一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A及其应用。本发明专利技术利用山羊瘤胃原虫Ophryoscolex caudatus基因组数据，经过组装、注释分析及蛋白表达和功能实验，获得了一个瘤胃原虫特异的溶菌酶，命名为OCLyz1A。该新型来源的溶菌酶酶活力高，并且对以藤黄微球菌为代表的革兰氏阳性菌具有明显抑制作用，可以广泛应用于畜禽饲料、食品及生物工程。食品及生物工程。

【技术实现步骤摘要】
一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程领域，具体涉及一种反刍动物瘤胃原虫“有尾头毛虫”(Ophryoscolex caudatus,O.caudatus)特异溶菌酶(lysozyme,Lyz)在毕赤酵母中的分泌表达方法及应用。

技术介绍

[0002]溶菌酶，又称为胞壁质酶或N
‑
乙酰胞壁质肽聚糖水解酶；其作为一种天然蛋白质，无毒副作用，广泛存在于高等动植物组织及分泌物、原生动物、昆虫和各种微生物中。溶菌酶根据来源不同可以分为蛋清溶菌酶、动物溶菌酶、植物溶菌酶、微生物溶菌酶和细菌噬菌体溶菌酶；其中，微生物溶菌酶作为一种有效的抗菌剂，通过活性中心水解细菌细胞壁肽聚糖上N
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乙酰胞壁酸与N
‑
乙酸葡萄糖胺之间的β
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1,4糖苷键，使肽聚糖骨架结构断裂，造成细胞壁损伤，最终因渗透压不平衡而引起菌体细胞溶解，直至死亡。目前已在反刍动物中鉴定到了多种溶菌酶(例如中国CN111187765A公开的反刍动物瘤胃特异溶菌酶LYZ1)，其在消化系统中含量丰富。在消化系统中溶菌酶对于改变动物肠道微生物群、增加肠道有益菌、增强机体抗病力，及提高动物的生产性能也有显著作用；通过添加溶菌酶到饲料中代替或部分代替抗生素，为解决养殖业中面临的抗药性和药物残留等问题提供了一定的途径。
[0003]目前尚未见到有关反刍动物瘤胃原虫Ophryoscolex caudatus来源的溶菌酶的报道，已有报道仅表明Ophryoscolex caudatus可以促进瘤胃中纤维的消化。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A及其应用。该溶菌酶OCLyz1A可以用作一种新型来源的酶制剂，并广泛应用于畜禽饲料、食品、医学、生物工程、酶工程。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0006]一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A，该溶菌酶OCLyz1A的氨基酸序列为：
[0007]ADEYYTVQSGDYLGKIANRYGVSVSDLCNWNGISNPDLIYPGQRLLVKKSGSSSGSGSGSGSGSGKSGKIYSVTDSQMQKMGWKNYNLPDLNRCLKTFEINTVNRVRHFISQCSHESACGVYTQELGGQSYCSKYDGRRDLGNTQPGDGCRFKGAGYIQLTGRSNYQSFANYIGDSRVMEGVSYVSSKYPWTSAGYWWKSHGLNSLCDNGASVDVITKRVNGGYNGLAERKKYYQRACNIFN。
[0008]优选的，所述溶菌酶OCLyz1A的基因编码序列包括以下DNA序列，或者所述溶菌酶OCLyz1A的基因编码序列选自与以下DNA序列具有90％以上同源性的来源于反刍动物瘤胃原虫基因组的序列：
[0009]5'
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GCTGATGAATATTATACTGTTCAATCAGGTGATTATTTAGGTAAAATTGCAAACAGATATGGTGTATCAGTATCTGATTTATGTAATTGGAATGGTATTTCTAACCCTGATTTAATTTATCCAGGACAAAGACTTCTTGTTAAAAAATCAGGTTCTAGTTCAGGTTCAGGCTCAGGATCAGGTTCAGGTTCAGGTAAATCTGGAAAAATATATTCTGTAACAGATTCACAAATGCAAAAAATGGGTTGGAAAAATTACAATCTTCCTGATTTAAATAGATGTTTAAAAACATT
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‑
3'。
[0010]优选的，所述反刍动物瘤胃原虫为头尾属(Ophryoscolex)，例如有尾头毛虫(Ophryoscolex caudatus)。
[0011]上述反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A在毕赤酵母中的分泌表达方法，包括以下步骤：
[0012]1)构建毕赤酵母重组菌株
[0013]根据所述溶菌酶OCLyz1A的基因编码序列构建甲醇诱导型重组载体，将所述重组载体转化毕赤酵母感受态细胞，得到毕赤酵母重组菌株；
[0014]2)发酵培养
[0015]将毕赤酵母重组菌株通过发酵进行重组溶菌酶OCLyz1A的诱导表达，得到发酵液；
[0016]3)收集发酵液上清，得到重组溶菌酶OCLyz1A蛋白样品。
[0017]优选的，所述重组载体表达的目的基因序列如SEQ.ID.NO.5所示，重组溶菌酶OCLyz1A的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。
[0018]上述反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A在制备抑制革兰氏阳性菌的抗菌药物中的应用。
[0019]上述反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A在制备抑制藤黄微球菌(Micrococcus luteus)的抗菌药物中的应用。
[0020]上述反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A在制备饲料添加剂中的应用。
[0021]一种饲料添加剂，包括上述反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A。
[0022]一种食品添加剂，包括上述反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A。
[0023]本专利技术的有益效果体现在：
[0024]本专利技术通过对反刍动物瘤胃原虫O.caudatus基因组数据进行组装、注释分析，发现了一种瘤胃原虫特异的溶菌酶(命名为OCLyz1A)基因，并根据基因编码序列建立了该溶菌酶在毕赤酵母中的分泌表达方法。所述溶菌酶具有抑制革兰氏阳性菌(例如，藤黄微球菌)的作用，可以作为安全的畜禽饲料及食品添加剂(例如抗菌剂)，极具应用潜力。
[0025]本专利技术根据反刍动物瘤胃原虫O.caudatus特异的溶菌酶(即溶菌酶OCLyz1A)的序列构建可以高效的分泌表达该溶菌酶的甲醇诱导型毕赤酵母重组菌株，使溶菌酶OCLyz1A的生产本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A，其特征在于：该溶菌酶OCLyz1A的氨基酸序列为：ADEYYTVQSGDYLGKIANRYGVSVSDLCNWNGISNPDLIYPGQRLLVKKSGSSSGSGSGSGSGSGKSGKIYSVTDSQMQKMGWKNYNLPDLNRCLKTFEINTVNRVRHFISQCSHESACGVYTQELGGQSYCSKYDGRRDLGNTQPGDGCRFKGAGYIQLTGRSNYQSFANYIGDSRVMEGVSYVSSKYPWTSAGYWWKSHGLNSLCDNGASVDVITKRVNGGYNGLAERKKYYQRACNIFN。2.根据权利要求1所述一种反刍动物瘤胃原虫特异溶菌酶OCLyz1A，其特征在于：所述溶菌酶OCLyz1A的编码序列包括以下DNA序列，或者所述溶菌酶OCLyz1A的编码序列选自与以下DNA序列具有90％以上同源性的来源于反刍动物瘤胃原虫基因组的序列：5'
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GCTGATGAATATTATACTGTTCAATCAGGTGATTATTTAGGTAAAATTGCAAACAGATATGGTGTATCAGTATCTGATTTATGTAATTGGAATGGTATTTCTAACCCTGATTTAATTTATCCAGGACAAAGACTTCTTGTTAAAAAATCAGGTTCTAGTTCAGGTTCAGGCTCAGGATCAGGTTCAGGTTCAGGTAAATCTGGAAAAATATATTCTGTAACAGATTCACAAATGCAAAAAATGGGTTGGAAAAATTACAATCTTCCTGATTTAAATAGATGTTTAAAAACATTTGAAATTAATACAGTTAATAGAGTCAGACATTTCATTTCTCAATGCTCACATGAATCTGCCTGTGGAGTTTATACTCAAGAATTAGGAGGTCAAAGCTATTGCTCAAAATATGATGGAAGAAGAGATTTAGGAAATACACAACCTGGTGATGGATGCAGATTTAAAGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜雨，王香南，李宗军，张禹，王喜宏，田小倩，田健，黄火清，罗会颖，姚斌，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：