丹酚酸A作为腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂的新应用制造技术

本发明专利技术涉及丹酚酸A作为腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂的新应用。所述丹酚酸A通过与腺苷酸环化酶相关蛋白2的LEU

【技术实现步骤摘要】
丹酚酸A作为腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂的新应用


[0001]本专利技术涉及丹酚酸A作为腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂的新应用，属于医药


技术介绍

[0002]腺苷酸环化酶相关蛋白2(CAP2)是环化酶的一个亚单位，最初在芽孢酵母中发现，由477个氨基酸组成，在生物体进化过程中高度保守。作为肌动蛋白重塑剂，其羧基末端结构域可以结合单体肌动蛋白，并可能在肌动蛋白动力学和细胞骨架维持中发挥作用。CAP2的生物学特性包括促进细胞增殖、迁移、粘附和细胞外基质形成，以及调节血管生成和肿瘤发生。在人类乳腺癌、恶性黑色素瘤和肝细胞癌中发现CAP2表达增加。然而，CAP2是否在胃癌进展中起作用尚不清楚。
[0003]本课题组前期研究发现，CAP2在胃癌中上调，尤其是在淋巴结转移的病例中，并且与较差的预后相关。转录因子c
‑
Jun直接与CAP2的启动子区结合并激活CAP2转录。CAP2的N端结构域与活化C激酶1受体(RACK1)的WD5
‑
7结构域结合，并通过激活Src/FAK/ERK信号通路导致白细胞介素
‑
4(IL
‑
4)和IL
‑
10分泌,从而诱导M2巨噬细胞极化。极化的M2巨噬细胞通过分泌转化生长因子β(TGFβ)诱导转移前微环境形成，促进胃癌转移，从而形成TGFβ/c
‑
Jun/CAP2正反馈循环，持续激活CAP2表达。以上都提示CAP2可能是抑制胃癌肿瘤转移的一个有前景的治疗靶点。
[0004]然而，目前CAP2抑制剂的研究进展十分缓慢，且无被批准用于临床的CAP2抑制剂。并且丹酚酸A作为腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂的研究未见报道。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了丹酚酸A作为腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂的新应用。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]本专利技术的第一个方面，提供丹酚酸A在制备腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂中的应用。
[0008]根据本专利技术优选的，所述腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂中的主要活性成分是丹酚酸A。
[0009]根据本专利技术优选的，所述丹酚酸A通过与腺苷酸环化酶相关蛋白2结合抑制腺苷酸环化酶相关蛋白2的活性。
[0010]进一步优选的，所述丹酚酸A与腺苷酸环化酶相关蛋白2的结合靶点包括LEU
‑
106和GLU
‑
112氨基酸残基。
[0011]根据本专利技术优选的，所述腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂还包括药学上可以接受的载体。
[0012]本专利技术的第二个方面，提供丹酚酸A在制备治疗与腺苷酸环化酶相关蛋白2表达密
切相关的癌症的药物中的应用。
[0013]根据本专利技术优选的，所述癌症表现为腺苷酸环化酶相关蛋白2的高表达。
[0014]进一步优选的，所述癌症包括胃癌。
[0015]根据本专利技术优选的，所述药物中的主要活性成分是丹酚酸A。
[0016]根据本专利技术优选的，所述药物还包括药学上可以接受的载体。
[0017]本专利技术的有益效果在于：
[0018]本专利技术首次发现丹酚酸A可以稳定地结合在CAP2的N端结构域，从而抑制CAP2蛋白发挥正常的生理功能，首次公开了丹酚酸A作为CAP2抑制剂的新用途。并且本专利技术在体外实验中，在胃癌细胞系中验证了丹酚酸A可显著抑制CAP2的蛋白活性，降低胃癌细胞活力，抑制胃癌细胞增殖、迁移和浸润，说明丹酚酸A作为CAP2抑制剂用于制备治疗胃癌的药物，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0019]图1为丹酚酸A与CAP2蛋白分子结合模式图；
[0020]图中，A为CAP2与丹酚酸A结合；B为丹酚酸A与CAP2中氨基酸残基的相互作用；C为蛋白与小分子的2D结合模式图。
[0021]图2为丹酚酸A降低胃癌细胞活力结果图。
[0022]图3为丹酚酸A抑制胃癌细胞增殖结果图。
[0023]图4为丹酚酸A抑制胃癌细胞迁移结果图。
具体实施方式
[0024]为了更好的理解本专利技术的实质，下面结合实施例对本专利技术的内容作进一步说明，但不能视为对本专利技术的限制。
[0025]胃癌细胞MKN45和BGC823，ATCC有售。
[0026]丹酚酸A是一种黄色针状结晶粉末，分子式为C
26
H
22
O
10
，结构式如下所示，分子量为494.45，最大吸收波长为286nm。
[0027][0028]实施例1、丹酚酸A抑制腺苷酸环化酶相关蛋白2的分析
[0029]使用AlphaFold算法得到CAP2蛋白结构，从ZINC数据库(http://zinc.docking.org/)中下载了7507化合物的分子结构。然后基于CAP2的晶体结构，用Autodock软件进行虚拟对接建立的分子对接模型，经计算机虚拟筛选，对对接分数、结合亲和力以及结合模式进行全面评估后发现丹酚酸A可以稳定地结合在CAP2的N端结构域，从而抑制CAP2蛋白发挥正常的生理功能，具体结合模式图如图1所示。
[0030]实施例2、细胞活力实验
[0031]分别用浓度为0、3.5、11、33、100和300μM的丹酚酸A处理胃癌细胞MKN45和BGC823，CCK
‑
8检测细胞活性情况。
[0032]具体方法如下：
[0033](1)向96孔板加入100μL细胞悬液(1～2
×
104个/孔)，在37℃、5％CO2的培养箱中培养4h至细胞贴壁；
[0034](2)向细胞中加入浓度为0、3.5、11、33、100和300μM的丹酚酸A，继续培养24h；
[0035](3)向每孔加入10μL的CCK
‑
8溶液，在37℃、5％CO2的培养箱中孵育4h；
[0036](4)用酶标仪在450nm测定吸光度值，结果如图2所示。
[0037]由图2可知，胃癌细胞MKN45和BGC823分别经173.9μM和73.51μM的丹酚酸A处理后细胞活力显著下降50％，说明丹酚酸A能够有效降低胃癌细胞MKN45和BGC823的活性。
[0038]实施例3、细胞增殖实验
[0039]用100μM的丹酚酸A处理胃癌细胞MKN45和BGC823，EdU检测细胞增殖情况。
[0040]具体方法如下：
[0041](1)按照15000个/孔向96孔板加入细胞悬液，复孔数为3；然后分为两组，组1加入100μM的丹酚酸A，组2加入5μl的DMSO，在37℃、5％CO2的培养箱中孵育24h至细胞贴壁；
[0042](2)按照锐博EdU试剂盒说明进行后续操作；将EdU试剂A用完全培养基稀释1000倍得到EdU工作液；然后弃去孔内培养基，加入100μL的EdU工作液，在37℃、5％CO2的培养箱中孵育3h；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.丹酚酸A在制备腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述腺苷酸环化酶相关蛋白2抑制剂中的主要活性成分是丹酚酸A。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丹酚酸A通过与腺苷酸环化酶相关蛋白2结合抑制腺苷酸环化酶相关蛋白2的活性。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述丹酚酸A与腺苷酸环化酶相关蛋白2的结合靶点包括LEU
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106和GLU
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112氨基酸残基。5.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：高鹏，张国豪，高兆欣，周盼，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：