mops)、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠中的至少一种。
[0007]在一些实施方案中，所述变性剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸盐、NaI、KI、尿素中的至少一种。
[0008]在一些实施方案中，所述表面活性剂选自Triton X
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100、吐温
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20、吐温
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80、NP
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40、SDS、CHAPS、脱氧胆酸钠、胆酸钠、甜菜碱、PEG8000中的至少一种、至少两种或至少三种。
[0009]在一些实施方案中，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷、异硫氰酸胍、吐温
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20、Triton X
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100和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为20％
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35％。在一些实施方案中，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为20mM、异硫氰酸胍浓度为2M、吐温
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20体积分数为1％、Triton X100体积分数为0.1％，所述无水乙醇的体积分数为24％
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32％。在一些实施方案中，所述无水乙醇的体积分数为20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。
[0010]在一些实施方案中，所述液体组合物还包含金属离子螯合剂。在一些实施方案中，所述金属离子螯合剂选自EDTA
·
2Na、EDTA
·
4Na、EDTA、柠檬酸钠、EGTA、HEDTA中的至少一种。在一些实施方案中，金属离子螯合剂为EDTA
·
2Na，其浓度为5mM。
[0011]在一些实施方案中，所述液体组合物还包含甜菜碱，所述甜菜碱的浓度为0.1mM。
[0012]在一些实施方案中，所述液体组合物还包含PEG8000，所述PEG8000的体积分数为0.005％。
[0013]在一些实施方案中，所述液体组合物的pH为7.0
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7.5。在一些实施方案中，所述液体组合物的pH为7.3。
[0014]在第二方面，本公开提供一种液体组合物，所述液体组合物包含缓冲物质、金属离子螯合剂、变性剂、表面活性剂和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为15％
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45％。所述液体组合物用于清除残留的蛋白质等杂质。
[0015]在一些实施方案中，所述无水乙醇体积分数为15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％或45％。
[0016]在一些实施方案中，所述缓冲物质选自三羟甲基氨基甲烷、3
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(N
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吗啡啉)丙磺酸(即Mops)、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠中的至少一种。
[0017]在一些实施方案中，所述金属离子螯合剂选自EDTA
·
2Na、EDTA
·
4Na、EDTA、柠檬酸钠、EGTA、HEDTA中的至少一种。在一些实施方案中，金属离子螯合剂为EDTA
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2Na，其浓度为10mM。
[0018]在一些实施方案中，所述变性剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸盐、NaI、KI、尿素中的至少一种。
[0019]在一些实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液体组合物，所述液体组合物包含缓冲物质、变性剂、表面活性剂和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为20％
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35％。2.如权利要求1所述的液体组合物，所述无水乙醇的体积分数为20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。3.如权利要求1所述的液体组合物，所述缓冲物质选自三羟甲基氨基甲烷、3
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(N
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吗啡啉)丙磺酸、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠中的至少一种。4.如权利要求1所述的液体组合物，所述变性剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸盐、NaI、KI、尿素中的至少一种。5.如权利要求1所述的液体组合物，所述表面活性剂选自Triton X
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100、吐温
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20、吐温
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80、NP
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40、SDS、CHAPS、脱氧胆酸钠、胆酸钠、甜菜碱、PEG8000中的至少一种、至少两种或至少三种。6.如权利要求1所述的液体组合物，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷、异硫氰酸胍、吐温
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20、Triton X
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100和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为20％
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35％。7.如权利要求6所述的液体组合物，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为20mM、异硫氰酸胍浓度为2M、吐温
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20体积分数为1％、Triton X100体积分数为0.1％，所述无水乙醇的体积分数为20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。8.如权利要求7所述液体组合物，所述液体组合物还包含金属离子螯合剂，所述金属离子螯合剂选自EDTA
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2Na、EDTA
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4Na、EDTA、柠檬酸钠、EGTA、HEDTA中的至少一种，优选地，金属离子螯合剂为EDTA
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2Na，其浓度为5mM。9.如权利要求8所述液体组合物，所述液体组合物还包含甜菜碱，所述甜菜碱的浓度为0.1mM。10.如权利要求9所述液体组合物，所述液体组合物还包含PEG8000，所述PEG8000的体积分数为0.005％。11.如权利要求1
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10任一项所述液体组合物，所述液体组合物的pH为7.0
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7.5，优选地，所述液体组合物的pH为7.3。12.一种液体组合物，所述液体组合物包含缓冲物质、金属离子螯合剂、变性剂、表面活性剂和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为15％
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45％。13.如权利要求12所述液体组合物，所述无水乙醇体积分数为15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％或45％。14.如权利要求12所述液体组合物，所述缓冲物质选自三羟甲基氨基甲烷、3
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(N
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吗啡啉)丙磺酸、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠中的至少一种；...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹林，聂俊伟，瞿志鹏，王丹凤，张雨，
申请(专利权)人：南京诺唯赞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：