用于修饰靶核酸的组合物和方法技术

本公开内容提供了用CAR或外源性蛋白(例如外源性细胞内或细胞表面蛋白(例如外源性TCR))修饰细胞(例如T细胞)中的内源性细胞表面蛋白(例如内源性TCR)的组合物和方法。面蛋白(例如内源性TCR)的组合物和方法。面蛋白(例如内源性TCR)的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于修饰靶核酸的组合物和方法
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年3月13日提交的美国临时申请第62/989,505号的优先权，所述美国临时申请的公开内容在此出于所有目的通过引用以其整体并入。本公开内容的
技术介绍

[0002]成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关(Cas)蛋白的应用通过使基因组编辑成为可能而彻底改变了分子生物学。CRISPR介导的基因编辑是一种强大而实用的工具，具有创建新的科学工具，改正临床上相关的突变和工程化新的基于细胞的免疫疗法的潜力。本公开内容的简要概述
[0003]在一个方面，本公开内容的特征在于包含向导RNA(gRNA)的组合物，其中所述gRNA包含以下的序列：CTGGATATCTGTGGGACAAG(SEQ ID NO:3)、ATCTGTGGGACAAGAGGATC(SEQ ID NO:4)、TCTGTGGGACAAGAGGATCA(SEQ ID NO:5)、GGGACAAGAGGATCAGGGTT(SEQ ID NO:6)、TCTTTGCCCCAACCCAGGCT(SEQ ID NO:7)、CTTTGCCCCAACCCAGGCTG(SEQ ID NO:8)、TGGAGTCCAGATGCCAGTGA(SEQ ID NO:9)、actaccgtttactcgatata(SEQ ID NO:17)、tcgagtaaacggtagtgctg(SEQ ID NO:18)、tagtgctggggcttagacgc(SEQ ID NO:19)、ATGGGAGGTTTATGGTATGT(SEQ ID NO:20)、CTGGGCATTAGCAGAATGGG(SEQ ID NO:21)、CTAATGCCCAGCCTAAGTTG(SEQ ID NO:22)、GTACATCTTGGAATCTGGAG(SEQ ID NO:23)、AACTCTGGCAGAGTAAAGGC(SEQ ID NO:24)、CTGCCAGAGTTATATTGCTG(SEQ ID NO:25)、GTGAACGTTCACTGAAATCA(SEQ ID NO:26)、AGCTATCAATCTTGGCCAAG(SEQ ID NO:27)或CAGGCACAAGCTATCAATCT(SEQ ID NO:28)。
[0004]在另一个方面，本公开内容提供了包含向导RNA(gRNA)的组合物，其中所述gRNA包含以下的序列：TTTGGCCTACGGCGACGGGA(SEQ ID NO:29)、CGATAAGCGTCAGAGCGCCG(SEQ ID NO:30)、GCATGACTagaccatccatg(SEQ ID NO:31)、GTGATTGCTGTAAACTAGCC(SEQ ID NO:32)、TAGTTTACAGCAATCACCTG(SEQ ID NO:33)、ggacccgataaaatacaaca(SEQ ID NO:34)、catagcaattgctctatacg(SEQ ID NO:35)、TTCCTAAGTGGATCAACCCA(SEQ ID NO:36)、GGAATGCTATGAGTGCTGAG(SEQ ID NO:37)、GAAGCTGCCACAAAAGCTAG(SEQ ID NO:38)、ACTGAACGAACATCTCAAGA(SEQ ID NO:39)或ATTGTTTAGAGCTACCCAGC(SEQ ID NO:40)。
[0005]在另一个方面，本公开提供了包含向导RNA(gRNA)的组合物，其中所述gRNA包含以下的序列：aaggtctagttctatcaccc(SEQ ID NO:41)、tatgtataatcctagcactg(SEQ ID NO:42)、gtacgtgtacgacagtgtgt(SEQ ID NO:43)、AGCacttgggctaagaacca(SEQ ID NO:44)、tcagtcctcaacttaatacg(SEQ ID NO:45)、agaccatcctgctagcatgg(SEQ ID NO:46)、tctcgacttcgtgatcagcc(SEQ ID NO:47)、acctgtattcccaacgacac(SEQ ID NO:48)、tgtattcccaacgacacagg(SEQ ID NO:49)、GGGTTTCTCTGATTAGAACG(SEQ ID NO:50)、CATCCCTCACCTGATCAAGA(SEQ ID NO:51)或TAAGTCACATAAGCACCCAG(SEQ ID NO:52)。
[0006]在上述方面的一些实施方案中，所述组合物还包含同源定向修复模板(HDRT)。在一些实施方案中，至少一个Cas蛋白靶序列与HDRT融合。
[0007]在另一个方面，本公开内容提供了包含向导RNA(gRNA)和与至少一个Cas蛋白靶序列融合的HDRT的组合物，其中所述gRNA包含TCAGGGTTCTGGATATCTGT(SEQ ID NO:2)的序列，并且所述Cas蛋白靶序列与互补多核苷酸序列形成双链的双链体。
[0008]在一些实施方案中，两个Cas蛋白靶序列与HDRT融合。在某些实施方案中，第一Cas蛋白靶序列与HDRT的5
’
末端融合，以及第二Cas蛋白靶序列与HDRT的3
’
末端融合。在某些实施方案中，Cas蛋白靶序列与互补多核苷酸序列杂交以形成双链的双链体。
[0009]在某些实施方案中，HDRT是单链HDRT。
[0010]在一些实施方案中，所述组合物还包含CAS蛋白(例如，Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csn1和Csx12)、Cas10、Csy1、Csy2、Csy3、Cse1、Cse2、Csc1、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmr1、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csb1、Csb2、Csb3、Csx17、Csx14、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csx1、Csx15、Csf1、Csf2、Csf3、Csf4、Cpf1或它们的变体)。
[0011]在一些实施方案中，Cas蛋白是Cas9核酸酶。
[0012]在一些实施方案中，HDRT包含SEQ ID NO:10或11的序列。
[0013]在某些实施方案中，所述组合物包含阴离子聚合物。在某些实施方案中，所述阴离子聚合物包含聚谷氨酸(PGA)、聚天冬氨酸或聚羧基谷氨酸。
[0014]在另一个方面，本公开内容提供了用CAR或外源性蛋白修饰细胞(例如T细胞)中的内源性细胞表面蛋白的方法，其包括将本文所述的组合物引入细胞(例如T细胞)中，其中所述CAR或外源性蛋白整合到内源性细胞表面蛋白基因组的基因座中。
[0015]在该方面的一些实施方案中，内源性细胞表面蛋白是内源性TCR。在某些实施方案中，外源性蛋白是外源性细胞内蛋白或细胞表面蛋白。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.包含向导RNA(gRNA)的组合物，其中所述gRNA包含以下的序列：CTGGATATCTGTGGGACAAG(SEQ ID NO:3)、ATCTGTGGGACAAGAGGATC(SEQ ID NO:4)、TCTGTGGGACAAGAGGATCA(SEQ ID NO:5)、GGGACAAGAGGATCAGGGTT(SEQ ID NO:6)、TCTTTGCCCCAACCCAGGCT(SEQ ID NO:7)、CTTTGCCCCAACCCAGGCTG(SEQ ID NO:8)、TGGAGTCCAGATGCCAGTGA(SEQ ID NO:9)、actaccgtttactcgatata(SEQ ID NO:17)、tcgagtaaacggtagtgctg(SEQ ID NO:18)、tagtgctggggcttagacgc(SEQ ID NO:19)、ATGGGAGGTTTATGGTATGT(SEQ ID NO:20)、CTGGGCATTAGCAGAATGGG(SEQ ID NO:21)、CTAATGCCCAGCCTAAGTTG(SEQ ID NO:22)、GTACATCTTGGAATCTGGAG(SEQ ID NO:23)、AACTCTGGCAGAGTAAAGGC(SEQ ID NO:24)、CTGCCAGAGTTATATTGCTG(SEQ ID NO:25)、GTGAACGTTCACTGAAATCA(SEQ ID NO:26)、AGCTATCAATCTTGGCCAAG(SEQ ID NO:27)或CAGGCACAAGCTATCAATCT(SEQ ID NO:28)。2.包含向导RNA(gRNA)的组合物，其中所述gRNA包含以下的序列：TTTGGCCTACGGCGACGGGA(SEQ ID NO:29)、CGATAAGCGTCAGAGCGCCG(SEQ ID NO:30)、GCATGACTagaccatccatg(SEQ ID NO:31)、GTGATTGCTGTAAACTAGCC(SEQ ID NO:32)、TAGTTTACAGCAATCACCTG(SEQ ID NO:33)、ggacccgataaaatacaaca(SEQ ID NO:34)、catagcaattgctctatacg(SEQ ID NO:35)、TTCCTAAGTGGATCAACCCA(SEQ ID NO:36)、GGAATGCTATGAGTGCTGAG(SEQ ID NO:37)、GAAGCTGCCACAAAAGCTAG(SEQ ID NO:38)、ACTGAACGAACATCTCAAGA(SEQ ID NO:39)或ATTGTTTAGAGCTACCCAGC(SEQ ID NO:40).。3.包含向导RNA(gRNA)的组合物，其中所述gRNA包含以下的序列：aaggtctagttctatcaccc(SEQ ID NO:41)、tatgtataatcctagcactg(SEQ ID NO:42)、gtacgtgtacgacagtgtgt(SEQ ID NO:43)、AGCacttgggctaagaacca(SEQ ID NO:44)、tcagtcctcaacttaatacg(SEQ ID NO:45)、agaccatcctgctagcatgg(SEQ ID NO:46)、tctcgacttcgtgatcagcc(SEQ ID NO:47)、acctgtattcccaacgacac(SEQ ID NO:48)、tgtattcccaacgacacagg(SEQ ID NO:49)、GGGTTTCTCTGATTAGAACG(SEQ ID NO:50)、CATCCCTCACCTGATCAAGA(SEQ ID NO:51)或TAAGTCACATAAGCACCCAG(SEQ ID NO:52)。4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其还包含同源定向修复模板(HDRT)。5.如权利要求4所述的组合物，其中至少一个Cas蛋白靶序列与所述HDRT融合。6.组合物，其包含向导RNA(gRNA)和与至少一个Cas蛋白靶序列融合的HDRT，其中所述gRNA包含TCAGGGTTCTGGATATCTGT(SEQ ID NO:2)的序列，并且所述Cas蛋白靶序列与互补多核苷酸序列形成双链的双链体。7.如权利要求4至6中任一项所述的组合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：维瓦斯万，
申请(专利权)人：J，
类型：发明
国别省市：