【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体涉及一种检测日本蟳(charybdis japonica)蟹奴病的引物对及其应用
技术介绍
1、日本蟳蟹奴病是水产动物日本蟳(charybdis japonica)的一种常见的具有严重危害的寄生虫病，对寄主蟹的生长、生理和行为等方面损伤严重，如患病蟹生长缓慢无法正常蜕壳，肝胰腺病变、生殖系统发育萎缩等，大量患病蟹丧失繁殖能力和食用价值，危害种群繁育和产业发展。
2、日本蟳蟹奴寄生过程为首先钻入蟹体内生长，在寄主蟹体内各组织中生成大量分支状内体结构吸收营养，几周后在寄主蟹下腹部位的内体破壳而出生成圆球形外体，为日本蟳蟹奴的生殖系统。目前日本蟳是否感染蟹奴病仅能通过检查日本蟳腹部是否存在蟹奴外体结构来判断，存在严重滞后性。在日本蟳感染蟹奴病初期，寄主蟹体内存在日本蟳蟹奴内体，但蟹奴外体尚未形成时，难以通过临床诊断确诊。
3、综上，目前本领域缺乏对日本蟳蟹奴病早期检测的准确方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供检测日本蟳蟹奴病的引物和应用方法。本专利技术提供的引物检测日本蟳蟹奴内体的灵敏度高、特异性强，能够准确检测出患有日本蟳蟹奴病的寄主蟹肝胰腺中生长的蟹奴内体。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、本专利技术提供了一种检测日本蟳蟹奴病的引物对，所述引物对检测日本蟳蟹奴nd4和/或nd5基因，nd4基因的核苷酸序如seq id no.1所示，nd5基因的核苷酸序如seq idno.
4、优选的，检测日本蟳蟹奴nd4基因的引物对为nd4-f和nd4-r，其序列如seq idno.3、4所示。
5、优选的，检测日本蟳蟹奴nd5基因的引物对为nd5-f和nd5-r，其序列如seq idno.5、6所示。
6、本专利技术还提供了一种检测日本蟳蟹奴病的pcr体系，所述pcr体系包含上述引物对。
7、优选的，所述pcr体系还包括pcr mix和dd水。
8、优选的，所述pcr体系还包括阳性对照样本和阴性对照样本。
9、优选的，所述pcr体系的pcr反应中退火温度为51℃-59℃。
10、优选的，所述pcr体系的pcr反应中退火温度为55℃。
11、优选的，所述pcr反应扩增程序为：预变性95℃，5min；变性95℃，30s；退火51℃-59℃，30s；延伸72℃，30s；终延伸72℃，7min；其中，变性、退火和延伸为35个循环。
12、本专利技术还提供了上述引物对和pcr体系在检测日本蟳蟹奴病中的应用。
13、有益效果：
14、本专利技术提供了针对日本蟳蟹奴病的特异性基因片段nd4和nd5的引物对，可以用于日本蟳蟹奴病的检测。引物对nd4-f/r和nd5-f/r具有特异性、灵敏性良好的优点。
15、本专利技术建立了相关检测方法，通过pcr检测，可以快速准确地检测日本蟳蟹奴病的感染情况，使日本蟳蟹奴病的检出率极大提高，诊断更精确，具有广阔的应用前景，对于日本蟳蟹奴病的防控和水产健康养殖都具有重要意义。
16、本专利技术的特异性实验结果表明该本专利技术的引物对只在日本蟳蟹奴病中有特异性片段，而与其他常见的蟹奴病、细菌均无交叉反应，具有良好的特异性。灵敏度实验表明，该第一引物nd4-f/r检测日本蟳蟹奴病的最低限度为16.251个/μl，该第二引物nd5-f/r检测日本蟳蟹奴病的最低限度为7.759个/μl具有良好的敏感性。
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1.一种检测日本蟳蟹奴病的引物对，其特征在于，所述引物对检测日本蟳蟹奴ND4和/或ND5基因，ND4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，ND5基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述检测日本蟳蟹奴ND4基因的引物对为ND4-F和ND4-R，其序列如SEQ ID NO.3、4所示。
3.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，检测日本蟳蟹奴ND5基因的引物对为ND5-F和ND5-R，其序列如SEQ ID NO.5、6所示。
4.一种检测日本蟳蟹奴病的PCR体系，其特征在于，所述PCR体系包含权利要求1-3所述引物对。
5.根据权利要求4所述的PCR体系，其特征在于，所述PCR体系还包括PCRMix和dd水。
6.根据权利要求4所述的PCR体系，其特征在于，所述PCR体系还包括阳性对照样本和阴性对照样本。
7.根据权利要求4所述的PCR体系，其特征在于，所述PCR体系的PCR反应中退火温度为51℃-59℃。
8.根据权利要求7所述的PCR
9.根据权利要求4所述的PCR体系，其特征在于，所述PCR体系的PCR反应扩增程序为：预变性95℃，5min；变性95℃，30S；退火51℃-59℃，30s；延伸72℃，30S；终延伸72℃，7min；其中，变性、退火和延伸为35个循环。
10.权利要求1-3所述引物对或权利要求4-9所述PCR体系在检测日本蟳蟹奴病中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测日本蟳蟹奴病的引物对，其特征在于，所述引物对检测日本蟳蟹奴nd4和/或nd5基因，nd4基因的核苷酸序列如seq id no.1所示，nd5基因的核苷酸序列如seq idno.2所示。
2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述检测日本蟳蟹奴nd4基因的引物对为nd4-f和nd4-r，其序列如seq id no.3、4所示。
3.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，检测日本蟳蟹奴nd5基因的引物对为nd5-f和nd5-r，其序列如seq id no.5、6所示。
4.一种检测日本蟳蟹奴病的pcr体系，其特征在于，所述pcr体系包含权利要求1-3所述引物对。
5.根据权利要求4所述的pcr体系，其特征在于，所述pcr体系还包括pc...
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