一种脂肪酸在提高CHO细胞表达治疗性抗体浓度中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种脂肪酸在提高CHO细胞表达治疗性抗体浓度中的应用。涉及蛋白质工程技术领域，该添加物确切成分为类二十烷酸C20:2。在表达治疗性抗体的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养过程中，添加C20:2能够提高CHO细胞在培养过程中的抗逆性，从而有效提高治疗性抗体的产量，且不影响抗体的质量。且不影响抗体的质量。且不影响抗体的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪酸在提高CHO细胞表达治疗性抗体浓度中的应用


[0001]本专利技术涉及蛋白质工程
，具体涉及一种脂肪酸在提高CHO细胞表达治疗性抗体浓度中的应用。

技术介绍

[0002]抗体是由浆细胞产生的可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白，治疗性抗体在重大疾病的预防和治疗中起着十分重要的作用。现阶段，哺乳动物表达系统通常是制造生物制药的首选平台。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞是哺乳动物细胞中生产人用治疗性蛋白药物的首选(KAPLON H,et.al.,MAbs,2020)。CHO细胞具有良好的可塑性和抗逆性，能够在生物反应器中高密度生长，并高质量地表达外源治疗性蛋白。
[0003]目前提高CHO细胞生产抗体的方法主要有两种：1、基因工程改造CHO细胞。该方法主要针对影响CHO细胞生产抗体过程的细胞相关基因，如涉及凋亡、生长、代谢、蛋白分泌和修饰相关的靶点开展相应的基因编辑，从而获得或失去某种功能(Changzhi Xu,et.al.,Applied Microbiology and Biotechology,2019)。这些方法能够获得性能优化的改造细胞株，但也存在筛选周期长、多基因编辑带来的不稳定性和潜在的脱靶问题等；2、培养策略和培养基优化。在培养基中添加不同的营养物或制剂能够起到同样的促进效果。例如在培养基中添加α
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生育酚(Toronjo
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Urquiza L,et.al.,Antioxidants,2019)、3/>‑
甲基腺嘌呤(Baek E,et.al.,Biotechnology and Bioengineering,2016)、丙戊酸(Segar K P,et.al.,Journal of Bioscience and Bioengineering,2017)和缬氨酸(Savizi I S P，Applied Microbiology and Biotechnology,2022)等均显示出一定的促进效果。这些添加物大部分是外源物质，对细胞生长、抗体纯化等也存在一定的影响。寻找细胞内源性的潜在物质是一个重要的开发方向。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的在于提供一种脂肪酸在提高CHO细胞表达治疗性抗体浓度中的应用，可以有效解决
技术介绍
中的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0006]本专利技术还提供一种脂肪酸在提高CHO细胞表达治疗性抗体浓度中的应用。
[0007]进一步改进在于，所述脂肪酸为脂肪酸C20:2。
[0008]进一步改进在于，所述CHO细胞为CHO
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K1、CHO
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IgG细胞。
[0009]进一步改进在于，所述脂肪酸的添加浓度范围为0
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20μM。
[0010]进一步改进在于，所述CHO细胞表达治疗性抗体的培养方法为批次培养、流加培养或瞬时转染中的一种。
[0011]脂肪酸是重要的营养物质，根据双键的数目可以将其划分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。脂肪酸是生物膜的重要组成成分，进入细胞后还能够通过氧化分解供能，一些脂肪酸衍生物更是重要的信号传导分子，广泛参与细胞的多种生命过程。
低温能诱导CHO细胞中脂肪酸的不饱和度升高，带来治疗性蛋白的产量升高。过表达脂代谢全局调控基因SREBF1和SCD1后能显著增强CHO细胞中治疗性蛋白的产量。然而更直接地方法可以通过筛选脂质添加物进行处理。
[0012]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术通过在CHO细胞生产抗体过程中添加相应浓度的C20:2，能够促进相应治疗性抗体的产量，且不影响抗体的质量，促进抗体生产行业的产量提升。
附图说明
[0013]图1为脂肪酸C20:2添加后对6孔板中细胞的生长和抗体浓度的影响图；
[0014]图2为批次培养中脂肪酸对细胞生长和产抗能力的影响图；
[0015]图3为流加培养中脂肪酸对细胞生长和产抗能力的影响图；
[0016]图4为脂肪酸C20：2对细胞凋亡的影响图；
[0017]图5为脂肪酸C20:2对抗体质量的影响图；
[0018]图6为脂肪酸C20:2对瞬时表达抗体的影响图。
具体实施方式
[0019]以下结合附图(表)和具体实施方式对本专利技术的技术方案作清楚、完整地描述。需要指出的是，所描述的实施例是示例性的，不是限制性的。这些实施例不会以任何方式限制本专利技术的范围。另外，对于下述实施例中未说明或未详细说明的技术，均为现有技术，因而不再详细说明。
[0020]1、材料
[0021]本实施例中所用的实验方法，如无特殊说明均为常规生化方法；本实施例中所用的试验材料如无特殊说明均为常规生化试剂公司购买所得。其中，实验所用CHO
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K1细胞、CHO
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IgG细胞均由本实验室保存。其他试验材料见表1。本实施例中的实验均设置三次重复实验，结果取平均值，*表示P<0.05，**表示P<0.01，***表示P<0.001。
[0022]表1细胞生物学试剂耗材及厂家
[0023][0024][0025]2、实验方法及结果
[0026]2.1脂肪酸C20:2对细胞活力的影响
[0027]2.1.1实验方法
[0028]细胞计数：贴壁细胞计数时，按照传代的方法，用新鲜的完全培养基重悬皿底细胞以后，吸出细胞悬液置于离心管中，加入0.4％的台盼蓝染液，用移液枪混匀后取出加至细胞计数板槽内，自动计数，记录活细胞数目以及活力百分比。悬浮细胞计数时，将细胞悬液混匀后直接吸出置于离心管中，按照贴壁细胞一样的方法计数。
[0029]MTT药物毒性实验：待细胞长到对数生长期时，用胰蛋白酶EDTA溶液处理细胞，消化完成后用培养液将细胞轻轻吹打。取一部分细胞悬液进行计数，调整铺板浓度为0.5
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1*105/mL，MTT实验铺板量一般为6000
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11000个细胞/孔。将细胞悬液制备好后轻轻混匀，100μL/孔加入到96孔板中。细胞在培养箱放置24h长出形态后，用移液枪将孔内的旧培养基吸去，再加入不含血清的培养液培养12h结束后，小心吸去不含血清的培养液后加入提前配好的脂肪酸加入96孔板中，继续培养48h后，取出96孔板，用移液枪吸取20μL的MTT溶液(5mg/mL)沿壁加入到96孔板的各孔中，继续培养4h。用移液枪小心吸去孔内培养液，用排枪每孔加入150μL的DMSO，然后将96孔板放到摇床上低速震荡10min，使之成为均一的液体。用多功能酶标仪检测各孔波长在490nm处的吸光值。
[0030]2.1.2评价指标及结果
[0031]结果显示，26种常见的脂肪酸在40μM之内对CHO
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K1细胞及CHO
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂肪酸在提高CHO细胞表达治疗性抗体浓度中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述脂肪酸为脂肪酸C20:2。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述CHO细胞为CHO
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K1、CHO
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【专利技术属性】
技术研发人员：张部昌，刘晓艺，秦欢欢，徐昌志，
申请(专利权)人：阜阳天祥食品科技有限公司，
类型：发明
国别省市：