通用型流感病毒全基因组扩增、富集、测序的引物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了检测或辅助检测流感病毒的引物组合物及其应用，属于生物技术领域。本发明专利技术提供检测或辅助检测流感病毒或扩增或辅助扩增流感病毒全基因组序列的组合物，所述组合物包括A型流感病毒的扩增引物对、B型流感病毒的扩增引物对、C型流感病毒的扩增引物对和D型流感病毒的扩增引物对；所述A型流感病毒的扩增引物对包括FluA

【技术实现步骤摘要】
通用型流感病毒全基因组扩增、富集、测序的引物组合物及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及检测或辅助检测流感病毒的引物组合物及其应用。

技术介绍

[0002]流行性感冒由流感病毒(Influenza virus,IV)引起，IV是一种具有高度传染性的病毒，属于正粘病毒科，基因组为单股负链分节段的RNA；当前，根据其核蛋白(Nucleoprotein,NP)和基质蛋白(Matrix 1,M1)的差异将其划分为四类：甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)，乙型流感病毒(Influenza B virus,IBV)，丙型流感病毒(Influenza C virus,ICV)，丁型流感病毒(Influenza D virus,IDV)(To J,Torres J.Viroporins in the influenza virus[J].Cells,2019,8(7))。四种流感病毒中，A型、B型流行更广泛，C型和D型流感病毒较为少见。
[0003]流感病毒的每一基因节段分别编码不同的蛋白，决定流感病毒的遗传特性，IAV和IBV的基因组分为8个节段，而ICV和IDV的基因组分为7个节段(Cardenas
‑
Garcia S,Caceres C J,Rajao D,et al.Reverse genetics for influenza B viruses and recent advances in vaccine development[J].Current Opinion In Virology,2020,44:191
‑
202.)。
[0004]IAV中第1～6基因节段分别编码RNA碱性聚合酶2(Basic polymerase 2,PB2)、碱性聚合酶1(Basic polymerase 1,PB1)、酸性聚合酶(Acidic polymerase,PA)、血凝素(Haemagglutinin,HA)、核蛋白(Nucleoprotein,NP)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)；第7基因节段编码囊膜蛋白，由于拼接可任意编码内膜基质蛋白M1和跨膜蛋白M2两种蛋白；第8节段编码非结构蛋白NS，亦通过RNA拼接可进一步分为NS1和NS2(又称NEP)两种蛋白(Li X,Liu B,Ma S,et al.High frequency of reassortment after co
‑
infection of chickens with the H4N6 and H9N2 influenza A viruses and the biological characteristics of the reassortants[J].Vet Microbiol,2018,222:11
‑
7.)。
[0005]IBV与IAV不同的是，IBV第6基因节段不止编码NA蛋白，同时也编码一种NB离子通道蛋白(NB ion channel,NB)。第7基因节段编码一种BM2离子通道蛋白(BM2 ion channel,BM2)，其离子通道的功能与IAV的M2蛋白相似，主要参与调控病毒粒子的脱壳过程，促进成熟病毒粒子的释放。ICV、IDV与IAV和IBV不同的是，IAV和IBV都含有两种主要的表面糖蛋白：HA和NA，而ICV和IDV只有一种主要的表面糖蛋白，即血凝素酯酶融合蛋白(hemagglutinin
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esterase
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fusion,HEF)，它执行所有进入功能，包括受体结合，受体破坏和融合(Liu R,Sheng Z,Huang C,Wang D,Li F.Influenza D virus.Curr Opin Virol.2020；44:154
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161)。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是如何高效的获得流感病毒的全基因组序列以及快速准确的鉴定流感病毒。
[0007]为解决上述技术问题，第一个方面本专利技术提供检测或辅助检测流感病毒或扩增或辅助扩增流感病毒全基因组序列的组合物，所述组合物包括A型流感病毒的扩增引物对、B型流感病毒的扩增引物对、C型流感病毒的扩增引物对和D型流感病毒的扩增引物对；
[0008]所述A型流感病毒的扩增引物对包括FluA
‑
F和FluA
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R；所述B型流感病毒扩增引物对包括FluB
‑
F和FluB
‑
R；所述C型流感病毒扩增引物对和所述D型流感病毒扩增引物对相同，包括FluC/D
‑
F和FluC/D
‑
R；
[0009]所述FluA
‑
F为核苷酸序列是SEQ ID No.1的单链DNA；
[0010]所述FluA
‑
R为核苷酸序列是SEQ ID No.2的单链DNA；
[0011]所述FluB
‑
F为核苷酸序列是SEQ ID No.3的单链DNA；
[0012]所述FluB
‑
R为核苷酸序列是SEQ ID No.4的单链DNA；
[0013]所述FluC/D
‑
F为核苷酸序列是SEQ ID No.5的单链DNA；
[0014]所述FluC/D
‑
R为核苷酸序列是SEQ ID No.6的单链DNA。
[0015]进一步地，上述的组合物中，所述FluA
‑
F、FluA
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R、FluB
‑
F、FluB
‑
R、FluC/D
‑
F和FluC/D
‑
R的物质的量相同。
[0016]为解决上述技术问题，第二个方面本专利技术提供上述的组合物在如下A1)
‑
A6)中的应用：
[0017]A1)检测或辅助检测A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒；
[0018]A2)检测或辅助检测待测样本是否感染A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒；
[0019]A3)检测或辅助检测待测病原是否为A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒；
[0020]A4)扩增或辅助扩增流感病毒A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的全基因组DNA；
[0021]A5)制备检测或辅助检测A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的产品；
[0022]A6)制备检测或辅助检测待测样本是否感染A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的产品；
[0023]A7)制备检测或辅助检测待测病原是否为A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的产品；
[0024]A8)制备扩增或辅助扩增流感病毒A型流感病毒、B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测或辅助检测流感病毒或扩增或辅助扩增流感病毒全基因组序列的组合物，所述组合物包括A型流感病毒的扩增引物对、B型流感病毒的扩增引物对、C型流感病毒的扩增引物对和D型流感病毒的扩增引物对，所述A型流感病毒的扩增引物对包括FluA
‑
F和FluA
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R，所述B型流感病毒扩增引物对包括FluB
‑
F和FluB
‑
R，所述C型流感病毒扩增引物对和所述D型流感病毒扩增引物对相同，包括FluC/D
‑
F和FluC/D
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R；所述FluA
‑
F为核苷酸序列是SEQ ID No.1的单链DNA；所述FluA
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R为核苷酸序列是SEQ ID No.2的单链DNA；所述FluB
‑
F为核苷酸序列是SEQ ID No.3的单链DNA；所述FluB
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R为核苷酸序列是SEQ ID No.4的单链DNA；所述FluC/D
‑
F为核苷酸序列是SEQ ID No.5的单链DNA；所述FluC/D
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R为核苷酸序列是SEQ ID No.6的单链DNA。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述FluA
‑
F、FluA
‑
R、FluB
‑
F、FluB
‑
R、FluC/D
‑
F和FluC/D
‑
R的物质的量相同。3.权利要求1或2所述的组合物在如下A1)
‑
A6)中的应用：A1)检测或辅助检测A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒；A2)检测或辅助检测待测样本是否感染A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒；A3)检测或辅助检测待测病原是否为A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒；A4)扩增或辅助扩增流感病毒A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的全基因组DNA；A5)制备检测或辅助检测A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的产品；A6)制备检测或辅助检测待测样本是否感染A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的产品；A7)制备检测或辅助检测待测病原是否为A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的产品；A8)制备扩增或辅助扩增流感病毒A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒和D型流感病毒的全基因组DNA的产品。4.检测或辅助检测流感病毒或扩增或辅助扩增流感病毒全基因组序列的多重RT
‑
PCR试剂或试剂盒，所述多重RT
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PCR试剂或试剂盒包括所述A型流感病毒的扩增引物对、所述B型流感病毒的扩增引物对、所述C型流感病毒的扩增引物对和所述D型流感病毒的扩增引物对，所述A型流感病毒扩增引物对包括FluA
‑
F和FluA
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R，所述B型流感病毒扩增引物对包括FluB
‑
F和FluB
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R，所述C型流感病毒扩增引物对和所述D型流感病毒扩增引物对相同，包括FluC/D
‑
F和FluC/D
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R；所述FluA
...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕玉海，杨婧，桓瑜，路雅菲，孙举，张宁，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：