稳定NK细胞与抗体的结合的方法及其应用技术

本文以在NK细胞上稳定结合抗体为课题。本文提供一种稳定NK细胞与抗体的结合的方法，所述方法使用具有能够与NK细胞的表面蛋白结合的区域I、能够与抗体结合的区域II的物质。物质包含区域I和区域II，还可以包含连接接头部分。还可以包含连接接头部分。还可以包含连接接头部分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】稳定NK细胞与抗体的结合的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及稳定NK细胞与抗体的结合的方法。本专利技术在使用NK细胞的癌症的免疫疗法、为此的再生医疗等产品的制造等领域中是有用的。

技术介绍

[0002]抗体药物被设计成通过特异性地结合于在细胞表面表达特定抗原的肿瘤细胞，发挥抗体依赖性细胞毒性(ADCC)活性而显示抗肿瘤效果。但是，已知只要表达成为对象的抗原，也会与正常细胞结合，同样地发挥毒性活性(非肿瘤靶向毒性效应)。也就是说，抗体药物本身无法判断细胞是不是肿瘤。而且，该现象如果是在白细胞存在下，即使在补体不存在下也能得到确认，因此示出免疫细胞如果与抗体结合，则通过ADCC活性也可以杀伤正常细胞。例如，已知通过施用以B细胞表达的CD20作为靶向的利妥昔单抗(Rituxan)，作为副作用，正常B细胞被杀伤。目前为止，尚不知回避该非肿瘤靶向毒性效应的方法，成为了作为最新的免疫细胞治疗的CAR
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T细胞所面临的最大课题之一。经多方面确认，杀伤与抗体结合的正常细胞主要是巨噬细胞系的细胞(非专利文献1)。
[0003]另一方面，自然杀伤细胞(NK细胞)是作为自然免疫的主要因子发挥作用的细胞毒性淋巴细胞，在肿瘤细胞或病毒感染细胞的排斥中重要。向患者施用在体外扩增并活化的NK细胞的基于NK细胞的癌症免疫疗法作为副作用较少的治疗方法受到关注。本专利技术人等开发了具有高细胞毒性活性的NK样细胞的新细胞，并且得到了使抗体药物在体外与这样的细胞结合后向患者施用的独特想法(专利文献1)。
[0004]另一方面，提出了可与NK细胞的表面蛋白结合的多特异性结合蛋白。例如，专利文献2中提出了一种嵌合融合分子，其用于使NK细胞引导至抗原细胞，具有肿瘤抗原结合结构域和免疫细胞结合结构域，抗原结合结构域包含该抗原结合结构域的分离抗体或片段，分离抗体包含免疫球蛋白可变区及恒定区，免疫细胞结合是对NK细胞受体特异性的配体。另外，专利文献3中提出了将NKp46结合免疫球蛋白区和包含该可变区的蛋白质，例如抗体和多特异性蛋白质用于特异性地重定向NK细胞以溶解目标靶细胞的方案。进一步地，在专利文献4中，提出了使NKG2D受体和与CD16结合的多特异性结合蛋白结合于NK细胞而活化NK细胞的方案，多特异性结合蛋白可以包含与人IgG1抗体的氨基酸234～332至少90％同一性的氨基酸序列。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：日本特开2018
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193303号公报
[0008]专利文献2：日本特表2009
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500346号公报
[0009]专利文献3：国际公开2017/114694(日本特表2019
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503713号公报)
[0010]专利文献4：日本特表2020
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506971号公报
[0011]非专利文献
[0012]非专利文献1：Uchida J，et al.J Exp Med.2004，Sugata K，et al，Sci Rep.2016

技术实现思路

[0013]专利技术要解决的课题
[0014]巨噬细胞系的细胞无法区分肿瘤细胞和正常细胞，而NK细胞可以鉴别肿瘤细胞和正常细胞。因此，如果能够产生NK细胞为抗体药物的ADCC活性的唯一效应器的状况，则理论上可以完全消除非肿瘤靶向毒性(on
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target off
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tumor)效应。
[0015]为了产生NK细胞为ADCC活性的唯一效应器的状况，排除全身巨噬细胞系细胞是不现实的，鉴于此，期望避免通过点滴等全身性地施用抗体药物自身，将抗体药物结合到NK细胞的状态下施用。
[0016]然而，根据本专利技术人等的研究，可知即使将目标抗体药物结合到NK细胞，在特定成分的共存或其他抗体竞争的状态下，目标抗体药物也会从NK细胞脱离。因此，需要能够将抗体稳定地固定在NK细胞上的技术。
[0017]用于解决课题的手段
[0018]这次，本专利技术人等制备了由能够与NK细胞的表面蛋白结合的区域I和能够与抗体结合的区域II、以及连接区域I和区域II的接头部分组成的融合蛋白，发现通过其能够稳定地维持NK细胞与抗体的结合，从而完成了本专利技术。
[0019]本专利技术提供以下内容。
[0020][1]一种稳定NK细胞与抗体的结合的方法，其使用具有以下区域的物质：
[0021]能够与NK细胞的表面蛋白结合的区域I；及
[0022]能够与抗体结合的区域II。
[0023][2]根据1所述的方法，其中，NK细胞的表面蛋白为选自由NKp46、NKp30、NKG2D、IL
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15R、IL
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2R、KIR3DS1、NKG2C、NKp80、NKp65、NKp44、LALRA1、LILRA2、DNAM
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1及2B4组成的组中的任一种。
[0024][3]根据1或2所述的方法，其中，区域I和区域II的至少一者为单链Fv片段(scFv)。
[0025][4]根据1～3中任一项所述的方法，其中，抗体为用于处理癌症或传染病的抗体药物。
[0026][5]一种NK细胞群体的制备方法，其包括以下工序：
[0027](1)准备NK细胞群体、抗体、及具有能够与NK细胞的表面蛋白结合的区域I和能够与抗体结合的区域II的物质；
[0028](2)在蛋白质存在下，向NK细胞群体中加入抗体，得到与抗体结合的NK细胞群体；此时，NK细胞与物质的区域I结合，并且抗体与物质的区域II结合，物质稳定NK细胞与抗体的结合。
[0029][6]根据5所述的制备方法，其中，抗体为用于处理癌症或传染病的抗体药物。
[0030][7]一种药物组合物，其包含与抗体药物结合的NK细胞群体，通过具有以下区域的物质，抗体药物与NK细胞的结合稳定：
[0031]能够与NK细胞的表面蛋白结合的区域I；及
[0032]能够与抗体结合的区域II。
[0033]专利技术效果
[0034]根据本专利技术，由于抗体药物专门利用于NK细胞，因此可以期待抑制由巨噬细胞系免疫细胞引起的杀伤与抗体药物结合的正常细胞这样的副作用。
[0035]现有的提高抗体的结合活性的方法，是利用抗体的Fc区域的糖链结构的改变(低岩藻糖抗体)或氨基酸序列的改变等，但本专利技术是通过与这些完全不同的方法来使抗体稳定结合在NK细胞上的。根据本专利技术将抗体锚定到NK细胞上时，作为锚定的NK细胞的表面蛋白，可以选择具有对NK细胞的活化和生存优选的信号的分子。
[0036]附图简单说明
[0037][图1]联合使用抗体药物时NK细胞对Allo
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WBC的杀伤。
[0038][图2]在培养基中NK细胞对抗体药物的保留。
[0039][图3]培养基添加物对NK细胞与抗体药物的结合的影响。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种稳定NK细胞与抗体的结合的方法，其使用具有以下区域的物质：能够与NK细胞的表面蛋白结合的区域I；及能够与抗体结合的区域II。2.根据权利要求1所述的方法，其中，NK细胞的表面蛋白为选自由NKp46、NKp30、NKG2D、IL
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15R、IL
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2R、KIR3DS1、NKG2C、NKp80、NKp65、NKp44、LALRA1、LILRA2、DNAM
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1及2B4组成的组中的任一种。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，区域I和区域II的至少一者为单链Fv片段(scFv)。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，抗体为用...

【专利技术属性】
技术研发人员：原田结，米满吉和，
申请(专利权)人：盖亚生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：