产生引发针对病毒的非病毒粒子组成衍生表位的人白细胞抗原I类限制性CD8T细胞应答的疫苗组合物的方法技术

用于提供能够在施用时有效诱导全身免疫应答和/或局部免疫应答的疫苗组合物的方法，其中该组合物包含选自病毒病原体非病毒粒子组成蛋白(非VIP)的人白细胞抗原I类(HLAI)限制性表位，并因此引发特异性针对病毒感染细胞的CD8T细胞应答。的CD8T细胞应答。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产生引发针对病毒的非病毒粒子组成衍生表位的人白细胞抗原I类限制性CD8 T细胞应答的疫苗组合物的方法


[0001]本专利技术涉及免疫学和疫苗。更具体地，本专利技术涉及用于制备疫苗组合物的方法和用于对抗病毒病原体的疫苗组合物。具体地，本专利技术涉及产生可作为病毒感染的预防剂或治疗剂的可施用疫苗组合物的方法。

技术介绍

[0002]病毒疫苗组合物
[0003]目前，市售疫苗制剂主要针对全病毒可读框(ORF)，通常寻求引发中和免疫球蛋白(Ig)应答，以赋予针对目标病毒病原体的免疫。接种策略通常未寻求专门选择HLA限制性T细胞表位纳入疫苗组合物。通常，任何HLA限制性表位(HLA
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restricted epitopes；HRE)的表征仅限于存在于包括病毒粒子或“病毒粒子组成蛋白”(virion
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integral proteins；VIP)的蛋白质中的表位，因为在有临床表现的病毒感染中，主要观察到针对这些特定的病毒ORF产物的T细胞应答，因此推测其可赋予生产性T细胞介导的细胞免疫。然而，疫苗组合物中包含VIP衍生的HRE通常是旨在引发B细胞驱动的Ig应答的结果，通常没有考虑目标病毒复制和在受感染宿主内传播的生命周期，也没有考虑该生命周期如何引发宿主内的T细胞中心细胞免疫。因此，在尝试利用或规避疫苗组合物中的T细胞免疫时，应仔细考虑病毒生命周期、病毒免疫逃逸和免疫病理的可能性。
[0004]对病毒感染的适应性免疫应答
[0005]病毒感染的临床表现通常与病毒免疫逃逸和/或病毒诱导的免疫病理相关。这些免疫病理通常可归因于对“病毒编码蛋白”(virally encoded proteins；VEP)的过度应答。在具有临床表现的自然病毒感染期间，针对VEP产生Ig通常仅限于病毒粒子表面可用的VIP，用于针对病毒Ig表位的B细胞采样和成熟。这与具有临床表现的病毒感染中的优势T细胞应答类似，患者T细胞通常仅限于衍生自VIP的HRE。相比之下，由于病毒生命周期因素的组合以及宿主免疫系统在病毒生命周期中的反应方式，病毒的非病毒粒子组成蛋白(non
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virion
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integral protein；非VIP)通常驱动次优势T细胞应答。宿主免疫通常进行VEP驱动的特定固有和适应性应答的主动免疫逃逸。事实上，病毒非VIP通常造成病毒驱动的宿主固有免疫应答失调，从而改变下游适应性免疫应答的过程。
[0006]对疫苗组合物的人白细胞抗原(HLA)限制性表位规范面临的挑战
[0007]由于人群中HLA单倍型的高度多样性，将病毒HRE纳入疫苗组合物中的规范一直面临挑战。HLA等位基因变异体代表了高等生物中最多样化的基因家族，其中HLA基因的遗传多样性在群体水平赋予了多样化HRE呈递的广泛可能。也就是说，HLA基因的遗传多样性驱动蛋白质水平的多样性，进而驱动HRE在细胞表面装载和呈递的差异选择。普遍缺乏系统和准确的工具来以功能性方式分析特定HRE的高度复杂的加工和呈递，这限制了系统和可靠地从VEP鉴定HRE。此外，复杂的T细胞受体(TCR)驱动的对这些HRE的T细胞识别，驱动了下游T细胞中心的适应性免疫和免疫耐受的多样化阵列。缺乏系统的生物技术工具来从功能上
分析HRE特异性T细胞应答，这进一步阻碍了定向分析针对VEP的T细胞应答，以确定是否将其纳入疫苗组合物。
[0008]HLAI类和II类及相关T细胞应答
[0009]两类主要的HLA，即I类(HLAI)II类(HLAII)，通常分别引发CD8和CD4 T细胞应答，在见于所有有颌脊椎动物中。HLAI分子由所有有核细胞呈递，并且通常呈递主要通过蛋白酶体降解和将该降解产物转运至内质网(ER)来处理的细胞内蛋白质。在内质网内，在酶驱动HLAI分子装载HLAI
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HRE和随后运输到细胞表面进行T细胞采样的过程中可以发生进一步的蛋白水解加工。HLAI分子还呈递在专职抗原呈递细胞(APC)的表面。诸如树突状细胞(DC)或巨噬细胞的专职APC是适应性免疫的中心介质。在专职APC内，还存在其他加工和运输途径，使得能够将衍生自细胞外环境采样的蛋白质抗原降解产物递送至ER用于HLAI交叉呈递。相比之下，HLAII分子仅组成性呈递在专职APC的表面。HLAII分子在很大程度上仅限于呈递在这样的加工中衍生自细胞外环境采样的蛋白质降解产物，所述加工涉及细胞外有效载荷(payload)在内吞囊泡内的内吞，以与含有HLAII分子的不同囊泡区室融合，以及一系列加工酶和伴侣酶，其指导HLAII分子装载HRE，然后输出到细胞表面用于T细胞采样。
[0010]HLAI类和CD8 T细胞应答
[0011]CD8 T细胞群体的主要功能是作为细胞毒性淋巴细胞(CTL)发挥作用，其在检测到靶细胞呈递关联HLAI
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HRE表位后，介导对靶细胞执行多种细胞死亡机制，其中所述HLAI
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HRE表位激活相关CD8 CTL克隆携带的TCR。因此，CD8 T细胞对HLAI
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HRE的检测包括监视有核细胞的细胞内蛋白质组，从而代表适应性细胞免疫对细胞内表达的非自身蛋白作出应答的中心机制。这标志着检测HLAI
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HRE的CD8 T细胞应答是抵抗异常增生和恶性细胞转化以及病毒感染，以及细菌、寄生虫或其他细胞内微生物感染的主要防御手段。HLAI
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HRE是相对短的肽，与HLAII
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HRE相比，具有更严格的物理化学限制。HLAI
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HRE相对严格的性质反映了严格控制CD8 CTL适应性应答的要求，以避免针对衍生自自身和非自身抗原组分的HLAI
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HER的虚假CD8 CTL应答引起的组织损伤。
[0012]HLAII类和CD4 T细胞应答
[0013]HLAII
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HRE定向的CD4 T细胞应答比HLAI
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HRE CD8 T细胞应答更为复杂和多样。一般而言，将CD4 T细胞视为“辅助”细胞，其通过向白细胞和非白细胞同样地发出信号来协调固有免疫应答和适应性免疫应答。就适应性免疫而言，HLAII
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HRE CD4T细胞应答对于驱动B细胞成熟以产生高亲和力Ig应答是必要的，并且还涉及将CD8T细胞定型至例如记忆细胞分化。在检测从细胞外空间采样的HLAII
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HRE时，CD4 T细胞对于协调对包括细胞外微生物在内的感染的适应性免疫应答至关重要，主要是通过B细胞成熟驱动体液Ig应答的进展。例如，负责针对共生微生物和食品的免疫耐受的调节T细胞(Treg)，也主要可鉴定为采样HLAII
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HRE的CD4 T细胞。这些HLAII
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HRE CD4 Treg应答在针对病原微生物的固有免疫应答和适应性免疫应答中也发挥着关键的质量控制和炎症消退作用，例如限制病毒相关免疫病理的可能性。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.产生用于对抗病毒病原体的疫苗组合物的方法，其包括：a.从病毒病原体鉴定出非病毒粒子组成蛋白衍生的人白细胞抗原I类限制性表位(非VIP衍生HLAI
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HRE)，其中希望得到针对该病毒病原体的疫苗组合物；b.对该鉴定的非VIP衍生HLAI
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HRE在分离自无先前目标病毒感染的供者的幼稚CD8 T细胞群体中、和/或在分离自具有经确认的活动性、潜伏性或已消退的目标病毒感染的供者的记忆CD8 T细胞群体中的免疫原性进行分类；c.选择在无先前目标病毒感染的供者中具有确认的免疫原性的非VIP衍生HLAI
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HRE，或在已确认活动性、潜伏性或已消退的目标病毒感染的供者中具有观察到的CD8 T细胞应答的非VIP衍生HLAI
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HRE；d.将该选择的非VIP衍生HLAI
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HRE纳入疫苗组合物中。2.根据权利要求1所述的方法，其中选择多个非VIP衍生HLAI
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HRE纳入疫苗组合物中，以代表所选择的HLAI等位基因中的一个或多个HLAI
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HER，所述所选择的HLAI等位基因代表为其设计该疫苗组合物的目标人群内至少60％的个体携带的那些等位基因。3.根据权利要求1所述的方法，其中选择一个或多个非VIP衍生HLAI
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HRE纳入疫苗组合物中，以代表所选择的一个或多个HLAI等位基因中的一个或多个HLAI
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HER，所述所选择的一个或多个HLAI等位基因被为其设计该疫苗组合物的个体携带。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中该疫苗组合物包含选自以下的一种或多种接种载体：a.重组非复制型或复制型病毒载体；b.病毒样颗粒；c.具有或不具有修饰核苷酸的重组RNA构建体；d.具有或不具有修饰核苷酸的重组DNA构建体；e.具有或不具有修饰氨基酸的重组蛋白质；f.具有或不具有修饰氨基酸的合成多肽。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述一种或多种接种载体选自a、b或c，并且其中将该所选择的非VIP衍生HLAI
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HRE掺入不允许在疫苗递送时在宿主细胞中表达功能性非VIP蛋白的表达构建体中，以避免所述病毒非VIP的免疫逃逸活性。6.根据权利要求5所述的方法，其中借助以下一种或多种方式提供所选择的非VIP衍生HLAI
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HRE：a.在全长非VIP ORF内...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：杰诺维有限公司，
类型：发明
国别省市：