本发明专利技术公开了十氢芴型生物碱化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中应用。所述的生物碱化合物的结构式如式(Ⅰ)所示。化合物是从海洋真菌Microascus sp.SCSIO 41821的菌丝体中分离得到的。经试验证明，本发明专利技术的10‑13具有抑制蛋白酪氨酸磷酸酶PTPSig活性；化合物4,9,10对7株细菌具有显著的抑制活性，MIC值范围为0.1～0.8μg/mL，比阳性药硫酸庆大霉素和万古霉素稍强，这些化合物可用于蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂或抗菌药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋生物领域，具体涉及13个十氢芴型生物碱化合物及其制备方法和在制备抗菌药物中的应用。
技术介绍
1、由于广泛应用、滥用、不合理使用抗菌药物，导致多药耐药菌的出现和传播，随着耐药性病原菌的不断增加，新型抗菌药物的研发进展慢，研发周期长，研发速度满足不了市场需求，因而开发新型抗生素具有重大意义。从微生物代谢产物中寻找新型抗菌药物具有一定的可行性，现有研究表明微生物代谢产物是新型抗菌剂的潜在来源。
2、十氢芴(decahydrofluorene)型生物碱是一类真菌代谢产物，它是由1个6,5,6并三环基本骨架，1个γ-内酰胺或琥珀酰亚胺异环，一个与对芳环紧密连接组成的12或13元环的复杂的天然生物碱，由于其具有挑战性的结构和多样的生物活性(抗菌、抗炎、细胞毒活性)，引起了广泛关注。因此，十氢芴型生物碱化合物具有广阔的应用前景，可作为潜在的新型药物的原料。
技术实现思路
1、本专利技术的第一个目的是提供有抗菌活性，或对蛋白酪氨酸磷酸酶有抑制作用的8个新的十氢芴型生物碱microascones a(1)-b(2),2,3-epoxyphomapyrrolidone c(3),14,16-epiascomylactam b(4),24-hydroxyphomapyrrolidone a(5),microascones c-e(6)(7)(8)和已知化合物ascomylactamsa-b(9)(19),phomapyrrolidonesa-c(11)(12)(13)。</p>2、本专利技术8个新的十氢芴型生物碱microascones a-b,2,3-epoxyphomapyrrolidonec,14,16-epiascomylactam b,24-hydroxyphomapyrrolidone a,microascones c-e和已知化合物ascomylactamsa-b,phomapyrrolidones a-c，其结构式如式(ⅰ)所示。
3、
4、本专利技术的第二个目的是提供化合物microascones a-b,2,3-epoxyphomapyrrolidone c,14,16-epiascomylactam b,24-hydroxyphomapyrrolidone a,microascones c-e,ascomylactams a-b,phomapyrrolidones a-c的制备方法，它们是从真菌microascus sp.scsio 41821gdmcc 64206菌丝体中分离得到的。
5、优选，具体步骤如下：
6、(a)制备真菌microascus sp.scsio 41821gdmcc 64206的菌丝体；
7、(b)将步骤(a)得到的菌丝体破碎后，用丙酮或甲醇或二氯甲烷：甲醇(1:1v/v)浸泡，重复提取，合并提取液，浓缩除去丙酮或甲醇或二氯甲烷和甲醇，剩余水相用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相，浓缩后得菌体提取物；
8、(c)将步骤(b)所述菌体提取物经过正相硅胶柱层析，依次用二氯甲烷:甲醇体积比为100:0,98:2,90:10,80:20,70:30,50:50,0:100的溶剂系统梯度洗脱；
9、收集二氯甲烷:甲醇体积比98:2和9:1冲洗下来的样品得到组分fr.2，经过常压正相硅胶柱层析，以石油醚：乙酸乙酯体积比为1:0,100:1,50:1,20:1,10:1,5:1,4:1,7:3,6:4,1:1,0:1的溶剂系统梯度洗脱；
10、收集石油醚:乙酸乙酯体积比10:1冲洗下来的样品得到组分fr.2.3，收集石油醚:乙酸乙酯体积比5:1冲洗下来的样品得到组分fr.2.4，收集石油醚:乙酸乙酯体积比4:1冲洗下来的样品得到组分fr.2.5。收集石油醚:乙酸乙酯体积比4:1-1:1冲洗下来的样品得到组分fr.2.6。
11、组分fr.2.3经过凝胶sephadex lh-20分离和hplc半制备纯化得到化合物6,7和11；组分fr.2.5经过中压反相柱层析，以甲醇/水体积比13:87-100:0梯度洗脱，收集甲醇:水体积比为60:40洗脱的样品再经中压ods柱分离得到组分fr.2.5.1-fr.2.5.8，fr.2.5.5通过hplc半制备得到1；组分fr.2.5.7经过半制备型hplc纯化得到4,8,10,12和13，化合物4在甲醇中重结晶得到9；
12、组分fr.2.6通过中压ods柱用meoh/h2o(v/v 50:50-100:0)洗脱得到10个组分，fr.2.6.2通过hplc半制备得到2；fr.2.6.3依次经凝胶和半制备型hplc纯化得到5；fr.2.6.6经hplc半制备纯化得3。
13、进一步优选，步骤(a)中所述的菌丝体是通过以下方法制备：将真菌microascussp.scsio 41821在真菌适用的平板培养基中生长，待真菌长出菌落后，将真菌接种到发酵培养基中，于室温静置培养28天，得到菌丝体，所述的发酵培养基每瓶是按照以下比例配制的：大米80g，酵母浸膏0.4g，葡萄糖0.4g，海盐3.6g，120ml水。
14、进一步优选，步骤(b)所述的浓缩是采用减压浓缩。
15、本专利技术的第三个目的是提供化合物14,16-epiascomylactam b,ascomylactamsa-b或其药用盐在制备抗菌药物中的应用。
16、本专利技术的第四个目的是提供一种抗菌药物，所述的抗菌药物含有化合物14,16-epiascomylactam b,ascomylactamsa-b中任一化合物或其药用盐作为活性成分。
17、本专利技术的第五个目的是提供一种蛋白酪氨酸磷酸酶ptpsig抑制剂，所述的化合物ascomylactam b,phomapyrrolidonesa-c中任一化合物或其药用盐作为活性成分。
18、本专利技术的第六个目的是提供真菌microascus sp.scsio 41821gdmcc 64206在制备化合物microascones a-b,2,3-epoxyphomapyrrolidone c,14,16-epiascomylactam b,24-hydroxyphomapyrrolidone a,microascones c-e,ascomylactams a-b,phomapyrrolidones a-c中的应用。
19、本专利技术的10-13具有抑制蛋白酪氨酸磷酸酶ptpsig活性；化合物4,9,10对7株细菌具有显著的抑制活性，mic值范围为0.1～0.8μg/ml，比阳性药硫酸庆大霉素和万古霉素稍强，这些化合物可用于蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂或抗菌药物中的应用。
20、本专利技术的真菌microascus sp.scsio 41821，于2023年12月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.如式(Ⅰ)所示中的任一化合物：
2.一种权利要求1所述的化合物microascones A-B(1-2),2,3-epoxyphomapyrrolidone C(3),14,16-epiascomylactam B(4),24-hydroxyphomapyrrolidone A(5),microascones C-E(6-8),ascomylactamsA-B(9-10),phomapyrrolidonesA-C(11-13)的制备方法，其特征在于，是从真菌Microascus sp.SCSIO41821GDMCC 64206的菌丝体中分离得到的。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中所述的浓缩是采用减压浓缩。
5.权利要求1中所述的化合物ascomylactam B,phomapyrrolidones A-C或其药用盐在制备蛋白酪氨酸磷酸酶PTPSig抑制剂中的应用。
6.权利要求1中所述的化合物14,16-epiascomylactam B,ascomylactams A-B或其药用盐在制备抗菌药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑菌剂是抑制金黄色葡萄球菌、耐甲氧金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、海豚链球菌、无乳链球菌、解淀粉芽孢杆菌、白色念珠菌的药物。
8.一种蛋白酪氨酸磷酸酶PTPSig抑制剂，其特征在于，含有权利要求1中所述的化合物ascomylactam B,phomapyrrolidonesA-C中任一化合物或其药用盐作为活性成分。
9.一种抗菌药物，其特征在于，含有权利要求1中所述的化合物14,16-epiascomylactam B和ascomylactamsA-B中任一化合物或其药用盐作为活性成分。
10.真菌Microascus sp.SCSIO 41821在制备权利要求1中式(Ⅰ)所示的化合物中的应用。
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【技术特征摘要】
1.如式(ⅰ)所示中的任一化合物：
2.一种权利要求1所述的化合物microascones a-b(1-2),2,3-epoxyphomapyrrolidone c(3),14,16-epiascomylactam b(4),24-hydroxyphomapyrrolidone a(5),microascones c-e(6-8),ascomylactamsa-b(9-10),phomapyrrolidonesa-c(11-13)的制备方法，其特征在于，是从真菌microascus sp.scsio41821gdmcc 64206的菌丝体中分离得到的。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中所述的浓缩是采用减压浓缩。
5.权利要求1中所述的化合物ascomylactam b,phomapyrrolidones a-c或其药用盐在制备蛋白酪氨酸磷酸酶p...
【专利技术属性】
技术研发人员：漆淑华，姚飞华，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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