DC-CIK细胞治疗组合物的制备方法技术

本发明专利技术公开了DC

【技术实现步骤摘要】
DC
‑
CIK细胞治疗组合物的制备方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，具体为DC
‑
CIK细胞治疗组合物的制备方法。

技术介绍

[0002]DC
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CIK细胞,即树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞共培养联合治疗肿瘤,是疗效较好的过继性免疫细胞治疗方法,为预防肿瘤复发、消除患者体内残留的肿瘤细胞、改善晚期肿瘤患者的生存质量提供了新的治疗途径,目前临床应用愈来愈广泛。
[0003]目前在DC
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CIK细胞组合物的制备过程中，在对DC
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CIK细胞分离过程中，细胞经过分离采用基础营养液进行培养，基础营养液无法对DC
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CIK细胞进行刺激，从而导致细胞的增殖和发育速度会因为基础的营养液只能够进行营养的提供而出现增殖、发育速度固定情况，从而导致细胞的增殖速度慢、细胞活性低和发育速度稳定而导致培养时间要固定在10
‑
15天的情况。
[0004]为此提出DC
‑
CIK细胞治疗组合物的制备方法，来解决此问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供DC
‑
CIK细胞治疗组合物的制备方法，解决了目前DC
‑
CIK细胞组成物制备过程中，采用基础营养培养不能够有效刺激细胞增殖、发育，而导致制备时间固定的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：DC
‑
CIK细胞治疗组合物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：获取细胞：通过脐带血单核细胞，获取得到DC和CIK细胞，将得到的DC和CIK细胞分别进行离心，离心后，使用生理盐水分别对DC和CIK细胞进行清洗；步骤2：DC细胞培养：将清洗后的DC细胞移至培养皿，并加入基础营养液、CM
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SCF、胰岛素、IL
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6、IL
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10、IL
‑
15，DC细胞培养时长为3天，培养皿中培养液每隔1天进行一次更换，3天后DC细胞达到半成熟期，停止营养液的供给；步骤3：CIK细胞培养：在DC细胞培养的同时同步将CIK细胞移至培养皿进行分开培养，CIK细胞培养时间为3天，采用CM
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SCF、IL
‑
6、IL
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10、IL
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11、基础营养进行培养，营养液每隔1天进行一次更换，培养时间达到3天后CIK细胞达到半成熟期，停止营养液供给；步骤4：组合培养：将半成熟期的DC和CIK细胞转移至同一培养皿中，添加PAD14蛋白、GM
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CSF、IL
‑
6、IL
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10、IL
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11、IL
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15和基础培养液进行组合培养直至DC和CIK细胞达到成熟期。
[0007]优选的，所述在步骤1中，DC和CIK细胞采用离心机进行离心，离心机的离心转速为离心力为1200r/min。
[0008]优选的，所述在步骤1中，DC和CIK细胞通过离心机进行离心的离心时间为8min。
[0009]优选的，所述在步骤1中，DC和CIK细胞在清洗过程中需要通过细胞筛进行筛选，DC和CIK细胞需要反复进行三次清洗，避免离心后产生残留。
[0010]优选的，所述在步骤2中，CM
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SCF、IL
‑
6、IL
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10和IL
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15为刺激因子，基础营养液的成分有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸。
[0011]优选的，所述在步骤2中，DC细胞的培养时间并不局限固定3天，培养过程中每天观察DC细胞的成长情况，DC细胞3天之内达到半成熟期要提前进行中断培养。
[0012]优选的，所述在步骤3中，CM
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SCF、IL
‑
6、IL
‑
10、IL
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11为刺激因子，基础营养液的成分有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸。
[0013]优选的，所述在步骤3中，CIK细胞的培养时间并不局限固定3天，培养过程中每天观察CIK细胞的成长情况，CIK细胞3天之内达到半成熟期要提前进行中断培养。
[0014]优选的，所述在步骤4中，PAD14蛋白和刺激因子中的GM
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CSF又能够组成细胞的活性因子。
[0015]优选的，所述在步骤4中，DC和CIK细胞成熟时间为5
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7天。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术专利通过采用PAD14蛋白作为催化剂对DC
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CIK细胞进行催化，可以有效加快细胞的成熟速度，并且通过刺激因子辅助催化剂对DC
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CIK细胞进行组合培养，能够有效刺激细胞，使细胞活性得到增强，从而通过高强度的活跃细胞的活性加快细胞的增殖和发育速度，进而起到缩短细胞成熟培养时间增强细胞增殖强度和细胞本身活性的目的。
具体实施方式
[0017]下面将通过实施例的方式对本专利技术作更详细的描述，这些实施例仅是举例说明性的而没有任何对本专利技术范围的限制。
[0018]本专利技术提供一种技术方案：DC
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CIK细胞治疗组合物的制备方法，包括以下步骤：步骤1：获取细胞：通过脐带血单核细胞，获取得到DC和CIK细胞，将得到的DC和CIK细胞分别进行离心，离心后，使用生理盐水分别对DC和CIK细胞进行清洗；步骤2：DC细胞培养：将清洗后的DC细胞移至培养皿，并加入基础营养液、CM
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SCF、胰岛素、IL
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6、IL
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10、IL
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15，DC细胞培养时长为3天，培养皿中培养液每隔1天进行一次更换，3天后DC细胞达到半成熟期，停止营养液的供给；步骤3：CIK细胞培养：在DC细胞培养的同时同步将CIK细胞移至培养皿进行分开培养，CIK细胞培养时间为3天，采用CM
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SCF、IL
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6、IL
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10、IL
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11、基础营养进行培养，营养液每隔1天进行一次更换，培养时间达到3天后CIK细胞达到半成熟期，停止营养液供给；步骤4：组合培养：将半成熟期的DC和CIK细胞转移至同一培养皿中，添加PAD14蛋白、GM
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CSF、IL
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6、IL
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10、IL
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11、IL
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15和基础培养液进行组合培养直至DC和CIK细胞达到成熟期。
[0019]实施例一：首先获取细胞，通过脐带血单核细胞，获取得到DC和CIK细胞，将得到的DC和CIK细胞分别进行离心，离心后，使用生理盐水分别对DC和CIK细胞进行清洗，然后进行DC细胞培养：将清洗后的DC细胞移至培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.DC
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CIK细胞治疗组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：获取细胞：通过脐带血单核细胞，获取得到DC和CIK细胞，将得到的DC和CIK细胞分别进行离心，离心后，使用生理盐水分别对DC和CIK细胞进行清洗；步骤2：DC细胞培养：将清洗后的DC细胞移至培养皿，并加入基础营养液、CM
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SCF、胰岛素、IL
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6、IL
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10、IL
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15，DC细胞培养时长为3天，培养皿中培养液每隔1天进行一次更换，3天后DC细胞达到半成熟期，停止营养液的供给；步骤3：CIK细胞培养：在DC细胞培养的同时同步将CIK细胞移至培养皿进行分开培养，CIK细胞培养时间为3天，采用CM
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SCF、IL
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6、IL
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10、IL
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11、基础营养进行培养，营养液每隔1天进行一次更换，培养时间达到3天后CIK细胞达到半成熟期，停止营养液供给；步骤4：组合培养：将半成熟期的DC和CIK细胞转移至同一培养皿中，添加PAD14蛋白、GM
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CSF、IL
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6、IL
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10、IL
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11、IL
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15和基础培养液进行组合培养直至DC和CIK细胞达到成熟期。2.根据权利要求1所述的DC
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CIK细胞治疗组合物的制备方法，其特征在于：所述在步骤1中，DC和CIK细胞采用离心机进行离心，离心机的离心转速为离心力为1200r/min。3.根据权利要求1所述的DC
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CIK细胞治疗组合物的制备方法，其特征在于：所述在步骤1中，DC和CIK细胞通过离心机进行离心的离心时间为8min。4.根据权利要求1所述的DC
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CIK细...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶源溪，张建立，霍凯兵，龙虹百，邢真，
申请(专利权)人：深圳市俊元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：