包含具有特定基因顺序的核酸构建体的甲型猪流感病毒疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种以此顺序编码Scot/94谱系的第一甲型猪流感病毒(IAV

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含具有特定基因顺序的核酸构建体的甲型猪流感病毒疫苗
[0001]本专利技术涉及一种以此顺序编码Scot/94谱系的第一甲型猪流感病毒(IAV
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S)血凝素(HA)抗原和欧亚类禽(Eurasian
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avian like，EA)谱系的第二甲型猪流感病毒(IAV
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S)血凝素(HA)抗原的核酸构建体，以及以此顺序编码Gent/84谱系的第一IAV
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S HA抗原和大流行09(pdm09)谱系的第二IAV
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S HA抗原的核酸构建体。在其他实施方案中，本专利技术涉及包含一种或两种核酸构建体的RNA复制子颗粒、例如疫苗的免疫原性组合物，其可用于抵抗甲型流感病毒感染且包含所述复制子颗粒。进一步提供了制备疫苗的方法和疫苗的用途。

技术介绍

[0002]甲型流感病毒(IAV)在世界范围内对人类和动物的健康造成重大负担。IAV基于病毒表面糖蛋白、血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)，被分为不同亚型。IAV感染家禽、猪、马、猫、狗、海洋哺乳动物(例如，鲸)、蝙蝠和人。野生水禽和岸鸟(鸭、鹅、天鹅和鸥)是天然储存宿主(reservoir)，它们可以被16种不同的HA和9种不同的NA亚型感染[Webster等，Microbiol Rev 56:152
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179(1992)]。
[0003]甲型猪流感病毒(IAV
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S)是一种世界范围内的严重的家猪呼吸道病原体，其已被证明造成巨大经济损失，特别是对畜牧业[Holtkamp等，The American Association of Swine Veterinarians Annual Meeting(2007)]。它的特征在于呼吸疾病的突然发作，并且通常伴有厌食、嗜睡和发烧。除了生产动物中的与IAV
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S相关的临床并发症之外，已发表的报告还表明猪会将流感病毒传播给人类[Myers KP,Olsen CW,Gray GC.Clin Infect Dis 2007；44(8):1084
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8,Krueger和Gray,Curr Top Microbiol Immunol 370:201
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225(2013)]，这代表重大的公共卫生威胁，为控制猪群中的IAV提供了更大的动机。
[0004]针对这一问题，许多养猪户现在应用市售疫苗对其猪进行疫苗接种以抵抗IAV
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S。但是，用常规疫苗控制IAV
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S是困难的，因为许多不同的IAV
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S毒株在田间共同传播并持续进化[Gao等，J Gen Virol 98(8):2001
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2010(2017)]。IAV
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S的多样性和可变性是由病毒的遗传结构引起的。与其他甲型流感病毒一样，IAV
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S具有在8个RNA片段上编码的基因和引入频繁突变的基因组复制机制。这些遗传特征使得IAV
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S能够进行快速适应，包括逃避由暴露先前的毒株诱导的现有中和抗体。因此，美国市场上可商购的灭活病毒IAV
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S疫苗虽然包含多达5种不同的IAV
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S毒株，但已被证明是不合适的，因为连续的抗原漂移和/或转移将产生新出现的毒株。
[0005]甲型流感病毒的分类开始于HA和NA的亚分型，它们是病毒表面上的两种主要糖蛋白。HA蛋白介导病毒与宿主细胞的附着和融合。神经氨酸酶是在流感病毒复制周期的最后阶段起作用的酶，其通过裂解由宿主细胞新形成的病毒颗粒，从而使新的子代病毒能够传播并感染其他细胞。最近的研究表明，NA免疫相对于更关键的HA免疫仅能发挥补充和/或互补作用[Nayak等，J Virol 84(5):2408
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2420(2010)；Pavlova等，Vaccine 27(5):773
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785(2009)；Sylte等，Vaccine 25(19):3763
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72(2007)]。实际上，似乎在不存在血凝素抗原的情况下，神经氨酸酶甲型流感病毒疫苗的效力不足以预防甲型流感病毒感染或预防甲型流感病毒诱发的疾病。
[0006]尽管人甲型流感通常具有在给定流感季节期间全球传播的1或2个优势毒株，但是更多的IAV
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S毒株同时共同传播，这些毒株在地理区域之间不同。类似地，IAV
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S毒株也是抗原性可变的，但主要包含HA的H1或H3亚型和NA的N1或N2亚型。在IAV
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S的每个HA和NA亚型内存在进一步的系统发育多样性。
[0007]美国猪群中存在H1的四种主要系统发育簇(γ、δ1、δ2、大流行)、H3的两种主要簇(IV簇和人样簇)、N1的两种主要簇(经典、大流行)和N2的两种主要簇(N2
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1998和N2
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2002)。[参见，Anderson等，Influenza and other Respiratory Viruses 7(Suppl.4)；42
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51(2013)；和Anderson等，mSphere 1(6)e00275
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16:1
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14(2016)]。
[0008]欧洲存在H1的三种主要谱系(欧亚类禽H1、Scotland/410440/1994
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样H1和2009大流行样H1)、H3的一种主要主要谱系(Gent/1/1984
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样H3)、N1的两种主要谱系(欧亚类禽N1、2009大流行样N1)、N2的两种主要谱系(Gent/1/1984
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样N2、Scotland/410440/1994
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样N2)和N2的两种次要谱系(Italy/4675/2003样N2、人季节性样N2)[Watson等，J.Virol.,89:9920
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9931(2015)；doi:10.1128/JVI.00840
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15]。
[0009]针对IAV
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S的疫苗接种代表了减少猪的临床并发症以及降低从猪到人的另外的重配和动物传染病传播的机会的最佳选择。直到最近，唯一可广泛使用的疫苗是由在鸡胚中生长的流感病毒制备的灭活疫苗，但是它们的供应在很大程度上受到缺乏特定无病原体卵的限制，由此大家公认需要流感疫苗的新制备方法。
[0010]对于常规的灭活病毒IAV
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S疫苗，病毒株的选择基于HA抗原特性。诱导HA抑制(HI)抗体滴度的IAV
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S疫苗保护猪免受抗原性类似毒株的实验性感染[Kyriakis等，Vet Microbiol 144(1
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2):67
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74(2010)]。但是，HA基因的相对快速的遗传漂移允许不受疫苗诱导的HA抗体功能性抑制的新毒株出现。
[0011]因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在受试者的由甲型猪流感病毒(IAV
‑
S)引发的疾病的预防中使用的核酸构建体，所述核酸构建体以其核酸序列的5
’
至3
’
的顺序包含：编码A/swine/Scotland/410440/1994
‑
样H1
hu
N2(Scot/94)谱系的IAV
‑
S的第一血凝素(HA)抗原的第一核酸序列，和编码欧亚类禽H1
av
N1(EA)谱系的IAV
‑
S的第二HA抗原的第二核酸序列。2.根据权利要求1所述使用的核酸构建体，其中所述第一HA抗原来自毒株A/swine/Italy/3033
‑
1/2015(H1N2)。3.根据权利要求1或2所述使用的核酸构建体，其中由所述第一核酸序列编码的所述第一HA抗原包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或与其具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述使用的核酸构建体，其中所述第二HA抗原来自毒株A/swine/Italy/28762
‑
3/2013(H1N1)。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述使用的核酸构建体，其中由所述第二核酸序列编码的所述第二HA抗原包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。6.一种用于在受试者的由甲型猪流感病毒(IAV
‑
S)引发的疾病的预防中使用的核酸构建体，所述核酸构建体以其核酸序列的5
’
至3
’
的顺序包含：编码A/swine/Gent/1/1984
‑
样H3N2(Gent/84)谱系的IAV
‑
S的第一HA抗原的第一核酸序列，和编码A(H1N1)pdm09(pdm09)谱系的IAV
‑
S的第二HA抗原的第二核酸序列。7.根据权利要求6所述使用的核酸构建体，其中所述第一HA抗原来自毒株A/swine/Italy/240849/2015(H3N2)。8.根据权利要求6或7所述使用的核酸构建体，其中由所述第一核酸序列编码的所述第一HA抗原包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。9.根据权利要求6
‑
8中任一项所述使用的核酸构建体，其中所述第二HA抗原来自毒株A/swine/England/373/2010(H1N1)。10.根据权利要求6
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9中任一项所述使用的核酸构建体，其中由所述第二核酸序列编码的所述第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：