鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的SSR引物和方法技术

本发明专利技术公开了一种鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的SSR引物和方法。所述SSR引物包括：第一对SSR引物序列：AGTGGGAGCAGGATT TGATG；CGAAGAGCTCCAATTCCAAG；第二对SSR引物序列：CGGC CAGAGATGATGAAGAT；CGCTCGAAATTAATCACCGT；第三对SSR引物序列：TGCTTTGTGAACTGAATGCC；ACCGTTCATATCTCCTCCC C；第四对SSR引物序列：CTGGTGGTGATGAAGTGGTG；GGAATCAA CCGCTTATGGAA。这几对引物单独或结合，可以将马银花、鹿角杜鹃、马银花和鹿角杜鹃杂交种明显地区分开，实现马银花、鹿角杜鹃、马银花和鹿角杜鹃杂交种的早期的、快速鉴定，鉴定准确率高。定准确率高。

【技术实现步骤摘要】
鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的SSR引物和方法


[0001]本专利技术涉及分子标记
，具体涉及一种鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的SSR引物和方法。

技术介绍

[0002]马银花Rhododendron ovatum和鹿角杜鹃Rhododendron latoucheae属于杜鹃花科Ericaceae杜鹃属Rhododendron马银花亚属subgen.Azaleastrum，常绿观赏花卉，适宜在园林中成片栽植。
[0003]目前，关于马银花和鹿角杜鹃的研究十分少，它们在市场上也少有人工栽培，未培育出新品种，属于未开发的状态，每个单株都具有自身的特异特征，有些在表型上可以用肉眼鉴别但耗时较长，有些在表型上无法通过肉眼鉴别，需借助分子标记技术等新技术进行鉴别。若能开发可以准确区分马银花、鹿角杜鹃及基于它们培育的杂交新品种的分子标记技术将有望实现从分子角度进行早期的、快速的品种鉴定。

技术实现思路

[0004]本专利技术从野生杜鹃花资源中选择马银花和鹿角杜鹃的优良单株，利用人工杂交的方法，首次成功培育出马银花和鹿角杜鹃的杂交种。马银花、鹿角杜鹃这两种杜鹃同属于马银花亚属，两者的杂交种进行3
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5年的栽培可开花，该马银花和鹿角杜鹃的杂交种在苗期与亲本(马银花、鹿角杜鹃)在表型上差别不大，后期形态特征上表现出与亲本有所不同，但还是要结合花、茎、叶、果实等各器官进行鉴定，才可以确定为杂交种，这种传统的品种鉴定方法往往需要等待幼苗长成成年植株后才能开展，经历的时间比较漫长。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的SSR(Simple Sequence Repeats，简单重复序列)引物，用于区分鉴定马银花、鹿角杜鹃、马银花和鹿角杜鹃杂交种，能够在展叶期实现这三种物种的准确区分，可快速的进行物种的早期鉴定。
[0005]一种鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的SSR引物，包括如下第一对SSR引物序列、第二对SSR引物序列、第三对SSR引物序列、第四对SSR引物序列中的一种或两种以上；
[0006]第一对SSR引物序列：
[0007]正向引物序列FPr1(5'
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3')：AGTGGGAGCAGGATTTGATG(SEQ IDNO：1)；
[0008]反向引物序列RPr1(5'
‑
3')：CGAAGAGCTCCAATTCCAAG(SEQ IDNO：2)；
[0009]第二对SSR引物序列：
[0010]正向引物序列FPr2(5'
‑
3')：CGGCCAGAGATGATGAAGAT(SEQ IDNO：3)；
[0011]反向引物序列RPr2(5'
‑
3')：CGCTCGAAATTAATCACCGT(SEQ IDNO：4)；
[0012]第三对SSR引物序列：
[0013]正向引物序列FPr3(5'
‑
3')：TGCTTTGTGAACTGAATGCC(SEQ IDNO：5)；
[0014]反向引物序列RPr3(5'
‑
3')：ACCGTTCATATCTCCTCCCC(SEQ IDNO：6)；
[0015]第四对SSR引物序列：
[0016]正向引物序列FPr4(5'
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3')：CTGGTGGTGATGAAGTGGTG(SEQ IDNO：7)；
[0017]反向引物序列RPr4(5'
‑
3')：GGAATCAACCGCTTATGGAA(SEQ IDNO：8)。
[0018]为了适用荧光检测器，所述SSR引物可引入不同颜色的荧光基团如6
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羧基荧光素(FAM)、六氯
‑6‑
甲基荧光素(HEX)、6
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羧基四甲基若丹明(TAMRA)、四氯
‑6‑
羧基荧光素(TET)等现有荧光基团中的一种或多种设计成荧光SSR标记引物。可选地，所述荧光SSR标记引物选用FAM荧光SSR标记引物、HEX荧光SSR标记引物、TAMRA荧光SSR标记引物、TET荧光SSR标记引物等中的一种。
[0019]所述荧光基团接入所述SSR引物的位置可按照本领域的现有技术，常规操作以FAM荧光SSR标记第一对引物序列为示例，包括以下引物序列：
[0020]正向引物序列FPr1(5'
‑
3')：FAM
‑
AGTGGGAGCAGGATTTGATG；
[0021]反向引物序列RPr1(5'
‑
3')：CGAAGAGCTCCAATTCCAAG。
[0022]本专利技术还提供了用所述SSR引物鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的方法，能够在展叶期对物种进行早期鉴定，无需等待较长的生长期，在生产上具有重要的意义，特别对该植物新品种权保护来说是一种有效方法。
[0023]采用所述SSR引物鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的方法，包括步骤：
[0024](1)提取各待测杜鹃个体嫩叶的DNA；
[0025](2)以步骤(1)提取的DNA作为DNA模板，采用所述SSR引物进行PCR扩增；
[0026](3)PCR扩增产物经毛细管电泳检测，获得各待测杜鹃个体的PCR扩增产物条带，根据各待测杜鹃个体的PCR扩增产物条带判定所属物种。
[0027]根据各待测杜鹃个体的PCR扩增产物条带判定所属物种的判定标准：
[0028]根据第一对SSR引物序列的电泳结果判断：PCR扩增产物条带长度在196bp的是马银花；PCR扩增产物条带长度在199bp的是鹿角杜鹃；PCR扩增产物条带长度在196bp和199bp的是马银花和鹿角杜鹃杂交种；
[0029]根据第二对SSR引物序列的电泳结果判断：PCR扩增产物条带长度在209bp的是马银花；PCR扩增产物条带长度在197bp的是鹿角杜鹃；PCR扩增产物条带长度在197bp和209bp的是马银花和鹿角杜鹃杂交种；
[0030]根据第三对SSR引物序列的电泳结果判断：PCR扩增产物条带长度在213bp的是马银花；PCR扩增产物条带长度在207bp的是鹿角杜鹃；PCR扩增产物条带长度在207bp和213bp的是马银花和鹿角杜鹃杂交种；
[0031]根据第四对SSR引物序列的电泳结果判断：PCR扩增产物条带长度在271bp的是马银花；PCR扩增产物条带长度在265bp和274bp的是鹿角杜鹃；PCR扩增产物条带长度在265bp和271bp的是马银花和鹿角杜鹃杂交种；PCR扩增产物条带长度在271bp和274bp的是马银花和鹿角杜鹃杂交种。
[0032]本专利技术杂交种包括马银花和鹿角杜鹃杂交种，例如以马银花为母本、以鹿角杜鹃为父本的马银花和鹿角杜鹃杂交种。
[0033]所述鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的SSR引物的获得方法，包括：以同亚属的刺毛杜鹃Rhodode本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定马银花、鹿角杜鹃及其杂交种的SSR引物，其特征在于，包括如下第一对SSR引物序列、第二对SSR引物序列、第三对SSR引物序列、第四对SSR引物序列中的一种或两种以上；第一对SSR引物序列：正向引物序列FPr1(5'
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3')：AGTGGGAGCAGGATTTGATG；反向引物序列RPr1(5'
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3')：CGAAGAGCTCCAATTCCAAG；第二对SSR引物序列：正向引物序列FPr2(5'
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3')：CGGCCAGAGATGATGAAGAT；反向引物序列RPr2(5'
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3')：CGCTCGAAATTAATCACCGT；第三对SSR引物序列：正向引物序列FPr3(5'
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3')：TGCTTTGTGAACTGAATGCC；反向引物序列RPr3(5'
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3')：ACCGTTCATATCTCCTCCCC；第四对SSR引物序列：正向引物序列FPr4(5'
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3')：CTGGTGGTGATGAAGTGGTG；反向引物序列RPr4(5'
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3')：GGAATCAACCGCTTATGGAA。2.根据权利要求1所述的SSR引物，其特征在于，所述SSR引物为荧光SSR标记引物。3.根据权利要求2所述的SSR引物，其特征在于，所述荧光SSR标记引物为FAM荧光SSR标记引物、HEX荧光SSR标记引物、TAMRA荧光SSR标记引物、TET荧光SSR标记引物中的一种。4.采用根...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨华，宋绪忠，余海珍，方向华，
申请(专利权)人：浙江省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：