【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药生物领域，具体涉及一种肺炎球菌发酵培养基及其应用。
技术介绍
1、肺炎链球菌简称肺炎球菌，革兰染色为阳性，有α溶血性，链球菌属下的一种菌。在自然界中分布广泛。至于能否致病则与荚膜有密切关系，因荚膜能抵抗人体内吞噬细胞的吞噬作用从而大量繁殖，是细菌性大叶性肺炎的主要病原体，也是引发肺炎、脑膜炎等疾病的首要致病菌。在现有培养条件下，肺炎球菌荚膜多糖的收率较低，因此，有必要对其发酵工艺进行进行优化以提高多糖的产率。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术提供一种肺炎球菌发酵培养基及其应用，具体的，
2、本专利技术第一方面，提供一种肺炎球菌的培养基，所述培养基包括葡萄糖25-45g/l，蛋白胨10-18g/l，酵母粉3-5g/l。
3、优选的，所述葡萄糖可以是25-45g/l中的任意范围或者数值，例如25、28、30、32、35、38、40、45g/l等等。
4、优选的，所述蛋白胨可以是10-18g/l中的任意范围或者数值，例如10、12、15、18g/l等等。更优选的，所述蛋白胨来自大豆蛋白胨。
5、优选的，所述酵母粉可以是3-5g/l中的任意范围或者数值，例如3、4、5g/l等等。
6、优选的，所述培养基还包括无机盐和微量元素，更优选的，所述无机盐包括钠盐、镁盐、钾盐，所述微量元素包括铁盐、锌盐和锰盐。
7、进一步优选的，所述钠盐来自碳酸钠、所述镁盐来自七水硫酸镁；所述钾盐来自磷酸氢二钾；所
8、优选的，所述培养基还包括腺嘌呤和尿嘧啶。
9、在一个具体的实施方式中所述培养基包括葡萄糖40g/l、大豆蛋白胨15g/l、酵母粉5g/l、磷酸氢二钾12g/l、腺嘌呤0.1g/l、尿嘧啶0.1g/l、碳酸钠3g/l、七水硫酸镁1.0g/l、硫酸亚铁0.05g/l、七水硫酸锌0.05g/l、硫酸锰一水合物0.02g/l。
10、在一个具体的实施方式中所述培养基包括葡萄糖30g/l、大豆蛋白胨15g/l、酵母粉3g/l、磷酸氢二钾12g/l、腺嘌呤0.1g/l、尿嘧啶0.1g/l、碳酸钠3g/l、七水硫酸镁1.0g/l、硫酸亚铁0.05g/l、七水硫酸锌0.05g/l、硫酸锰一水合物0.02g/l。
11、在一个具体的实施方式中所述培养基包括葡萄糖40g/l、大豆蛋白胨10g/l、酵母粉3g/l、磷酸氢二钾12g/l、腺嘌呤0.1g/l、尿嘧啶0.1g/l、碳酸钠3g/l、七水硫酸镁1.0g/l、硫酸亚铁0.05g/l、七水硫酸锌0.05g/l、硫酸锰一水合物0.02g/l。
12、优选的，所述培养基ph 7.0-7.2。
13、优选的，所述肺炎球菌为任一血清型肺炎球菌。例如：血清型1、2、3、4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、15b、17a、17f、18c、19a、19f、20、22f、23f和33f等等。
14、本专利技术第二方面，提供一种上述培养基在培养肺炎球菌中的应用。
15、本专利技术第三方面，提供一种肺炎球菌的发酵培养方法，所述方法包括将上述任一的培养基对肺炎球菌进行发酵培养。
16、优选的，所述方法包括：
17、(1)、菌种活化；
18、(2)固体培养基扩大培养；
19、(3)摇瓶培养；
20、(4)发酵罐培养；
21、(5)发酵液离心、过滤、去核酸、去蛋白、除菌保存。
22、优选的，所述步骤(1)
23、优选的，所述步骤(4)的培养基为上述第一方面定义的培养基。
24、优选的，所述步骤(5)包括：5-1)肺炎球菌发酵液，灭活后离心收集上清液，经超滤浓缩；5-2)浓缩液经醇沉、酸沉和钙沉，浓缩后收集上清液；5-3)过滤除菌，获得多价荚膜多糖原液。
25、更优选的，所述步骤5-2)采用乙醇进行醇沉、采用乙酸进行酸沉和/或采用氯化钙溶液进行钙沉。
26、更优选的，所述荚膜多糖储存在-20℃。
27、本专利技术第四方面，提供一种肺炎球菌的发酵液，所述发酵液由上述发酵培养方法获得。
28、所述发酵液包括肺炎球菌的荚膜多糖。
29、优选的，所述发酵液包含大于2.0g/l的荚膜多糖。
30、本专利技术第五方面，提供一种上述肺炎球菌的发酵液在制备疫苗中的用途。
31、本专利技术第六方面，提供一种肺炎球菌疫苗，所述疫苗包括上述任一的发酵液。
32、优选的，所述疫苗包括荚膜多糖10-50μg/ml，可以是上述范围内的任意数值或范围，例如12、15、20、25、30、35、40、45或50μg/ml。
33、优选的，所述疫苗可以包括多种血清型肺炎球菌的发酵液。
34、例如：血清型1、2、3、4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、15b、17a、17f、18c、19a、19f、20、22f、23f和/或33f等等。
35、优选的，所述疫苗还包括佐剂。
36、更优选的，所述佐剂可为一种可以刺激机体产生针对与其一同接种的抗原更强烈体液和/或细胞免疫应答的物质。本文所述佐剂可以是本领域技术人员公知的，包括但不限于：植物佐剂(如烷基胺、酚类成分、奎宁、皂角素、倍半萜、蛋白质、多肽、多糖、糖脂、植物血凝素等)、细菌佐剂(如霍乱毒素、大肠埃希菌不耐热毒素、细菌脂多糖等)、铝佐剂及其他无机成分佐剂(如钙佐剂)、细胞因子和核酸佐剂(如单核细胞克隆刺激因子、白细胞因子il-1、il-2、il-4、il-5、il-6、ifn-γ、cpg基序、核酸载体等)、乳剂佐剂(如弗氏佐剂)。所述佐剂可为药学上可以接受的佐剂。在本专利技术的一个或多个实施方案中，所述佐剂为氢氧化铝佐剂(al(oh)3佐剂)、cpg1018佐剂(购自广州锐博生物技术有限公司，批号0210426)、cpg-cjx1佐剂(本公司)、cpg7909佐剂(本公司)中的至少任一种。
37、本专利技术的有益效果包括：
38、(1)本专利技术选择合适的碳源、氮源以及相应的浓度使其适合肺炎球菌的发酵工艺，产糖率得到显著的提高，最高可达3.24g/l。
39、(2)本专利技术获得的发酵液也用于制备肺炎球菌疫苗，由于其具有较高的荚膜多糖可减少疫苗制备的成本，提高疫苗的抗原性。
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1.一种肺炎球菌的培养基，其特征在于，所述培养基包括葡萄糖25-45g/L，蛋白胨10-18g/L，酵母粉3-5g/L。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包括无机盐、微量元素、腺嘌呤和/或尿嘧啶，更优选的，所述无机盐包括钠盐、镁盐、钾盐，所述微量元素包括铁盐、锌盐和锰盐。
3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，培养基包括
4.权利要求1-3任一所述的培养基在培养肺炎球菌中的应用。
5.一种肺炎球菌的发酵培养方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1-3任一所述的培养基对肺炎球菌进行发酵培养。
6.根据权利要求5所述的发酵培养方法，其特征在于，所述方法包括：
7.一种肺炎球菌的发酵液，所述发酵液由权利要求5或6所述的发酵培养方法获得。
8.权利要求7所述的发酵液在制备疫苗中的用途。
9.一种肺炎球菌疫苗，所述疫苗包括权利要求8所述的的发酵液。
10.根据权利要求9所述的肺炎球菌疫苗，其特征在于，所述肺炎球菌包括多种血清型肺炎球菌。
【技术特征摘要】
1.一种肺炎球菌的培养基，其特征在于，所述培养基包括葡萄糖25-45g/l，蛋白胨10-18g/l，酵母粉3-5g/l。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包括无机盐、微量元素、腺嘌呤和/或尿嘧啶，更优选的，所述无机盐包括钠盐、镁盐、钾盐，所述微量元素包括铁盐、锌盐和锰盐。
3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，培养基包括
4.权利要求1-3任一所述的培养基在培养肺炎球菌中的应用。
5.一种肺炎球菌的发酵培养...
【专利技术属性】
技术研发人员：王希良，高克学，邵军超，冉文斌，李世崇，王莉，王立博，
申请(专利权)人：北京吉诺卫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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