基于Spacer基因定向插入TC-Tag标签的细胞系、重组病毒及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种基于Spacer基因定向插入TC

【技术实现步骤摘要】
hepatitis B virus vector efficiently suppresses wild
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type virus infection.Proc Natl Acad Sci USA.1999.96,10818
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10823.Wang Z,Wu L,Cheng X,et al.Replication competent infectious hepatitis B virus vectors carrying substantially sized transgenes by redesigned viral polymerase translation.PLoS One.2013.8,e60306.)。此外，由于存在大量不包含HBV基因组的亚病毒粒子(SVP)，HBV病毒粒子的纯化具有挑战性。虽然已有文献报道了试图使用多种方法来荧光标记HBV及其SVPs(Sun S,Yan J,Xia C,et al..Visualizing hepatitis B virus with biarsenical labelling in living 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于Spacer基因定向插入TC
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Tag标签的细胞系的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将载体pCDN3.1
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CMV
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G418通过SacI/PmeI双酶切，获得线性化载体骨架片段；将SEQ ID NO.4
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SEQ ID NO.5所示引物和SEQ ID NO.6
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SEQ ID NO.7所示引物对D型HBV1.3倍体质粒进行扩增，分别获得片段1和片段2；将所述线性化载体骨架片段、片段1和片段2通过同源重组和转化，获得重组质粒pCDN3.1
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CMV
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HBV1.3
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TC
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G418；将所述重组质粒pCDN3.1
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HBV1.3
‑
TC
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G418经ScaI单酶切获得线性化片段，后转染HepG2细胞并通过G418抗性筛选，获得多克隆细胞系；将所述多克隆细胞系通过G418抗性筛选，获得基于Spacer基因定向插入TC
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Tag标签的细胞系。2.一种采用权利要求1所述的方法制备得到的基于Spa...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏宇尘，赵莉，程晓明，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：