一株大青湖黄金杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，特别涉及一株大青湖黄金杆菌及其应用。该菌株于2022年1月17日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CGMCCNO.24314。实验表明，该菌株对二氯甲烷具有显著的降解作用，对初始浓度为2000mg/L的二氯甲烷24h降解率达99.53％，说明该菌株能够有效地去除对生化处理体系中二氯甲烷，且无二次污染，具有显著的经济和环保效益，可广泛应用于含有二氯甲烷的废水、土壤和废气的治理。土壤和废气的治理。

【技术实现步骤摘要】
一株大青湖黄金杆菌及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别涉及一株大青湖黄金杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]二氯甲烷(DCM)是一种使用非常广泛的有机试剂，常用作工业溶剂，应用于有机合成工业和化工工业，如制造安全电影胶片、聚碳酸酯，其余用作涂料溶剂、金属脱脂剂，气烟雾喷射剂、聚氨酯发泡剂、脱模剂、脱漆剂。随着工业化、城市化进程的加快，对其需求量也日益增大。它不仅是大气的主要污染物，还是城市和工业污水的重要组成部分，由于不易被降解而除去，所以在大气和水体系中的半衰期分别为70天和700年。环境中90％以上的来源于化工业的使用和废弃物的燃烧；由于是一种挥发性的物质在其中转和运输的过程中也会有大量的逸出从而对大气环境造成严重的污染。另外，机动车燃料在燃烧后排出的尾气和地表面水体中有机污染物的挥发也会产生的污染。
[0003]二氯甲烷为无色透明液体，有芳香气味。二氯甲烷与明火或灼热的物体接触时能产生剧毒的光气。遇潮湿空气能水解生成微量的氯化氢，光照亦能促进水解而对金属的腐蚀性增强。二氯甲烷微溶于水，溶于乙醇、乙醚。二氯甲烷通过呼吸道、胃肠道和皮肤等途径进入机体，一旦进入机体，70％以上的二氯甲烷进入血液循环分布至全身。二氯甲烷进入生物体内，首先会被细胞色素Paso依赖性的混合功能氧化酶(MFO)代谢，某些二氯甲烷经细胞微粒体中的混合功能氧化酶激活后会转化为致癌物,它们通过在蛋白质的酮
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烯醇互变异构过程中起催化作用，从而导致细胞蛋白质分子的不可逆转变，进而促进细胞的癌变。/>[0004]对二氯甲烷的处理，国内外主要包括燃烧法、化学吸收法、活性炭吸附法和生物处理法。燃烧法、化学吸收法、活性炭吸附法等物理化学法主要处理二氯甲烷含量较高的工业废气，而对于水体、污泥和空气中的低浓度(<3mg/m3)二氯甲烷，净化效果较差，且能耗大，成本高，易产生二次污染，不易推广。生物处理法是基于微生物对二氯甲烷污染物有较强的适应性，并且能以二氯甲烷作为代谢底物，而使二氯甲烷得到降解与转化的特点产生的，它比传统工艺投资少，运行费用低，操作简单，应用范围广。
[0005]高效二氯甲烷降解菌株的筛选是生物修复的关键，二氯甲烷降解菌剂相关专利不多，且均未表明菌株的降解性能及应用推广，高效降解菌株的筛选及降解性能优化是生物修复的关键因素，对菌剂的推广应用及二氯甲烷污染的修复至关重要。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了一株大青湖黄金杆菌及其应用，该菌株对二氯甲烷具有显著的降解作用，易于培养且有稳定的传代特性。
[0007]本专利技术从某石化公司废水处理装置周围土壤及体系污泥中分离纯化得到菌株YJY22
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05，其形态学特征为：为革兰氏阴性菌，该菌株在普通营养琼脂上形成圆形的金黄色菌落，不透明、边缘不整齐、菌落扁平、表面光滑。
[0008]该菌株的16SrDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，该序列为菌株的16SrDNA的全
序列；该16SrDNA序列经过BLAST比对显示，该菌株的16SrDNA的核苷酸序列与金黄杆菌属(Chryseobacterium)不同菌株的核苷酸序列有大于99％的同源性，与其中明确标记为大青湖黄金杆菌(Chryseobacterium daecheongense)的菌株有100％的同源性。
[0009]经形态学和16s rDNA鉴定菌株YJY22
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05为大青湖黄金杆菌(Chryseobacterium daecheongense)，其保藏编号为CGMCC NO.24314。
[0010]本专利技术还提供一种微生物菌剂，其原料包括保藏编号为CGMCC NO.24314的大青湖黄金杆菌。
[0011]本专利技术还提供了所述的微生物菌剂的制备方法，所述微生物菌剂包为固体菌剂或液体菌体。
[0012]所述微生物菌剂为液体菌剂，其制备方法包括：将保藏编号为CGMCC NO.24314的大青湖黄金杆菌活化后制备种子液，然后接种于发酵培养基中发酵，收集发酵后的菌体。
[0013]所述微生物菌剂为固体菌剂，其制备方法包括：将保藏编号为CGMCC NO.24314的大青湖黄金杆菌活化后制备种子液，然后接种于发酵培养基中发酵，收集发酵后的菌体依次进行吸附、干燥和粉碎。
[0014]其中，所述菌种活化为室温条件下活化4h
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10h。
[0015]所述种子液的制备包括：所述种子液的制备包括：将活化后的菌种接种至液体培养基中，于温度为25～37℃，摇床转速为50
‑
170r/min的条件下，振荡培养15
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20h。
[0016]所述发酵为：将大青湖黄金杆菌种子液按体积百分比1％
‑
5％的接种量接种于发酵培养基中进行高密度发酵；所述高密度发酵的条件为：罐压0.02
‑
0.05MPa，温度为25～37℃，转速为200
‑
300r/min，溶解氧≧20％，时间为16～24h。
[0017]所述发酵培养基配方为：葡萄糖1.0％
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1.5％、可溶性淀粉2.2％
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3.8％、硫酸镁0.05％
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0.09％、硫酸铵0.1％
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0.3％、氯化钠0.01％
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0.03％、磷酸二氢钾0.5％
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1.0％、硫酸亚铁0.005％
‑
0.01％、氯化钙0.01％
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0.05％，聚醚消泡剂0.05％，余量的水，pH 7.0
‑
7.2。
[0018]一些具体实施例中，所述微生物菌剂为固体制剂或液体制剂，其制备方法包括如下步骤(1)～(3)或(1)～(4)：
[0019](1)菌种活化：将保存于4℃的保藏编号为CGMCCNO.24314的大青湖黄金杆菌菌种取出，置于室温下活化4
‑
10h，由于菌种保藏于试管斜面营养琼脂培养基上；
[0020](2)液体种子制备：在无菌操作台中，取10mL无菌水加入菌种保藏管内，并利用移液器反复吹打制备菌悬液，然后将菌悬液接种至50
‑
500mL液体LB培养基中，振荡培养15
‑
20h，培养条件为：温度25
‑
37℃，振荡转速50
‑
170rpm；
[0021](3)高密度发酵：将大青湖黄金杆菌液体种子按体积比1％
‑
5％的接种量接种于相应的发酵培养基中进行液体发酵；发酵条件：无菌空气保持罐压0.02
‑
0.05MPa，温度25
‑
37℃，转速200
‑
300rpm，溶解氧≧20％，培养时间为16
‑
24h，得到液体菌剂；
[0022](4)步骤(3)获得的液体菌剂进行吸附、干燥、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.保藏编号为CGMCC NO.24314的大青湖黄金杆菌(Chryseobacterium daecheongense)。2.根据权利要求1所述的大青湖黄金杆菌，其特征在于，其16SrDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。3.一种微生物菌剂，其特征在于，其原料包括保藏编号为CGMCC NO.24314的大青湖黄金杆菌。4.权利要求3所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括：将保藏编号为CGMCCNO.24314的大青湖黄金杆菌活化后制备种子液，然后接种于发酵培养基中发酵，收集发酵后的菌体。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，还包括对发酵后的菌体依次进行吸附、干燥和粉碎的步骤。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述菌种活化为室温条件下活化4h
‑
10h；所述种子液的制备包括：将活化后的菌种接种至液体培养基中，于温度为25～37℃，摇床转速为50
‑
170r/min的条件下，振荡培养15
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20h。7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述发酵为：将大青湖...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯清敏，马娜娜，杨传伦，王建平，李琪琪，司更花，张心青，傅英旬，杨丹丹，潘冬梅，
申请(专利权)人：黄河三角洲京博化工研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：