【技术实现步骤摘要】
本公开涉及基因工程和酶工程领域，特别是涉及一种新型的碱性蛋白酶变体及其应用。
技术介绍
0、专利技术背景
1、在进入20世纪80年代后，随着科学技术的发展和环保意识的进一步增强，洗涤剂工业领域除了积极开发各种高效、温和的表面活性剂和助剂外，还会通过加入酶制剂来提高去污能力，根据酶制剂的不同一般可提高30％-60％，同时还能降低表面活性剂及三聚磷酸盐的用量。洗涤剂中的酶多为水解酶，其中，碱性蛋白酶是洗涤剂领域中应用最早，数量最多的一类水解酶。
2、碱性蛋白酶(alkaline protease)属于丝氨酸蛋白水解酶家族，具备典型的ser-his-asp催化三联体结构，可以在碱性条件下(ph为7～11)保持酶活力，并催化水解蛋白质。由于细菌碱性蛋白酶具有重要的工业应用价值，在商品酶的生产中占有相当大的份额，所以目前工业化生产的碱性蛋白酶多来自于枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱性芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等。
3、虽然在洗涤剂中添加碱性蛋白酶能显著提升洗涤效果，但是洗涤剂中的多种组分都会影响到碱性蛋白酶的活性，例如，漂白剂组分会氧化蛋白酶中蛋氨酸残基导致酶失活；洗涤剂中的无机盐(如三聚磷酸钠、碳酸钠、硼酸钠等)、烷基苯磺酸钠等活性物质的存在都会对酶活性产生不利影响。而细菌来源的野生型碱性蛋白酶在耐热性、耐表面活性剂、储藏稳定性等方面难以满足实际应用需求。目前商用的碱性蛋白酶，如诺维信公司的progressuno 100/100l、美国杜邦公司的p300等都是野生型蛋白酶的变
技术实现思路
1、第一方面，本公开提供碱性蛋白酶变体，其氨基酸序列与seq id no：29所示序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％或96％但小于100％的序列一致性，并且包含a)x9e、x42r、x199i、x256e、x69i、x139y、x141y、x206n和x134q的氨基酸取代；和b)选自x143q或x142n的氨基酸取代。
2、在一些实施方案中，所述变体还包含选自x15c、x16c、x102i、x209n、x218a、x250p、x258c或x264c中至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个氨基酸的取代。
3、在一些实施方案中，所述变体还包含选自x15c、x16c、x102i、x209n、x218a、x250p、x258c或x264c中一个、两个、三个、四个、五个或六个氨基酸的取代。
4、在一些实施方案中，所述变体包含a)s9e、n42r、v199i、l256e、t69i、s139y、t141y、s206n和e134q的氨基酸取代；和b)选自r143q或s142n的氨基酸取代。
5、在一些实施方案中，所述变体还包含选自a15c、a16c、v102i、a209n、t218a、s250p、g258c或a264c中至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个氨基酸的取代。
6、在一些实施方案中，所述变体还包含选自a15c、a16c、v102i、a209n、t218a、s250p、g258c或a264c中一个、两个、三个、四个、五个或六个氨基酸的取代。
7、在一些实施方案中，所述变体包含a)s9e、n42r、v199i、l256e、t69i、s139y、t141y、s206n、和e134q的取代；和b)选自r143q或s142n的氨基酸取代；和任选地c)选自下述任一的氨基酸取代组：
8、1)t218a；
9、2)a16c+a264c；
10、3)t218a+s250p；
11、4)a15c+t218a+g258c；
12、5)v102i+t218a+s250p；
13、6)v102i+a209n+t218a+s250p；
14、7)a16c+v102i+t218a+s250p+a264c；或
15、8)a15c+v102i+a209n+t218a+s250p+g258c。
16、其中，本公开所述的“任选的”或“任选地”是指接下来描述的事件或情况可发生或可不发生，并且该描述包括该事件发生的情况和该事件不发生的情况。
17、在一些实施方案中，所述变体的氨基酸序列包含seq id no：1-14中任一所示。在一些实施方案中，所述变体的氨基酸序列为seq id no：1-14中任一所示。本公开还提供一种变体，所述变体的氨基酸序列与seq id no：1所示序列相比具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或更高的序列一致性。在一些实施方案中，所述变体序列包含seq id no：1或由其组成。
18、在一些实施方案中，进一步的，所述变体还包含选自a15c、a16c、v102i、a209n、t218a、s250p、g258c或a264c中至少一个、至少两个、至少三个或至少四个氨基酸的取代。在一些实施方案中，进一步的，所述变体还包含选自a15c、a16c、v102i、a209n、t218a、s250p、g258c或a264c中的一个、两个、三个或四个氨基酸的取代。
19、在一些实施方案中，所述变体序列相对于seq id no：1，包含t218a的氨基酸取代；优选的，所述变体序列包含seq id no：2或由其组成。
20、在一些实施方案中，所述变体序列相对于seq id no：1，包含t218a和s250p的氨基酸取代；优选的，所述变体序列包含seq id no：3或由其组成。
21、在一些实施方案中，所述变体序列相对于seq id no：1，包含v102i、t218a和s250p的氨基酸取代；优选的，所述变体序列包含seq id no：4或由其组成。
22、在一些实施方案中，所述变体序列相对于seq id no：1，包含v102i、a209n、t218a和s250p的氨基酸取代；优选的，所述变体序列包含seq id no：5或由其组成。
23、在一些实施方案中，所述变体序列相对于seq id no：1，包含a16c和a264c的氨基酸取代；优选的，所述变体序列包含seq id no：11或由其组成。
24、在一些实施方案中，所述变体序列相对于seq id no：1，包含a15c、t218a和g258c的氨基酸取代；优选的，所述变体序列包含seq id no：12或由其组成。
25、本公开还提供一种变体，所述变体的氨基酸序列与seq id no：6所示序列相比具有至少95％、至少96％、至少97本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蛋白酶变体，其氨基酸序列与SEQ ID NO：29所示的序列具有至少90％但小于100％的序列一致性，并且该变体包含：
2.如权利要求1所述的变体，该变体包含：
3.如权利要求1或2所述的变体，该变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1-14中任一所示。
4.编码如权利要求1-3任一所述的蛋白酶变体的多核苷酸序列。
5.包含如权利要求1-3任一所述的蛋白酶变体多核苷酸序列的重组表达载体。
6.制备如权利要求1-3任一所述的蛋白酶变体的方法，包括：1)用如权利要求5所述的表达载体转化宿主细胞，并诱导宿主细胞表达蛋白酶变体；2)回收蛋白酶变体。
7.清洁或洗涤剂组合物，该组合物中包含至少一种如权利要求1-3中任一所述的蛋白酶变体。
8.如权利要求7所述的组合物，该组合物中还包含一种或多种辅助成分，和/或至少一种另外的酶。
9.如权利要求1-3中任一所述的蛋白酶变体或如权利要求7或8中所述的组合物在清洁或洗涤中的用途。
10.一种用于清洁或洗涤物品的方法，包括利用如权利要
...【技术特征摘要】
1.一种蛋白酶变体，其氨基酸序列与seq id no：29所示的序列具有至少90％但小于100％的序列一致性，并且该变体包含：
2.如权利要求1所述的变体，该变体包含：
3.如权利要求1或2所述的变体，该变体的氨基酸序列如seq id no：1-14中任一所示。
4.编码如权利要求1-3任一所述的蛋白酶变体的多核苷酸序列。
5.包含如权利要求1-3任一所述的蛋白酶变体多核苷酸序列的重组表达载体。
6.制备如权利要求1-3任一所述的蛋白酶变体的方法，包括：1)用如权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯速，刘哲民，吴冕，唐伟，张知慧，王朝玉，吴晓强，曹林，
申请(专利权)人：南京诺唯赞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。