冠状病毒疫苗制造技术

本公开涉及用于预防或治疗冠状病毒感染的RNA的领域。特别地，本公开涉及用于针对冠状病毒感染进行疫苗接种并诱导有效的冠状病毒抗原特异性免疫应答如抗体和/或T细胞应答的方法和药剂。具体地，在一实施方案中，本公开涉及这样的方法，其包括向受试者给药RNA，所述RNA编码包含SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】冠状病毒疫苗


[0001]本公开涉及用于预防或治疗冠状病毒感染的RNA的领域。特别地，本公开涉及用于针对冠状病毒感染进行疫苗接种并诱导有效的冠状病毒抗原特异性免疫应答如抗体和/或T细胞应答的方法和药剂。这些方法和药剂特别可用于预防或治疗冠状病毒感染。向受试者给药本文公开的RNA可以保护受试者免于冠状病毒感染。具体地，在一实施方案中，本公开涉及这样的方法，其包括向受试者给药编码包含SARS
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CoV
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2刺突蛋白(spike protein)(S蛋白)表位的肽或蛋白的RNA(即编码疫苗抗原的疫苗RNA)用于在受试者中诱导针对冠状病毒S蛋白(特别是SARS
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CoV
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2的S蛋白)的免疫应答。向受试者给药编码疫苗抗原的RNA可以(在通过适当的靶细胞表达RNA之后)提供疫苗抗原，用于在受试者中诱导针对疫苗抗原(和疾病相关抗原)的免疫应答。

技术介绍

[0002]SARS
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CoV
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2(严重急性呼吸综合征冠状病毒2；SARS
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CoV
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2)的基因序列已为WHO和公众所用(MN908947.3)，并且该病毒被分类为β冠状病毒亚科。通过序列分析，系统发生树显示与严重急性呼吸综合征(SARS)病毒分离株的关系比与另一种感染人的冠状病毒即中东呼吸综合征(MERS)病毒的关系更紧密。2月2日，在包括德国在内的24个国家中，全球确认了总计14,557例病例，并且随后自我维持的人与人之间的病毒传播导致SARS
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CoV
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2成为全球流行病。
[0003]冠状病毒是正义单链RNA((+)ssRNA)包膜病毒，其编码总共4种结构蛋白，刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核壳蛋白(N)。刺突蛋白(S蛋白)负责受体识别，附着至细胞，通过内体途径感染以及由病毒和内体膜融合驱动的基因组释放。虽然不同家族成员之间的序列不同，但是在S蛋白内有保守区域和基序，使得可以将S蛋白分为两个子结构域：S1和S2。S2，具有其跨膜结构域，负责膜融合，而S1结构域识别病毒特异性受体并结合至靶宿主细胞。在几种冠状病毒分离株内，鉴定了受体结合结构域(RBD)并定义了S蛋白的一般结构(图1)。
[0004]目前尚无针对SARS
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CoV
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2的疫苗方法和疗法，但是迫切需要。
[0005]由于S蛋白在宿主细胞识别和进入以及宿主免疫系统诱导病毒中和抗体中的重要性，我们决定靶向SARS
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CoV
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2的病毒S蛋白以及S蛋白的子结构域如S1或RBD用于疫苗开发。对于构象重要的区域内的突变可能有益于诱导更强的保护性免疫应答。因此，我们设想测试几种构建体(图2)。由于幼稚的S蛋白是三聚体，并且这种三聚体结构很有可能影响蛋白的稳定性和抗原性，因此我们基于稳定的构建体引入一种策略，引入T4噬菌体次要纤维蛋白(fibritin)结构域，其也用于HIV中用于生成稳定的gp140三聚体并对SARS RBD
‑
构建体起作用。

技术实现思路

[0006]本专利技术一般包括受试者的免疫治疗，包括给药RNA，即疫苗RNA，其编码氨基酸序
列，即疫苗抗原，包含SARS
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CoV
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2 S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2 S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段，即抗原肽或蛋白。因此，疫苗抗原包含SARS
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CoV
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2 S蛋白的表位，用于在受试者中诱导针对冠状病毒S蛋白，特别是SARS
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CoV
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2 S蛋白的免疫应答。给药编码疫苗抗原的RNA以(在通过适当的靶细胞表达多核苷酸之后)提供抗原，用于诱导，即刺激、引发和/或扩大免疫应答，例如，抗体和/或免疫效应细胞，其靶向靶抗原(冠状病毒S蛋白，特别是SARS
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CoV
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2 S蛋白)或其加工产物。在一实施方案中，根据本公开诱导的免疫应答是B细胞介导的免疫应答，即抗体介导的免疫应答。额外地或可选地，在一实施方案中，根据本公开诱导的免疫应答是T细胞介导的免疫应答。在一实施方案中，免疫应答是抗冠状病毒，特别是抗SARS
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CoV
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2免疫应答。
[0007]本文描述的疫苗包含作为有效成分的单链RNA，其可以在进入接受者细胞后翻译为相应的蛋白。除了编码抗原序列的野生型或密码子优化的序列，RNA还可以包含一个或多个结构元件，这些结构元件针对RNA在稳定性和翻译效率方面的最大效力进行优化(5
′
帽、5
′
UTR、3
′
UTR、poly(A)
‑
尾)。在一实施方案中，RNA包含所有这些元件。在一实施方案中，β
‑
S
‑
ARCA(D1)(m
27，2
′‑
O
GppSpG)或m
27，3
’‑
O
Gppp(m
12
’‑
O
)ApG可以用作RNA药物物质5
′‑
端的特定加帽结构。作为5
′‑
UTR序列，可以使用人α
‑
珠蛋白mRNA的5
′‑
UTR序列，任选地具有优化的“Kozak序列”以提高翻译效率。作为3
′‑
UTR序列，可以使用置于编码序列和poly(A)
‑
尾之间的源自“分裂的氨基末端增强子(amino terminal enhancer of split)”(AES)mRNA(称作F)和线粒体编码的12S核糖体RNA(称作I)的两个序列元件的组合(FI元件)以确保更高的最大蛋白水平和延长的mRNA持久性。这些通过对赋予RNA稳定性并增加总蛋白表达的序列的离体选择过程进行鉴定(参见WO 2017/060314，援引加入本文)。或者，3
′‑
UTR可以是人β
‑
珠蛋白mRNA的两个重复的3
′‑
UTR。此外，可以使用长度为110个核苷酸的poly(A)
‑
尾，其由一段30个腺苷残基，随后10个核苷酸接头序列(随机核苷酸)和另一70个腺苷残基组成。设计这个poly(A)
‑
尾序列以增强RNA稳定性和翻译效率。
[0008]此外，可以将分泌信号肽(sec)优选以sec翻译为N末端标签的方式融合至抗原编码区。在一实施方案中，sec对应于S蛋白的分泌信号肽。通常用于融合蛋白的编码主要由氨基酸甘氨酸(G)和丝氨酸(S)组成的短接头肽的序列可以用作GS/接头。
[0009]本文描述的疫苗RNA可以与蛋白和/或脂质(优选脂质)复合，以产生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物或药物制品，其包含编码氨基酸序列的RNA，所述氨基酸序列包含SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段。2.权利要求1的组合物或药物制品，其中SARS
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CoV
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2S蛋白的免疫原性片段包含SARS
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CoV
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2S蛋白的S1亚基或者SARS
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CoV
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2S蛋白的S1亚基的受体结合结构域(RBD)。3.权利要求1或2的组合物或药物制品，其中包含SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的氨基酸序列由编码序列编码，与野生型编码序列相比，所述编码序列是密码子优化的和/或其G/C含量增加，其中所述密码子优化和/或G/C含量增加优选不改变编码的氨基酸序列的序列。4.权利要求1
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3中任一项的组合物或药物制品，其中(i)编码SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的RNA包含SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸979
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1584的核苷酸序列，与SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸979
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1584的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列，或者SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸979
‑
1584的核苷酸序列的片段或与SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸979
‑
1584的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列的片段；和/或(ii)SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸327
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528的氨基酸序列，与SEQ ID NO:1的氨基酸327
‑
528的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:1的氨基酸327
‑
528的氨基酸序列的免疫原性片段或与SEQ ID NO:1的氨基酸327
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528的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列的免疫原性片段。5.权利要求1
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4中任一项的组合物或药物制品，其中(i)编码SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的RNA包含SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸49
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2055的核苷酸序列，与SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸49
‑
2055的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列，或者SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸49
‑
2055的核苷酸序列的片段或与SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸49
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2055的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列的片段；和/或(ii)SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段包含SEQ ID NO:1的氨基酸17
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685的氨基酸序列，与SEQ ID NO:1的氨基酸17
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685的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:1的氨基酸17
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685的氨基酸序列的免疫原性片段或与SEQ ID NO:1的氨基酸17
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685的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列的免疫原性片段。6.权利要求1
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5中任一项的组合物或药物制品，其中(i)编码SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的RNA包含SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸49
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3819的核苷酸序列，与SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸49
‑
3819的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、
85％或80％相同性的核苷酸序列，或者SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸49
‑
3819的核苷酸序列的片段或与SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸49
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3819的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列的片段；和/或(ii)SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段包含SEQ ID NO:1或7的氨基酸17
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1273的氨基酸序列，与SEQ ID NO:1或7的氨基酸17
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1273的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:1或7的氨基酸17
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1273的氨基酸序列的免疫原性片段或与SEQ ID NO:1或7的氨基酸17
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1273的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列的免疫原性片段。7.权利要求1
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6中任一项的组合物或药物制品，其中包含SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的氨基酸序列包含分泌信号肽。8.权利要求7的组合物或药物制品，其中所述分泌信号肽融合，优选通过N末端融合，至SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段。9.权利要求7或8的组合物或药物制品，其中(i)编码所述分泌信号肽的RNA包含SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸1
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48的核苷酸序列，与SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸1
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48的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列，或者SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸1
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48的核苷酸序列的片段或与SEQ ID NO:2、8或9的核苷酸1
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48的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列的片段；和/或(ii)所述分泌信号肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸1
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16的氨基酸序列，与SEQ ID NO:1的氨基酸1
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16的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:1的氨基酸1
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16的氨基酸序列的功能片段或与SEQ ID NO:1的氨基酸1
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16的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列的功能片段。10.权利要求1
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9中任一项的组合物或药物制品，其中(i)编码SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的RNA包含SEQ ID NO:6的核苷酸序列、与SEQ ID NO:6的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列，或者SEQ ID NO:6的核苷酸序列的片段或与SEQ ID NO:6的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列的片段；和/或(ii)SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列、与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:5的氨基酸序列的免疫原性片段或与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的氨基酸序列的免疫原性片段。11.权利要求1
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10中任一项的组合物或药物制品，其中所述RNA包含修饰的核苷，以代替尿苷。
12.权利要求11的组合物或药物制品，其中所述修饰的核苷选自假尿苷(ψ)、N1
‑
甲基
‑
假尿苷(m1ψ)和5
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甲基
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尿苷(m5U)。13.权利要求1
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12中任一项的组合物或药物制品，其中所述RNA包含5
’
帽。14.权利要求1
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13中任一项的组合物或药物制品，其中编码包含SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的氨基酸序列的RNA包含5
’
UTR，其包含SEQ ID NO:12的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:12的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列。15.权利要求1
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14中任一项的组合物或药物制品，其中编码包含SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的氨基酸序列的RNA包含3
’
UTR，其包含SEQ ID NO:13的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:13的核苷酸序列具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、85％或80％相同性的核苷酸序列。16.权利要求1
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15中任一项的组合物或药物制品，其中编码包含SARS
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CoV
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2S蛋白、其免疫原性变体或者所述SARS
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CoV
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2S蛋白或其免疫原性变体的免疫原性片段的氨基酸序列的RNA包含poly
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A序列。17.权利要求16的组合物或药物制品，其中所述poly
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A序列包含至少100个核苷酸。18.权利要求16或17的组合物或药物制品，其中所述poly
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A序列包含SEQ ID NO:14的核苷酸序列，或由SEQ ID NO:14的核苷酸序列组成。19.权利要求1
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18中任一项的组合物或药物制品，其中所述RNA配制为或待配制为液体、固体或其组合。20.权利要求1
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19中任一项的组合物或药物制品，其中所述RNA配制为或待配制为用于注射。21.权利要求1
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20中任一项的组合物或药物制品，其中所述RNA配制为或待配制为用于肌...

【专利技术属性】
技术研发人员：U，
申请(专利权)人：生物技术欧洲股份公司，
类型：发明
国别省市：