一种表面展示PET解聚酶的重组黏细菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种表面展示PET解聚酶的重组黏细菌及其构建方法与应用，以黄色黏球菌M.xanthus DK1622作为底盘细胞，将信号肽、PET解聚酶、锚定肽的基因序列的重组表达质粒导入所述底盘细胞后得到；所述PET解聚酶为密码子优化后的PET解聚酶DuraPETase，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码所述信号肽SP的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；编码所述锚定肽的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。本发明专利技术提供的重组黄色黏球菌M.xanthus DK1622可实现聚对苯二甲酸乙二醇酯水解酶（DuraPETase）的表达，并实现对聚酯型模式底物Impranil DLN的水解，有望实现塑料污染的原位修复。有望实现塑料污染的原位修复。有望实现塑料污染的原位修复。

【技术实现步骤摘要】
一种表面展示PET解聚酶的重组黏细菌及其构建方法与应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体一种表面展示PET解聚酶的重组黏细菌及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]当今社会，塑料的广泛应用给我们的日常生活带来了便利，但也造成了大量的塑料垃圾排放到环境中，造成严重的环境污染问题，尤其是微塑料的环境问题，已成为一个全球关注的问题。
[0003]与废塑料处置的物理和化学回收技术相比，生物降解与转化技术逐渐成为解决塑料污染的一个重要途径。生物降解与转化技术是在温和条件下使用微生物/酶选择性将废塑料降解成不同的聚合物单体，以及对混合塑料降解物进行高值化的生物炼制过程。随着近些年在塑料生物降解领域，特别是PET塑料的酶法降解领域取得的突破性进展，让人们对塑料生物降解有了全新的认识。从2005年Muller等鉴定并定义了首个PET塑料水解酶TfH开始，角质酶HiC、Tfcut2、LCC和PETase等PET塑料高效水解酶陆续被鉴定、表征和分析。通过酶分子设计与改造也获得了诸如LCC
ICCG
、DuraPETase本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表面展示PET解聚酶的重组黏细菌，其特征在于，以黄色黏球菌M. xanthus DK1622作为底盘细胞，将信号肽、PET解聚酶、锚定肽的基因序列的重组表达质粒导入所述底盘细胞后得到；所述PET解聚酶为密码子优化后的PET解聚酶DuraPETase，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；编码所述信号肽SP的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；编码所述锚定肽的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。2. 根据权利要求1所述的重组黏细菌，其特征在于，所述重组表达质粒中表达PET解聚酶的启动子为组成型启动子PilA，其核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。3.根据权利要求2所述的重组黏细菌，其特征在于，以含PilA启动子的pSWU19质粒作为基础表达质粒构建得到所述重组表达质粒。4.权利要求1~3任一项所述重组黏细菌的构建方法，其特征在于，包括：（1）以野生型黄色黏球菌M. xanthus DK1622的全基因组为模板，PCR扩增得到外膜蛋白TraA片段；（2）以步骤（1）获得的外膜蛋白TraA片段为模板，PCR扩增得到信号肽、锚定肽片段。（3）以PET解聚酶的基因序列为模板，PCR扩增得到DuraPETase...

【专利技术属性】
技术研发人员：周杰，吴楠，姜岷，董维亮，吴婷，徐安明，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：