一种用于红球菌基因敲除的重组系统及其应用技术方案

本发明专利技术属于细胞工程技术领域，具体涉及一种用于红球菌基因敲除的重组系统及其应用。包括：Che9c60&61重组酶质粒、Flp重组酶和游离双链DNA敲除盒片段；游离双链DNA敲除盒片段包括：目的基因上下游同源臂序列及在其间插入包含抗性基因的两个同向FRT序列；Flp重组酶质粒的基因序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。该用于红球菌基因敲除的重组系统可以有效对红球菌进行无痕敲除，庆大霉素抗性丢失效率达到了100％和78.7％；而且本发明专利技术基于FRT位点特异性重组酶Flpw方法可有效实现红球菌Rhodococcus ruber R1的高效无痕敲除，为下一轮基因编辑(多基因敲除)回收抗性基因。轮基因编辑(多基因敲除)回收抗性基因。轮基因编辑(多基因敲除)回收抗性基因。

【技术实现步骤摘要】
一种用于红球菌基因敲除的重组系统及其应用


[0001]本专利技术属于细胞工程
，具体涉及一种用于红球菌基因敲除的重组系统及其应用。

技术介绍

[0002]红球菌属(Rhodococcus)是一种需氧的、非运动的、无芽孢的和细胞壁含有分枝酸的革兰氏阳性细菌，介于分枝杆菌属(Mycobacterium)、诺卡氏菌属(Nocardia)和棒状杆菌属(Corynebacterium)之间。红球菌广泛分布于从海洋到陆地的不同环境中，能适应恶劣环境，具有多种有机物的降解代谢活性，如单芳烃、多芳烃、酚类、卤代烃、硝基芳香烃、腈和其它芳香族化合物。虽然人们开始认识到红球菌在生物降解、转化和合成等领域的应用潜力，但是红球菌基础研究的数量却远不及大肠杆菌和芽孢杆菌等较为成熟的工程菌。人们对红球菌的了解并未深入。而红球菌的基因敲除工具对于人们开展红球菌的基础研究非常重要。
[0003]目前，红球菌可用的基因敲除工具非常少，而且现有的传统同源重组技术在红球菌的基因敲除中表现出重组效率低的特点。现有研究发现通过分枝杆菌噬菌体重组酶Che9c60&a本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于红球菌基因敲除的重组系统，其特征在于，包括：Che9c60&61重组酶质粒、Flp重组酶和游离双链DNA敲除盒片段；游离双链DNA敲除盒片段包括：目的基因上下游同源臂序列及在其间插入包含抗性基因的两个同向FRT序列；Flp重组酶质粒的基因序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示。2.根据权利要求1所述的用于红球菌基因敲除的重组系统，其特征在于，抗性基因包括庆大霉素抗性基因。3.一种基因工程红球菌的构建方法，其特征在于，包括：使用权利要求1或2所述用于红球菌基因敲除的重组系统对红球菌进行基因敲除得基因工程红球菌。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，红球菌为Rhodococcus ruber R1。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，红球菌基因为ΔamiE2。6.根据权利要求3所述的构建方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：马金成，温宇明，游晓琳，王海洪，张文彬，胡喆，黄云超，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：