一种氧化型无内毒素大肠杆菌基因工程菌株及其构建与应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，尤其涉及一种氧化型无内毒素大肠杆菌基因工程菌株及其构建与应用。所述大肠杆菌基因工程菌株，是对ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌菌株进行改造获得的重组菌，所述改造为失活所述ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌菌株中trxB和gorA基因。本发明专利技术改变了细胞质的还原环境，使含多个二硫键蛋白可以在该菌株中高效正确折叠。本发明专利技术在ClearColi BL21(DE3)

【技术实现步骤摘要】
一种氧化型无内毒素大肠杆菌基因工程菌株及其构建与应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种氧化型无内毒素大肠杆菌基因工程菌株及其构建与应用。

技术介绍

[0002]大肠杆菌生产的重组蛋白在糖尿病、癌症和关节炎等多种疾病的治疗中被广泛应用。然而，在大肠杆菌的生长过程中会产生大量的内毒素(lipopolysaccharide，LPS)，这些内毒素会激活人体细胞的免疫反应而导致感染性休克。因此，大肠杆菌生产的蛋白类药物必须经过极为严格的纯化步骤以降低LPS的含量，这种额外的纯化步骤和质量控制显著增加了蛋白类药物的生产成本。ClearcoliColi BL21(DE3)是一种具有改良内毒素的大肠杆菌，它不会触发人体免疫细胞发生内毒素反应。Clearcoli BL21(DE3)是由BL21(DE3)衍生而来，它在BL21(DE3)菌株的基础上进一步敲除了和LPS合成相关的7个基因：gutQ、kdsD、lpxL、lpxM、pagP、lpxP和eptA，从而将LPS的6个酰基链改造成4个，同时导致低聚糖链被删除。这两个酰基链的缺失使LPS变本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌基因工程菌株，其特征在于，是对ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌菌株进行改造获得的重组菌，所述改造为失活所述ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌菌株中trxB和gorA基因。2.根据权利要求1所述的大肠杆菌基因工程菌株，其特征在于，还失活ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌菌株中lpp基因；优选的，所述trxB的核苷酸序列为如下任一种：1)如SEQ ID NO.1所示；2)与SEQ ID NO.1限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；3)与1)或2)中的DNA序列具有90％以上同源性且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；和/或，所述gorA的核苷酸序列为如下任一种：1)如SEQ ID NO.2所示；2)与SEQ ID NO.2限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；3)与1)或2)中的DNA序列具有90％以上同源性且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；和/或，所述lpp的核苷酸序列为如下任一种：1)如SEQ ID NO.3所示；2)与SEQ ID NO.3限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；3)与1)或2)中的DNA序列具有90％以上同源性且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子。3.根据权利要求1或2所述大肠杆菌基因工程菌株，其特征在于，失活所述ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌菌株中trxB、gorA或lpp为使该基因不能表达产物或者表达产物没有功能。4.根据权利要求1
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3任一项所述大肠杆菌基因工程菌株，其特征在于，所述失活为敲除相关基因。5.权利要求1
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4任一项所述大肠杆菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于，通过回补trxB蛋白，敲除ClearColi BL21(DE3)大肠杆菌菌株基因组中的gorA基因。6.根据权利要求5所述大肠杆菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于，先获得大肠杆菌ClearColi BL21(DE3)
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trxB菌株，再获得trxB和gorA基因双敲除菌株；其中，在敲除大肠杆菌ClearColi BL21(DE3)
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trxB菌株中的gorA基因时，通过质粒回补trxB蛋白，筛选得到ahpC基因发生突变的trxB和gorA基因双敲除菌株。7.根据权利要求5或6所述大肠杆菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)首先将大肠杆菌ClearColi BL21(DE3)基因组中的trxB基因克隆至质粒pBAD24上，将其命名为pBA...

【专利技术属性】
技术研发人员：董娜，付灵龙，孙梦宁，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：