一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，包括如下步骤：取待检测样本置于破碎管中，破碎管中加入1粒大小3mm‑5mm的钢珠以及冰浴过的包含RIPA和PMSF的裂解液，冷冻研磨仪破碎，冰上裂解5‑20min，然后转移浑浊液至过滤柱纯化；利用蛋白质标准曲线测定纯化后的待测样本中蛋白质含量；测定后的待测样本采用蛋白稀释液稀释至0.5‑1mg/mL，蛋白投入量为2‑20μL；取稀释后样本投入孵育反应液中，孵育18‑22h，加入延伸扩增液，PCR扩增，取扩增产物与检测反应液混合，最后加入到检测芯片中进行蛋白质丰度检测。该方法方便快捷，能在较短的时间内分离纯化粪便蛋白质，适用于Olink方法检测蛋白丰度，检测样本体积较少，检测通量高，可检测低丰度蛋白。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测，具体涉及一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法。

技术介绍

1、粪便的四分之三是水分，其余四分之一是固体，固体物质大多是蛋白质、无机物、脂肪、未消化的食物纤维、脱了水的消化液残余、以及从肠道脱落的细胞和死掉的细菌，还有维生素k、维生素b。含有食物中不消化的纤维素、结缔组织、上消化道的分泌物，如粘液、胆色素、粘蛋白、消化液、消化道粘膜脱落的残片，上皮细胞和细菌。固体部分细菌最多可达50％，但大半细菌排出时己死亡。另外2～30％是含氮物质，10～20％是无机盐(钙、铁、镁)。脂肪占10～20％，有2种，分解的脂肪是食物未被吸收的，中性脂肪由细菌和上皮残片而来的。另有胆固醇、嘌呤基和少量维生素。

2、粪便钙卫蛋白(fecal calprotectin，fc)是一种钙和锌结合蛋白，可以被认为是中性粒细胞特异性的标志物，尽管在其他吞噬细胞中也发现了低水平的蛋白。粪便钙卫蛋白约占中性粒细胞胞浆蛋白的60％。当肠道发生炎症时，由于肠黏膜渗透性增加，使中性粒细胞渗透并释放钙卫蛋白，在粪便中可检测到钙卫蛋白，粪便钙卫蛋白的数量反映了参与炎症的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，所述检测包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，步骤S1中，破碎条件为：30Hz-60 Hz，时间为10s-60s，温度为-5℃～15℃。

3.根据权利要求2所述的一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，步骤S1中，破碎条件为：60Hz，时间为15s。

4.根据权利要求1所述的一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，所述裂解液中PMSF溶液40-60μL，RIPA溶液400-600μL，RIPA与PMSF的体积比为100：1。

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【技术特征摘要】

1.一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，所述检测包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，步骤s1中，破碎条件为：30hz-60 hz，时间为10s-60s，温度为-5℃～15℃。

3.根据权利要求2所述的一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，步骤s1中，破碎条件为：60hz，时间为15s。

4.根据权利要求1所述的一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，所述裂解液中pmsf溶液40-60μl，ripa溶液400-600μl，ripa与pmsf的体积比为100：1。

5.根据权利要求4所述的一种粪便样本中蛋白质丰度的检测方法，其特征在于，所述裂解液中pmsf溶液40μl，ripa溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：林彬，郎秋蕾，韩斐然，
申请(专利权)人：杭州联川生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：

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