线纹海马C型溶菌酶基因和编码蛋白及其克隆方法技术

本发明专利技术公开了线纹海马C型溶菌酶基因和编码蛋白及其克隆方法。所述的线纹海马C型溶菌酶HeLyzC的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该溶菌酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术的线纹海马C型溶菌酶HeLyzC来自线纹海马，是一种新型溶菌酶，可应用于制备抗菌产品。产品。产品。

【技术实现步骤摘要】
线纹海马C型溶菌酶基因和编码蛋白及其克隆方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及线纹海马C型溶菌酶基因和编码蛋白及其克隆方法。

技术介绍

[0002]海马隶属海龙科，是一种海洋小型硬骨鱼类，具有非常高的经济和药用价值。随着海马养殖的迅速发展，养殖规模不断扩大，伴随病害频发，造成巨大的经济损失。抗生素的使用在预防和治疗海马病害中起着重要作用，有效缓解遏制海马疾病的流行，提高了海马产量。但随之引发的耐药性细菌的产生和水质污染，危害渔业和人体健康，从而寻求新型药物的需要日趋迫切。
[0003]抗菌肽是先天系统中一种重要的效应因子，对细菌、真菌和病毒等具有广泛的抑制作用。与传统抗生素不同，抗菌肽因其对微生物不具有特异性，很难产生耐药性，使其成为抗生素的理想替代品。并且抗生素杀灭细菌，通常会引起细菌死亡导致内毒素的大量释放，而抗菌肽除了具有抗菌作用，还能中和内毒素，减少细菌毒力。
[0004]溶菌酶是鱼类种主要的抗菌肽之一，又称粘肽N
‑
乙酰基胞壁酰水解酶，能水解细菌细胞壁引起细菌裂解。人和动物细胞无细胞壁结构亦无肽聚糖，故溶菌酶对人体细胞无毒性作用。溶菌酶广泛存在于动植物中，在机体免疫防御中发挥重要作用。因其对微生物具有非常好的抑制和杀灭作用，无论在工业还是医学上都具有重要的应用价值。例如，溶菌酶可作为临床药物，具抗菌、清除局部坏死组织、止血、消肿、消炎及恢复组织功能等作用，在医学上可用来制消炎药等。在食品工业上可用作防腐剂，还可添加在牙膏中作为防治龋齿的药用牙膏。在发酵工业上是一种重要的溶菌剂，用于存作细胞壁，制备无菌体提取液。
[0005]基于上述问题，我们急需发现新的，安全无毒性的抗菌药物，以满足实际应用的需求。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种新型抗菌肽
‑
线纹海马C型溶菌酶，为新型药物的开发提供备选，以及提供该溶菌酶在抗菌药物中的应用。
[0007]本专利技术的第一个目的是提供一种线纹海马溶菌酶HeLyzC，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供一种核酸，所述核酸编码上述的线纹海马溶菌酶HeLyzC。具体的，所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0009]本专利技术的第三个目的是提供一种含有上述的核酸的生物材料。
[0010]优选的，所述生物材料为重组DNA、表达盒、转座子、载体或宿主细胞。
[0011]本专利技术的第四个目的是提供上述的线纹海马溶菌酶HeLyzC、上述的核酸或上述的生物材料在制备抗菌产品中的应用。
[0012]优选的，所述的产品为饲料添加剂、防腐剂或药品。
[0013]本专利技术的第五个目的是提供一种抗菌产品，其包含上述的线纹海马溶菌酶HeLyzC。
[0014]本专利技术的第六个目的是提供上述的线纹海马溶菌酶HeLyzC、上述的核酸或上述的生物材料在海马遗传选育中的应用。
[0015]本专利技术的第七个目的是提供一种线纹海马溶菌酶HeLyzC基因的克隆方法，包括以下步骤：
[0016](1)提取成年雄性线纹海马的育儿袋组织的RNA，反转录得到cDNA；
[0017](2)以cDNA为模板，使用引物F:5'
‑
ATGAGGCCGACATCCGCCCTG
‑
3'；R:5'
[0018]‑
TCAGTTGCACTGGCCGAAGAA
‑
3'进行PCR扩增，回收并纯化PCR产物，并测序。
[0019]本专利技术的溶菌酶来自线纹海马，是一种新型溶菌酶，可应用于水产养殖业和医药产品。因此，本专利技术的溶菌酶HeLyzC可应用于制备抗菌产品，所述的抗菌产品包括饲料添加剂、防腐剂和药品等。
附图说明
[0020]图1为线纹海马溶菌酶HeLyzC的核苷酸和推导的氨基酸序列。注：方框代表信号肽。
[0021]图2为线纹海马溶菌酶HeLyzC和其他鱼类LyzC的氨基酸序列比对。注：8个保守的半胱氨酸用星号标记；酶活性位点用方框标记。
[0022]图3为线纹海马溶菌酶HeLyzC的时空表达和免疫刺激表达分析。(A)海马HeLyzC的组织分布。(B)和(C)海马HeLyzC在怀孕周期育儿袋(B)和子代中(C)的表达模式。(D)海马HeLyzC在PBS、LPS、Poly(I:C)或者弧菌(Vibrio)刺激的育儿袋中的表达情况，该图中每组柱形图从左往右依次为PBS、LPS、Vibrio、Poly(I:C)刺激，(n≥5，平均值
±
标准误)，不同字母表示存在显著性差异(p<0.05)，*表示存在显著性差异，p<0.05。
具体实施方式
[0023]以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。
[0024]实施例1：线纹海马C型溶菌酶(HeLyzC)序列的确定
[0025]本专利技术基于线纹海马基因组和转录组数据库，筛选获得HeLyzC的cDNA序列，从线纹海马育儿袋组织中克隆获得该抗菌肽序列。该抗菌肽HeLyzC开放阅读框的核苷酸序列(如SEQ ID NO.2所示)如下：
[0026]ATGAGGCCGACATCCGCCCTGCTGTTCCCGCTGCTGCTGCTGCTGCCGGCGCTCCGGT
[0027]GCCACGGCCGTACCGTGTCCAGGTGCGAGCTGCGAGACAAGCTGAGGGACAAGATCA
[0028]AGCTGTCGGAACGCACGCAAAACCTCACCGACGTGGTTTTGACTTTGCTCGTGTGCC
[0029]AACTGGAAAAGGTCTCCCACCGCAGCACAAGCTTCGTGACCATCTACGGCCAACGCG
[0030]CCACCACTACCACCGCAATCCCAACGACCAACAGTACCACGGCCGCCAACCAAATCG
[0031]TCATCATGAGCAACCAAACGGTCACCTCCAATGCCACCGTTCCAACTCCCTTGAGCAA
[0032]CAGCACCGCCGCCCCGCCCGTCAACCAAAGCGGCATCGGCAACCAAACTGTCAACTC
[0033]CAACCAAACACTCGATGAGGTCAACGATGGCCAAGACCAGGACCAGGAAGACGACG
[0034]CTACAGGTGAGGAACCAGAACAGGAAGAAGAACCTGAAGTACAAGAAGAACTATTC
[0035]GACGGGGCAGAAGAAACCTACGATGAGGAGGGCGAGTACCTTTATGTGAATCAGGGA
[0036]AGCAAAATGGACTTCCACTTGGACGACTGGTTGAAGCTGATGGAACTTCTGAACGAG
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种线纹海马溶菌酶HeLyzC，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1所述的线纹海马溶菌酶HeLyzC。3.根据权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.一种含有权利要求2所述的核酸的生物材料。5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组DNA、表达盒、转座子、载体或宿主细胞。6.权利要求1所述的线纹海马溶菌酶HeLyzC、权利要求2所述的核酸或权利要求4所述的生物材料在制备抗菌产品中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的产品为饲料添加剂、防腐剂或药品。8.一种抗菌产品，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：林强，肖旺红，秦耿，张艳红，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：