表达趋化因子受体和细胞粘附分子的CD3阴性细胞群体及其用途和制备方法技术

本发明专利技术涉及细胞毒活性更高的免疫细胞以及可期待高效用于NK细胞疗法的药物组合物。本发明专利技术提供包含CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性细胞的细胞群体。本发明专利技术提供CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞进一步高表达CD11c的细胞群体。本发明专利技术提供对实体肿瘤浸润的CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞。本发明专利技术还提供包含这样的细胞群体及药学上允许的添加物的药物组合物。本发明专利技术进一步提供上述细胞群体的制备方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达趋化因子受体和细胞粘附分子的CD3阴性细胞群体及其用途和制备方法
本专利技术涉及表达趋化因子受体和细胞粘附分子的CD3阴性细胞群体及其用途。相关申请的交叉引用本申请要求2018年3月27日申请的日本特愿2018-59624的优先权，将其全部记载特别作为公开而援引于此。
技术介绍
自然杀伤细胞(NK细胞)为作为自然免疫的主要因子工作的细胞毒性的淋巴细胞，承担针对肿瘤细胞、病毒感染的初期保护机制。将从患者自身采集的NK细胞，通过体外的培养使其增殖几百倍～数千倍并使其活化，输回患者的NK细胞疗法，作为副作用比较少的治疗方法而受到关注。通常，从正常的成人的外周血的1次单采血液成分术(apheresis)中可以回收约1×1010个单核的细胞(mononuclearcell)，如果将外周血单核的细胞中的NK细胞的构成比率取约7％，则可得到7×108个NK细胞。另一方面，如果设患者的体重为60kg，则需要6×106个～4.8×109个NK细胞。为此，对将从供体得到的NK细胞进行培养扩增，而得到杀灭靶细胞而言足够的NK细胞的技术的开发正在推进。例如，专利文献1提出了NK细胞的扩增方法，其特征在于包括制备包含NK细胞的细胞群体的步骤，从包含NK细胞的细胞群体除去T细胞的步骤，和将进行了除去而剩余的细胞在包含2500IU/mL～2813IU/mL的IL-2的培养基中培养的步骤。另外，对离体培养的NK细胞而言，存在虽然在体外对肿瘤细胞株显示细胞毒性但在临床上治疗效果不够充分的情况。因此，提出了提高NK细胞的活性的培养技术。例如，专利文献2中提出了NK细胞的离体培养方法，所述NK细胞具有选自CD62L的表达升高，迁移应答升高，寻靶及在体内的保持升高，更大的增殖，增大的细胞毒活性中的至少一个，所述方法包括将包含NK细胞的细胞群体与至少一个生长因子以及有效的浓度，有效的暴露时间及有效的继续暴露时间的尼克酰胺和/或其它尼克酰胺成分一起培养。作为免疫细胞疗法用的免疫细胞，除了NK细胞以外，也研究了进行基因的改造而使其表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR-T)。在该技术中，通过将对作为靶标的肿瘤的抗原不具有特异性的T细胞进行基因的改造，可以从外周血大量制作对作为靶标的肿瘤具有的抗原获得了特异性的效应子T细胞。但是，CAR-T细胞疗法存在对实体肿瘤不很有治疗效果的情况，作为其原因之一，可举出CAR-T细胞没有到达实体肿瘤(非专利文献1)。关于CAR-T细胞向肿瘤的寻靶，报告称有可能为在基因改造时趋化因子受体发生缺失，向肿瘤细胞的趋化性降低(非专利文献2)。另一方面，报告称对于转导CCR2b而使其表达功能性趋化因子受体的CAR-T细胞而言，向肿瘤的转移增加，抗肿瘤活性升高(非专利文献3)。在非专利文献4中，调查了最为人所知的源自人外周血的CD56阳性的NK细胞中的趋化因子受体表达。在该研究中报告了CD56低NK细胞主要为CXCR1/CXCR2+及CXCR3/CCR5-/+，大部分的CD56高NK细胞为CXCR1/CXCR2-及CXCR3/CCR5+。另外，也报道了CD56低及CD56高NK细胞这两者为CCR4-及CCR6-(非专利文献4)。专利文献1：日本特开2013-27385号公报(日本专利第5572863号)专利文献2：日本特表2013-515497号公报非专利文献1：MeleroI.等，CancerDiscovery2014；4：522-526.非专利文献2：JenaB.等，Blood，2018；116：1035-1044.非专利文献3：MoonE.等，ClinCancerRes，2011；17(14)：4719-4730.非专利文献4：LimaM.等，JournalofImmunologyResearch，Volume2015，ArticleID839684，18页将专利文献1～2及非专利文献1～4的全部记载特别作为公开而援引于此。
技术实现思路
专利技术所要解决的问题对CAR-T细胞而言，具备通过基因操作而获得除了抗原特异性以外的趋化性等期望的功能的可能，但作为基因治疗用产品使用，为了确保品质及安全性而制订了严格的准则，存在开发成本和时间的问题。另外，对NK细胞而言，即使已确认了在体外对肿瘤细胞株显示细胞毒活性，也存在在体内的抗肿瘤活性并不足够的问题。认为其原因在于，NK细胞相对于肿瘤的趋化性弱，并且对实体肿瘤不浸润。至今，提出了提高NK细胞的培养效率的技术、提高NK细胞的活性的培养技术，而采用这些技术制备的NK细胞对于临床使用而言仍然并不足够。存在使用培养技术提供具有更高的抗肿瘤活性的免疫细胞的课题。解决问题的手段根据本专利技术可提供以下专利技术。[1]细胞群体，其包含CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞。[2]根据[1]所述的细胞群体，其中，上述CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞进一步为CD11a高表达及CD11c高表达，所述高表达通过与外周血得到的没有进行实质培养的NK细胞群体中的表达的比较而判断。[3]根据[1]或[2]所述的细胞群体，其中，上述CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞进一步为整联蛋白α1阳性、整联蛋白α3阳性及整联蛋白β3阴性。[4]根据[1]～[3]中任一项所述的细胞群体，其中，在上述细胞群体中CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞的比例为30％以上。[5]根据[1]～[4]中任一项所述的细胞群体，其中，选自由CD3及CD19组成的组中的任一种为阳性的细胞的比率低于5％。[6]根据[1]～[5]中任一项所述的细胞群体，其中，在上述细胞群体中选自由CD4，CD8，CD14，CD19及CD36组成的组中的任一种为阳性的细胞被除去。[7]根据[1]～[6]中任一项所述的细胞群体，其用于对实体肿瘤浸润。[8]细胞，其为对实体肿瘤浸润的CCR5阳性、CCR6阳性、CXCR3阳性、整联蛋白α1阳性、整联蛋白α3阳性及整联蛋白β3阴性且CD3阴性的细胞。[9]药物组合物，其包含[1]～[7]中任一项所述的细胞群体，及药学上允许的添加物。[10][1]～[7]定义的细胞群体的制备方法，包括制备初代单核的细胞群体的步骤；从初代单核的细胞群体中除去CD3阳性细胞的步骤；从初代单核的细胞群体中除去选自由单核细胞(monocyte)及B细胞组成的组中的任一种的步骤；和将除去CD3阳性细胞以及选自由单核细胞及B细胞组成的组中的任一种后剩余的细胞群体在包含IL-2的培养基中培养的步骤。附图说明[图1A]本专利技术的14天培养细胞(经培养后)中的趋化因子受体的表达。对照为没有进行培养的初代NK细胞。[图1B]使用了同种型对照(Isotypecontrol)抗体的阴性对照。[图1C]本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细胞群体，其包含CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180327 JP 2018-0596241.细胞群体，其包含CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞。


2.根据权利要求1所述的细胞群体，其中，所述CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞进一步为CD11a高表达及CD11c高表达，所述高表达通过与外周血得到的没有进行实质培养的NK细胞群体中的表达的比较而判断。


3.根据权利要求1或2所述的细胞群体，其中，所述CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞进一步为整联蛋白α1阳性、整联蛋白α3阳性及整联蛋白β3阴性。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的细胞群体，其中，在所述细胞群体中，CCR5阳性、CCR6阳性及CXCR3阳性且CD3阴性的细胞的比例为30％以上。


5.根据权利要求1～4中任一项所述的细胞群体，其中，选自由CD3及CD19组成的组中的任一种为阳性的细胞的比率低于5％...

【专利技术属性】
技术研发人员：米满吉和，原田结，
申请(专利权)人：盖亚生物制药有限公司，米满吉和，
类型：发明
国别省市：日本;JP