双佐剂重组带状疱疹疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种双佐剂重组带状疱疹疫苗，其包含一种融合蛋白，所述融合蛋白包含水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)以及IgG的Fc片段。该双佐剂重组带状疱疹疫苗具有稳定、安全、有效，且配方简单、成本低等优点，能诱导机体免疫系统针对重组水痘

【技术实现步骤摘要】
双佐剂重组带状疱疹疫苗


[0001]本专利技术涉及一种疫苗制剂，特别涉及能诱导机体免疫系统针对重组水痘
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带状疱疹病毒糖蛋白E融合蛋白产生特异性结合抗体的疫苗制剂。

技术介绍

[0002]带状疱疹(HZ)是由水痘
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带状疱疹病毒(VZV)复苏引起的急性感染性疾病，好发于老年人和免疫低下人群，病毒通过神经传播到表皮细胞，沿肋间神经区域形成水疱疹症状，常伴剧烈的顽固性带状疱疹后神经痛(PHN)，严重影响患者生活质量。此外，HZ还可导致病毒播散、中风、脑炎和视力损伤(包括失明)等严重并发症。HZ发病率较高，研究发现90％以上的成人均感染过VZV，其中约20％的血清学阳性个体在一生中会发生HZ。HZ的治疗包括及时应用抗病毒和镇痛类药物，但这些药物只能减少急性HZ患者的不适及疼痛症状，不能明显的缩短HZ的病程以及缓解/减少后遗症的发生。随着我国社会老龄化加剧，HZ防控形势更加严峻。
[0003]国内尚无带状疱疹疫苗上市，国外已有默克公司的ZOSTAVAX和GSK公司的SHINGRIX两种带状疱疹疫苗获准上市使用。
[0004]接种过VZV减毒株(OKA株)的人或自然感染VZV后可以获得保护性免疫。OKA株减毒活疫苗已被美国FDA、中国药品监督管理局、欧盟等机构批准用于儿童接种，以预防野生型水痘病毒感染儿童，高剂量的OKA株病毒减毒活疫苗已被美国FDA、欧盟批准用于预防50岁以上老年人，以预防或降低他们罹患带状疱疹病毒引起的肋间神经痛等带状疱疹病毒引起的疾病。目前，欧盟、美国等60多个国家和地区已推荐≥50岁免疫功能正常人群接种Zostavax预防带状疱疹和PHN。接种方法是在上臂三角肌区皮下注射单剂疫苗(0.65mL，含19，400PFU病毒)。偶尔出现头痛、注射局部反应等不良反应。经大规模多中心临床试验验证，50～59岁免疫功能正常人群接种后带状疱疹发病率降低69.8％，而≥60岁人群接种后带状疱疹发病率、PHN发病率和疾病负担分别下降51.3％、66.5％和61.1％。Zostavax的预防效率随接种者年龄增长而逐渐降低，严重免疫抑制和孕妇又是接种的禁忌症。因此，制备更加安全有效疫苗的需要尤为迫切。
[0005]GSK公司开发的VZV gE重组蛋白和AS01B佐剂制备的带状疱疹亚单位疫苗，接种≥50岁免疫功能正常人群使带状疱疹和PHN的发病率分别降低97.2％和91.2％，接种≥70岁人群则分别降低89.8％和88.8％，效果优于减毒活疫苗Zostavax。尽管其效果明显优于VZV减毒活疫苗Zostavax，但该疫苗配方复杂，抗原需要冻干并且需要和佐剂分开，佐剂ASO1B，特别是其中的QS21不能化学合成，原材料稀缺，价格贵，导致供应不足。
[0006]因此有必要开发安全、有效，且配方简单、成本低的VZV疫苗。

技术实现思路

[0007]为了解决上述问题，本专利技术使用人IgG4 Fc突变体与VZV病毒gE蛋白肽链的膜外区融合从而形成稳定、安全、有效，且配方简单、成本低的二聚体VZV疫苗。
[0008]在一方面，本专利技术提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白依次包含第一种新冠突变株的S蛋白的受体结合结构域(RBD)或其功能片段、免疫球蛋白Fc区和第二种新冠突变株的S蛋白的受体结合结构域或其功能片段，所述第一种新冠突变株和第二种新冠突变株是不同的突变株。
[0009]在另一方面，本专利技术提供了一种编码前述的融合蛋白的核酸。
[0010]在另一方面，本专利技术提供了一种包含前述核酸的表达载体。
[0011]在另一方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，表达前述融合蛋白，或包含前述核酸和/或前述表达载体。
[0012]在另一方面，本专利技术提供了一种药物组合物，其包含前述融合蛋白、核酸、表达载体和/或所述宿主细胞，以及一种或多种药学上可接受载体、稀释剂或赋形剂。
[0013]在另一方面，本专利技术提供了一种疫苗，其包含前述融合蛋白、核酸、表达载体和/或所述宿主细胞，以及一种或多种佐剂。
[0014]在另一方面，本专利技术提供了前述融合蛋白、核酸、表达载体和/或所述宿主细胞和/或前述药物组合物在制备治疗或预防与水痘带状疱疹病毒相关的疾病或病状的疫苗中的用途。
[0015]在另一方面，本专利技术提供了一种在有相应需要的受试者中诱导针对水痘带状疱疹病毒的免疫应答的方法，所述方法包括：向受试者施用前述疫苗。
[0016]本专利技术具有如下的有益效果：
[0017]1.本专利技术的使用人IgG4Fc突变体从而减少单分子形成，同时减少了ADCC效应、克服生产过程中出现末端不均一的问题，保证了本专利技术疫苗更安全和稳定；
[0018]2.VZV
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gE与人IgG4Fc连接形成二聚体有利于促进表达和纯化，同时抗原提呈给DC细胞提高免疫反应水平，此外gE形成二聚体增加了分子量有利于增加gE的免疫原性；
[0019]3.本专利技术使用VZV gE的膜外区与人IgG4 Fc片段融合；在哺乳类动物细胞(CHO)获得了高效表达的分泌型的gE
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Fc融合蛋白，表达量达到3g/L；
[0020]4.本专利技术的CHO细胞表达的重组gE
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Fc融合蛋白质为糖基化蛋白，保持了天然gE蛋白质的空间结构，免疫原性好，细胞免疫检测IL
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2和IFN
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γ均有作用。令人惊讶的是，该融合蛋白与双佐剂组合使用免疫原性显著增加；
[0021]5.采用本专利技术的双佐剂重组带状疱疹疫苗，与目前市售效果最好的GSK研制的Shingrix免疫效果比较，本专利技术的疫苗一免后起效更快，二免检测也有更好的效果；
[0022]6.本专利技术的疫苗使用常规的铝佐剂和CpG佐剂联合，价格低廉容易获得，克服了GSK研制的Shingrix疫苗配方复杂，抗原需要冻干并且需要和佐剂分开，以及佐剂原材料稀缺，价格昂贵等缺陷。同时也因为Shingrix抗原需要冻干并且需要和佐剂分开，导致制备抗原、制剂工艺以及后续的使用上均较为麻烦。本专利技术的抗原和佐剂可以直接混合，预灌充注射器分装制剂，非常便利。
附图说明
[0023]图1为VZV
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gE
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Fc纯化结果。
[0024]图2为不同铝盐佐剂配制的重组VZV
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gE
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Fc疫苗免疫小鼠的免疫效果对比。
[0025]图3为不同剂量氢氧化铝佐剂的免疫效果对比。
[0026]图4为不同剂量CpG佐剂的免疫效果对比。
[0027]图5为不同剂量抗原的免疫效果对比。
[0028]图6为ELISPOT细胞免疫效果评价。其中，图6a为IL
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2的检测结果，图6b为IFN
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γ的检测结果。
[0029]图7为本专利技术的双佐剂VZV
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gE
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FC重组带状疱疹疫苗(VZV
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)以及IgG的Fc片段。2.权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)包含与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；优选地，所述IgG的Fc片段是人IgG的Fc片段；更优选地，所述人IgG的Fc片段包含与SEQ ID NO.2示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述人IgG的Fc片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.权利要求1或2所述的融合蛋白，其中，所述水痘带状疱疹病毒(VZV)的糖蛋白E(VZV gE)和IgG的Fc片段之间包含接头；优选地，所述接头为柔性接头；优选地，所述柔性接头选自GGGGS(SEQ ID NO.5)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO.6)、GSGGGSGGGGSGGGGSA(SEQ ID NO.7)；更优选地，所述柔性多肽为GSGGGSGGGGSGGGGSA(SEQ ID NO.7)；优选地，所述融合蛋白包含与SEQ ID NO.3示的氨基酸序列具有80％或以上同一性的氨基酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的氨基酸序列，更优选具有98％或99％以上同一性的氨基酸序列；更优选地，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。4.编码权利要求1
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3任一项所述的融合蛋白的核酸；优选地，所述融合蛋白的编码核酸包含与SEQ ID NO.4所示核苷酸序列具有80％或以上同一性的核苷酸序列，优选具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％以上同一性的核苷酸列，更优选具有98％或99％以上同一性的核苷酸序列；更优选地，所述融合蛋白的编码核酸为SEQ ID NO.4所示的核酸；优选地，所述核酸是mRNA。5.一种包含权利要求4所述的核酸的表达载体；优选地，所述表达载体选自原核表...

【专利技术属性】
技术研发人员：王希良，程晋霞，王莉，李世崇，司炳银，王立博，
申请(专利权)人：北京吉诺卫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：