【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于样本处理，具体涉及一种用于rna提取的皮肤样本处理方法。
技术介绍
1、rna最早由friedrich miescher于1869年在细胞核中发现，被称作“nuclein”(中译名为“核素”)。19世纪后半叶，科学家们不断深入探索，将其与rna和蛋白质区别开来，最终定名为rna(ribonucleic acid)。随后，诺贝尔奖获得者albrecht kossel纯化得到rna样本。以此为基础，rna的化学结构组成被逐步揭示，其由核糖、磷酸和碱基所构成的核糖核苷酸通过磷酸二酯键缩合而成。不同rna分子中腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶等碱基的排列顺序不同。rna化学结构的确定为其生物学功能探讨奠定了坚实基础。20世纪中后期，与蛋白质合成密切相关的信使rna(message rna，mrna)、转运rna(transfer rna，trna)和核糖体rna(ribosome rna，rrna)分别被鉴定出来，不同类型的rna及其序列结构在体内、外的合成方式得以解明，而发现mrna碱基排列顺序决定氨基酸序列的对应关系使人们认识到，rna是基因表达和生命遗传的关键载体分子。而在真核生物中，rrna常被分为四类：5srrna、5.8srrna、18srrna和28srrna。
2、众所周知，完整的rna是包括pcr在内的许多分子生物学技术的主要步骤，但rna是一种非常不稳定的分子，对普遍存在的rnases降解极为敏感。高质量的rna作为转录调控研究的基础由为重要。rna质量的评价常见有三个指标，分别为纯度、浓度和
3、目前国内外已有的提取rna的方法多种多样，例如美国科学家chomzynskin p所专利技术的酸酚-异硫氰酸胍-氯仿法，常用试剂为trizol法商业试剂盒。后续rna纯化步骤又分为离心沉淀法、过柱法、磁珠捕获法等。trizol方法使用的组织类型及其广泛，可以处理各类复杂的动物样本。但是，由于前处理的差异导致提取的rna质量无法满足后续实验的开展，例如皮肤、耳根、阴道、阴茎体等类皮肤组织样本经液氮冷冻后，质地厚实坚硬，富含脂肪细胞、胶原蛋白以及细胞含量低等，使用普通研钵方法无法完全破碎组织，导致后续提取rna质检下降，所以解决组织破碎问题成为关键。
4、在动物样本中，山羊、牛、猪类皮肤及类皮肤样本质地尤为坚硬，其中以猪皮肤样本最为坚硬。如果能解决猪类样本皮肤破碎问题，是提取该类组织的关键步骤。
5、常见的组织破碎方法分为液氮研钵法、机械破碎法，机械破碎又分为手持型与仪器型，手持型一般无法保证环境处于较低温度，匀浆时产生一定的热量，导致rna降解，此外组织破碎能力较弱，处理一般的动物脏器较为合适。仪器破碎又分为冷冻类，液氮类。由于皮肤类样本坚硬，需要更大的冲击力，更易摩擦产生热量使rna降解，因此需要开发一种工艺流程解决该问题。
技术实现思路
1、为了解决上述问题中的至少一种，本专利技术提供了一种用于rna提取的皮肤样本处理方法，经过该方法处理过的皮肤样本，经提取操作后能够得到高质量的rna，可用于各类分子生物学技术检测。本方法简单快速，重复性好，无需额外成本投入，并且可适用于市场各类提取试剂盒后续提取。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用了如下技术手段：
3、本专利技术提供了一种用于rna提取的皮肤样本处理方法，包括如下步骤：
4、(1)皮肤样本采用液氮速冻保存；
5、(2)转移样本至磨样管中，磨样管中添加2-3颗5mm研磨珠，磨样管置于干冰上预冷；
6、(3)含有样本的磨样管转移至液氮中，速冻25-35min；
7、(4)打开液氮研磨仪，设置液氮预冷时间为5-60s，破碎频率为30-60hz，时间为30-100s，破碎循环数为1-5个，间歇时间为10-30s；
8、(5)使用液氮预冷的称量勺，取出管内粉末至装有0.5-1ml裂解液的离心管中，快速涡旋混匀，放置冰上2-10min；离心后转移上清至新的离心管中；
9、(6)以步骤(5)中的上清为rna提取样本，对其提取rna。
10、在本专利技术的一些实施方案中，步骤(1)中，保存后的样本用组织滤纸吸干水分后，剪成小碎块，样本投入量为50-200mg。
11、在本专利技术的一些实施方案中，步骤(2)中，磨样管为10ml磨样管。
12、在本专利技术的一些实施方案中，步骤(5)中，离心条件为：4℃10000-12000rpm离心8-15min。
13、在本专利技术的一些实施方案中，步骤(6)中对样本提取rna采用柱式提取法，包括如下步骤：
14、在trizol中加入氯仿，涡旋混匀，室温下静置3-5min；
15、4℃10000-12000rpm离心5-10min，转移上清至新的离心管中；
16、加入异丙醇，涡旋混匀，瞬离后转移液体至过滤柱上；
17、常温离心，去下清，加入漂洗液1；
18、常温离心，柱中加入dnase i混合液，室温下孵育10-20min；
19、加入漂洗液1，常温离心，去下清；
20、加入漂洗液2，常温离心，重复此步骤1次；
21、去下清，常温离心；使用50μl无核酸酶水溶解，常温离心回收提取得到的rna溶液。
22、本专利技术的有益效果
23、相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种动物类皮肤样本处理方法，该方法简单快速，能在较短的时间内完成组织破碎，实验机械化，但是不需要昂贵的仪器设备，减少人为失误，重复性好，可实现流水线操作，提高生产效率，通量高，一次可同时操作24个样本，无需额外成本投入；经该方法处理后的样本可适用于市场各类提取试剂盒后续提取，并且rna提取质量高，提取得率高，可用于各类分子生物学技术检测，也适用与科研研究、产品检测。
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1.一种用于RNA提取的皮肤样本处理方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于RNA提取的皮肤样本处理方法，其特征在于：步骤(1)中，保存后的样本用组织滤纸吸干水分后，剪成小碎块，样本投入量为50-200mg。
3.根据权利要求1所述的一种用于RNA提取的皮肤样本处理方法，其特征在于：步骤(2)中，磨样管为10ml磨样管。
4.根据权利要求1所述的一种用于RNA提取的皮肤样本处理方法，其特征在于：步骤(5)中，离心条件为：4℃10000-12000rpm离心8-15min。
5.根据权利要求1所述的一种用于RNA提取的皮肤样本处理方法，其特征在于：步骤(6)中对样本提取RNA采用柱式提取法，包括如下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种用于rna提取的皮肤样本处理方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于rna提取的皮肤样本处理方法，其特征在于：步骤(1)中，保存后的样本用组织滤纸吸干水分后，剪成小碎块，样本投入量为50-200mg。
3.根据权利要求1所述的一种用于rna提取的皮肤样本处理方法，其特征在于：步骤(2...
【专利技术属性】
技术研发人员：林彬，郎秋蕾，钱海峰，王楠，
申请(专利权)人：杭州联川生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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