三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法技术

本发明专利技术公开了三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法，步骤为样本解离，离心得到的单细胞沉淀用第一浓度的Ficoll重悬，将单细胞悬液缓慢地加入到装有第二浓度的Ficoll离心管中，使单细胞悬液与Ficoll分层；向上层加入PBS溶液，注意分层；进行密度梯度离心；取中间白膜层细胞加入含20％FBS的RPMI‑1640培养液的离心管；离心收集沉淀；加入含5％FBS的RPMI‑1640培养液进行重悬，即得分离纯化的单细胞悬液。该方法可以去除单细胞悬液中的碎片、去除死细胞、高线粒体比例的细胞，提高单细胞数据质量，在保证细胞类型稳定和细胞形态及细胞内RNA完整性的同时，显著提升回收细胞活率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于单细胞悬液处理，具体涉及三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法。

技术介绍

1、密度梯度离心在离心管内用一定的介质形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力场的作用使细胞分层、分离。早在20世纪70年代，boyum描述了一种使用密度梯度溶液从人血液中分离单个核细胞的离心方法，这种方法已被用于许多免疫学研究。密度梯度离心又可分为差速区带离心法和等密度区带离心法两种。差速区带离心法时当不同的颗粒间存在沉降速度差时，在一定的离心力作用下，颗粒各自以一定的速度沉降，在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法。等密度区带离心法是通过离心管中预先放置好梯度介质，样品加在梯度液面上通过离心形成区带的方法。随着密度梯度离心方法的不断发展现在广泛应用于细胞核和细胞器的分离如单细胞抽核分离细胞核和碎片，线粒体等细胞器分离等；蛋白纯化，用于不同蛋白的分离；病毒分离等。

2、单细胞转录组测序是在单细胞水平对转录组进行测序的一项新技术，可发现细胞群体中真正起作用的细胞，特别适合对高度异质性的干细胞、肿瘤细胞及胚胎发育早期的细本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法，其特征在于，所述Ficoll的第一浓度小于第二浓度，第一浓度和第二浓度范围为1.050g/mL-1.090g/mL。

3.根据权利要求1所述的三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法，其特征在于，步骤(5)中密度梯度离心的条件是400-600g，25-35min，4℃，升速：9，降速：1。

4.根据权利要求1所述的三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法，其特征在于，步骤(7)中离心清洗的条件是400-60...

【技术特征摘要】

1.三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法，其特征在于，所述ficoll的第一浓度小于第二浓度，第一浓度和第二浓度范围为1.050g/ml-1.090g/ml。

3.根据权利要求1所述的三层密度梯度离心分离纯化单细胞悬液的方法，其特征在于，步骤(5)中密度梯度离...

【专利技术属性】
技术研发人员：俞陈毅，李璐璐，郎秋蕾，罗伦，王佳铖，
申请(专利权)人：杭州联川生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：