本发明专利技术公开了一种复合微生物菌剂及其制备方法和在复合污染介质修复中的应用。该复合微生物菌剂包含分离自污染土壤的硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus C1)和产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciensAT)，应用在六价铬和阿特拉津污染水体和土壤的修复中。该复合菌剂在污染水体和土壤中都可以将六价铬快速高效还原为三价铬，降低铬的毒性及迁移性，同时降解阿特拉津，实现铬、阿特拉津复合污染的协同修复。的协同修复。
【技术实现步骤摘要】
nitroguajacolicus)的活菌数均至少为1.1
×
109CFU/mL，优选1.3
×
109CFU/mL以上。
[0008]所述产脲类节杆菌为产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciens)AT，其保藏登记号为CGMCC No.23729；
[0009]所述硝基愈创木胶类节杆菌为所述硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)C1，其保藏登记号为CGMCC No.23728。
[0010]本专利技术中所述复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
[0011](1)液体培养基的制备：在水中加入6g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4，0.5g/L NaCl，0.2g/L MgSO4·
7H2O，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，4g/L葡萄糖；
[0012](2)富集固体培养基的制备：在水中加入6g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4，0.5g/L NaCl，0.2g/L MgSO4
·
7H2O，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，4g/L葡萄糖，400mg/L阿特拉津，10mg/L六价铬，15g/L琼脂粉；
[0013](3)产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciens)的培养：取冷冻保存的保藏编号为CGMCC No.23729的产脲类节杆菌AT菌株，接种于无菌液体培养基，例如，可以采用高温灭菌的方式对液体培养基进行灭菌处理；然后置于温度为30℃，转速为150rpm的恒温震荡培养箱中培养24h；再将培养物接种到无菌新鲜的液体培养基中，重复培养二次，得到活化的菌液，活菌数达到2.6
×
109CFU/mL以上。
[0014](5)硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)的培养：取冷冻保存的保藏编号为CGMCC No.23728的硝基愈创木胶类节杆菌C1菌株，接种于无菌液体培养基，例如，可以采用高温灭菌的方式对液体培养基进行灭菌处理；然后置于温度为30℃，转速为150rpm的恒温震荡培养箱中培养24h；再将培养物接种到无菌新鲜的液体培养基中，重复培养二次，得到活化的菌液，活菌数达到2.6
×
109CFU/mL以上。
[0015](6)复合菌剂的复配：将活化的菌硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)和产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciens)菌液按照体积比1:1的比例复配，并加入体积分数的甘油，得到液体复合微生物菌剂。
[0016]所述液体复合微生物菌剂在4℃保持3个月，各功能菌的活菌数保持在1.1
×
109CFU/mL以上。
[0017]所述液体复合微生物菌剂中各功能菌的活菌数至少为1.1
×
109CFU/mL，优选1.3
×
109CFU/mL以上。
[0018]本专利技术还提供了上述复合微生物菌剂在六价铬和阿特拉津复合污染水体和/或土壤的修复中的应用。
[0019]本专利技术将构建的复合微生物菌剂应用在铬、阿特拉津复合污染水体和土壤的修复中。该复合菌剂在水体和土壤中都可以将六价铬快速高效还原为三价铬，降低铬的毒性及迁移性，同时降解阿特拉津，实现对铬、阿特拉津复合污染的高效协同修复。
[0020]本专利技术还提供了一种对六价铬和阿特拉津复合污染水体和/或土壤修复的方法。
[0021]本专利技术所提供的方法，包括下述步骤：将本专利技术上述复合微生物菌剂加入所述复合污染水体或土壤中进行修复。
[0022]所述复合污染水体中，所述复合微生物菌剂中硝基愈创木胶类节杆菌的加入量为(1.1～1.3)
×
108CFU/mL；产脲类节杆菌的加入量为(1.1～1.3)
×
108CFU/mL。
[0023]所述复合污染土壤中，所述复合微生物菌剂中硝基愈创木胶类节杆菌的加入量为
(1.1～1.3)
×
108CFU/g；产脲类节杆菌的加入量为(1.1～1.3)
×
108CFU/g。
[0024]本专利技术提出的基于合成微生物学的原理构建复合微生物菌剂的方法为：在复合污染土壤中针对性筛选具有复合污染物去除效果的功能菌株，然后基于代谢分工的原理，将功能菌株与辅助菌进行复合，利用微宇宙实验验证其对两种污染物的去除效果，然后利用模拟污染土壤验证该复合微生物菌剂对复合污染物的去除能力，从而将复合微生物菌剂应用于原位复合污染土壤的修复中。
[0025]本专利技术的还保护一株产脲类节杆菌。
[0026]本专利技术所保护的产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciens)AT，已于2021年11月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.23729。
[0027]本专利技术的还保护一株硝基愈创木胶类节杆菌。
[0028]本专利技术所保护的硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)C1，已于2021年11月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.23728。
[0029]本专利技术基于合成微生物学的原理构建合成微生物菌群，不仅可以促进六价铬和阿特拉津的协同去除，也为其他复合污染的微生物修复提供了参考，促进微生物修复技术在复合污染场地修复中的应用。
附图说明
[0030]图1为水体中六价铬的浓度随时间变化图；
[0031]图2为水体中阿特拉津的浓度随时间变化图；
[0032]图3为模拟污染土壤中六价铬的去除率随时间变化图；
[0033]图4为模拟污染土壤中阿特拉津的去除率随时间变化图；
[0034]图5为实际污染土壤中六价铬的剩余浓度随时间变化图；
[0035]图6为实际污染土壤中阿特拉津的剩余浓度随时间变化图。
具体实施方式
[0036]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步阐述，但本专利技术并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
[0037]下述实施例中六价铬的还原率的计算方法为：六价铬还原率＝1
‑
六价铬剩余浓度/六价铬初始浓度。
[0038]下述实施例中阿特拉津的降解率的计算方法为：阿特拉津降解率＝1
‑
阿特拉津剩余浓度/阿特拉津初始浓度。
[0039]实施例1、硝基愈创木胶类节杆菌C1以及本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种复合微生物菌剂，包括硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)和产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciens)；所述产脲类节杆菌为产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciens)AT，其保藏登记号为CGMCC No.23729；所述硝基愈创木胶类节杆菌为所述硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)C1，其保藏登记号为CGMCC No.23728。2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于：所述复合微生物菌剂为液体复合微生物菌剂，其中产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciens)和硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)的活菌数均至少为1.1
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109CFU/mL，优选1.3
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109CFU/mL以上。3.权利要求1或2所述的复合微生物菌剂的制备方法，包括下述步骤：将活化的菌硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus)和产脲类节杆菌(Paenarthrobacter ureafaciens)的菌液按照体积比1:1的比例复配，并加入体积分数1％∽5％的甘油，得到所述复合微生物菌剂。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述硝基愈创木胶...
【专利技术属性】
技术研发人员：白志辉，李祥龙，吴尚华，庄绪亮，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：
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