一种传染性胰脏坏死病佐剂疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种传染性胰脏坏死病佐剂疫苗及其制备方法。本发明专利技术提供的传染性胰脏坏死病疫苗由传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide

【技术实现步骤摘要】
一种传染性胰脏坏死病佐剂疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种传染性胰脏坏死病佐剂疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]传染性胰脏坏死病(infectious pancreatic necrosis，IPN)的病原为传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus，IPNV)，属于双RNA病毒科，水生双RNA病毒属，可感染多种海淡水鱼类。在我国，IPN主要威胁虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、褐鳟(Salmo trutta)、美洲红点鲑(Salvelinus fontinalis)、细鳞鲑(Brachymystax lenok)等鲑鳟鱼类。根据环境、宿主、毒株等不同，IPNV最高可造成幼鱼80％以上的死亡率，已经成为限制我国鲑鳟鱼产业发展的病害难题之一。
[0003]目前，我国尚无任何有效的防控IPN药物。由于毒株存在变异及存在生物安全隐患等问题，国外商业化疫苗无法直接引进应用，因此我国鲑鳟鱼病害难题只能通过疫苗的自主研发来解决。课题组在前期利用本土毒株，开展了IPN灭活疫苗的研制工作，通过利用β
‑
丙内酯(BPL)进行灭活，制备了IPN灭活疫苗(参见中国专利申请CN113583968A)。利用该疫苗直接对虹鳟进行免疫，结果发现所制备的灭活疫苗具有较理想的早期保护效力，但是随着时间的延长，在免疫后45天开始，疫苗免疫保护效率开始下降，不具备长保护期，无法满足市场需求，因此极有必要对现有的灭活疫苗进行优化。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种传染性胰脏坏死病佐剂疫苗及其制备方法。
[0005]第一方面，本专利技术要求保护一种传染性胰脏坏死病疫苗。
[0006]本专利技术要求保护的传染性胰脏坏死病疫苗，由传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂组成。
[0007]进一步地，在所述传染性胰脏坏死病疫苗中，Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积百分含量为10％
‑
20％(即所述传染性胰脏坏死病毒灭活液的体积百分含量为80
‑
90％)。
[0008]更进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积比可为9:1。
[0009]进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液可为传染性胰脏坏死病毒经甲醛灭活后所得。
[0010]更进一步地，利用甲醛对所述传染性胰脏坏死病毒进行灭活时，甲醛的终浓度可为0.25％
‑
2.5％(如0.25％)体积百分含量。
[0011]进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液在灭活前的病毒滴度可为107TCID
50
/0.1ml。
[0012]进一步地，所述传染性胰脏坏死病疫苗可按照如下第二方面中所述的方法制备得到。
[0013]第二方面，本专利技术要求保护一种制备传染性胰脏坏死病疫苗的方法。
[0014]本专利技术要求保护的制备传染性胰脏坏死病疫苗的方法，可包括如下步骤：
[0015](A)制备传染性胰脏坏死病毒灭活液；
[0016](B)将所述传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂混合，制备得到传染性胰脏坏死病疫苗。
[0017]进一步地，在所述传染性胰脏坏死病疫苗中，Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积百分含量为10％
‑
20％(即所述传染性胰脏坏死病毒灭活液的体积百分含量为80
‑
90％)。
[0018]更进一步地，在所述传染性胰脏坏死病疫苗中，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积比可为9:1。
[0019]进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液可为传染性胰脏坏死病毒经甲醛灭活后所得。
[0020]进一步地，利用甲醛对所述传染性胰脏坏死病毒进行灭活时，甲醛的终浓度可为0.25％
‑
2.5％(如0.25％)体积百分含量。
[0021]进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液在灭活前的病毒滴度可为107TCID
50
/0.1ml。
[0022]在步骤(A)中，所述制备传染性胰脏坏死病毒灭活液可按照如下进行：取病毒滴度为107TCID
50
/0.1ml的传染性胰脏坏死病毒液，加入甲醛使其终浓度为0.25％
‑
2.5％(如0.25％)体积百分含量，混匀；置于摇床，24
‑
26℃(室温)条件下，100r/min灭活12h，利用终浓度为1mM的亚硫酸氢钠溶液终止灭活，即得传染性胰脏坏死病毒灭活液。
[0023]在步骤(B)中，将所述传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂混合前，还可包括将Montanide
TM GEL 02PR佐剂进行灭菌的步骤。如高温高压灭菌锅(116℃)灭菌20min。
[0024]第三方面，本专利技术要求保护传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂在制备传染性胰脏坏死病疫苗中的应用。
[0025]进一步地，在所述传染性胰脏坏死病疫苗中，Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积百分含量为10％
‑
20％(即所述传染性胰脏坏死病毒灭活液的体积百分含量为80
‑
90％)。
[0026]更进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积比可为9:1。
[0027]进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液可为传染性胰脏坏死病毒经甲醛灭活后所得。
[0028]更进一步地，利用甲醛对所述传染性胰脏坏死病毒进行灭活时，甲醛的终浓度可为0.25％
‑
2.5％(如0.25％)体积百分含量。
[0029]进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液在灭活前的病毒滴度可为107TCID
50
/0.1ml。
[0030]在上述各方面中，本专利技术所述疫苗可用于预防IPNV宿主感染传染性胰脏坏死病毒，用于预防和/或治疗IPNV宿主因感染传染性胰脏坏死病毒所致疾病。
[0031]本专利技术还要求保护所述疫苗在预防和/或治疗IPNV宿主因感染传染性胰脏坏死病毒所致疾病中的应用。
[0032]本专利技术还要求保护一种预防和/或治疗IPNV宿主因感染传染性胰脏坏死病毒所致
疾病的方法，包括如下步骤：使用本专利技术所述疫苗实现对IPNV宿主因感染传染性胰脏坏死病毒所致疾病的预防和/或治疗。
[0033]其中，所述IPNV宿主可为鱼类，如鲑鳟鱼(Salmon and trout本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种传染性胰脏坏死病疫苗，由传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂组成。2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于：在所述传染性胰脏坏死病疫苗中，Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积百分含量为10％
‑
20％；进一步地，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积比为9:1。3.根据权利要求1或2所述的疫苗，其特征在于：所述传染性胰脏坏死病毒灭活液为传染性胰脏坏死病毒经甲醛灭活后所得；进一步地，利用甲醛对所述传染性胰脏坏死病毒进行灭活时，甲醛的终浓度为0.25％
‑
2.5％体积百分含量。4.根据权利要求1
‑
3中任一所述的疫苗，其特征在于：所述传染性胰脏坏死病毒灭活液在灭活前的病毒滴度为107TCID
50
/0.1ml。5.一种制备传染性胰脏坏死病疫苗的方法，包括如下步骤：(A)制备传染性胰脏坏死病毒灭活液；(B)将所述传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂混合，制备得到传染性胰脏坏死病疫苗。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：在所述传染性胰脏坏死病疫苗中，Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积百分含量为10％
‑
20％；进一步地，在所述传染性胰脏坏死病疫苗中，所述传染性胰脏坏死病毒灭活液和Montanide
TM GEL 02PR佐剂的体积比为9:1。7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述传染性胰脏坏死病毒灭活液为传染性胰脏坏死病毒经甲醛灭活后所得；进一步地，利用甲醛对所述传染性胰脏坏死病毒进行灭活时，甲醛...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐黎明，任广明，卢彤岩，赵景壮，邵轶智，赵文闻，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，
类型：发明
国别省市：