生产微菌素J25的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株、构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及生产微菌素J25的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株、构建方法及应用，属于微生物技术、药物和基因工程领域，本发明专利技术通过对mcjABCD基因序列和表达原件的优化，使得MccJ25可以在枯草芽孢杆菌中成功表达，并将mcjABCD基因同时整合至枯草芽孢杆菌基因组两个位点中，得到一株可以高效生产MccJ25的枯草芽孢杆菌W25AS2工程菌株，该菌可以在无抗性、无诱导、双位点共表达且无芽孢生成的条件下，对MccJ25具有较高的表达水平，并且表达产物对于肠炎沙门氏菌具有良好的杀菌活性，为MccJ25的生产应用开发了新的应用模式。的生产应用开发了新的应用模式。的生产应用开发了新的应用模式。

【技术实现步骤摘要】
生产微菌素J25的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株、构建方法及应用


[0001]本专利技术属于微生物技术、药物和基因工程领域，具体涉及一种生产微菌素J25的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株、构建方法及应用。

技术介绍

[0002]枯草芽孢杆菌作为食品级益生菌，可以直接作为饲料添加剂进入动物体内，在畜牧业生产领域发挥极大地作用，此外，其在医疗、食品以及外源蛋白生产方面也被广泛应用。Amye基因是枯草芽孢杆菌常用的高效稳定的整合位点，并且具有非常好的外源蛋白表达能力，SigF基因是RNA聚合酶sigma
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F因子，是枯草芽孢杆菌芽孢形成的关键因子，阻断SigF基因的表达，使得枯草芽孢杆菌在高密度发酵过程中不会形成孢子，芽孢污染程度小。
[0003]MccJ25是一种在大肠杆菌中发现的细菌素I类抗菌小肽，其对部分大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌具有较强的杀伤作用。MccJ25具有21个氨基酸组成的套索结构，是由N端的第9
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21个氨基酸形成的β发夹结构贯穿第1
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8个氨基酸形成的环状结构所形成。Mcc本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生产微菌素J25的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株，其特征在于：通过双交叉同源重组法，将mcjABCD基因分别插入枯草芽孢杆菌原始菌株的Amye和SigF位点，对MccJ25进行双位点的组成型表达构建所得。2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌原始菌株为枯草芽孢杆菌WB800N菌株。3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株，其特征在于：所述Amye位点为枯草芽孢杆菌WB800N菌株α
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淀粉酶基因，SigF位点为枯草芽孢杆菌WB800N菌株RNA聚合酶σ
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因子基因。4.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株，其特征在于：所述mcjABCD基因序列，是将mcjA和mcjBCD的基因序列调整为相同方向，设计由P
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启动子启动mcjA基因的表达，由P
veg
启动子启动mcjBCD基因的表达，并且通过终止子对mcjA基因进行终止转录。5.根据权利要求1
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4任意一种所述的枯草芽孢杆菌重组整合工程菌株的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、通过基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖明，张广文，冯赛祥，代绘琳，谢倩梅，江金飞，许斯祺，林敏，秦苗苗，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：