一种纤维蛋白和/或纤维蛋白原降解产物的检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种纤维蛋白和/或纤维蛋白原降解产物的检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒在R2试剂的胶乳包被过程中，使用包含BSA偶联的工艺以及使用吐温20洗脱，相比现有技术，显著提高了试剂的分析灵敏度、精密度，稳定性更高。稳定性更高。

【技术实现步骤摘要】
一种纤维蛋白和/或纤维蛋白原降解产物的检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医学检验
，尤其涉及一种纤维蛋白和/或纤维蛋白原降解产物的检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]纤维蛋白溶解系统，简称纤溶系统，是人体最重要的抗凝系统，对保持血管壁的正常通透性，维持血液的流动状态和组织修复起着重要作用，由4种主要部分组成：纤溶酶原、纤溶酶原激活剂(如t
‑
PA、u
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PA)、纤溶酶、纤溶酶抑制物。纤维蛋白(原)降解产物是纤溶系统被激活后，在纤溶酶的作用下，人体内的纤维蛋白原和纤维蛋白被降解，所产生的各种二聚体、多聚体及复合物的统称，能够反映机体纤溶活性的总水平。血液中的FDP浓度上升可证明有纤溶亢进，在恶性肿瘤、产科疾病、血管病变、弥散性血管内综合症(DIC)等各种疾病时显示高值。尤其在凝固及纤溶亢进显著时会引发DIC。因此，FDP检测是DIC诊断及观察治疗过程中的重要指标之一。
[0003]近几年来，FDP含量的检测在临床诊断、筛查上应用广泛，其含量升高可证明有纤溶亢进，如恶性肿瘤、弥散性血管内凝血、深静脉血栓形成、肺栓塞、严重细菌感染、慢性肝病、器官移植的排斥反应、妊娠高血压综合症等疾病所致的继发性及原发性纤溶亢进，FDP含量均出现升高。在溶栓药物的治疗过程中，大量纤溶酶的生成，加速血栓的溶解，血液中FDP升高，对血清或血浆FDP浓度的检测，可以监控溶栓药物的治疗效果。另由于血管内凝血，纤溶异常，大量FDP经肾脏排出或由于肾炎导致纤维蛋白在肾小管沉积同时继发激活纤维蛋白降解系统生成FDP从尿中排出，因此尿液中出现FDP也意味着体内或肾脏有血管内凝血和纤溶现象。动态地观察尿FDP的变化，对肾移植后排斥反应的诊断有重要意义。因此，检测样本中血清、血浆、尿液中FDP的含量对纤溶系统疾病的早期、快速、准确诊断及对溶栓药物治疗的疗程监测和疗效考核具有重要的应用价值。
[0004]胶乳免疫比浊法具有操作简便、快速、检测灵敏度高、特异、定量准确等优点，在临床应用上得到广泛认可。但现有市场上采用该法测定纤维蛋白(原)降解产物(FDP)含量的试剂盒常低值检测时分析灵敏度欠佳，且稳定性通常表现较差。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种纤维蛋白和/或纤维蛋白原降解产物的检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒具有较高的分析灵敏度、精密度，且稳定性好。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]一种纤维蛋白和/或纤维蛋白原降解产物的检测试剂盒，由试剂R1和试剂R2组成；
[0008]所述试剂R1包括缓冲液、增敏剂、无机盐、表面活性剂、蛋白保护剂和防腐剂；
[0009]所述试剂R2包括缓冲液、抗人FDP抗体胶乳悬浊液、稳定剂和蛋白保护剂和防腐剂；
[0010]所述抗人FDP抗体胶乳悬浊液由以下方法制得：
[0011]取聚苯乙烯羧基胶乳溶液，加入NHS/EDC活化；然后加入蛋白交联剂，20
‑
25℃搅拌0.5
‑
2小时，离心，超声分散；
[0012]向超声分散后的溶液中缓慢加入抗人FDP单克隆抗体，20
‑
25℃搅拌3小时，加入封闭剂封闭，洗脱；
[0013]所述洗脱采用的表面活性剂为吐温系列；
[0014]其中，蛋白交联剂为BSA、精氨酸、甘氨酸中的至少一种。
[0015]本专利技术中，所述试剂R1包括：pH6.5～8.5的缓冲液0.02～0.15mol/L，增敏剂1～20g/L，无机盐1～50g/L，表面活性剂0.1～5g/L，蛋白保护剂BSA 0.1～5g/L，防腐剂1.0～2.0ml/L；
[0016]所述试剂R2包括：pH7.0～9.0的缓冲液0.02
‑
0.15mol/L，稳定剂0.1％～10％，抗人FDP抗体胶乳悬浊液0.1％
‑
1％，蛋白保护剂BSA 0.05％～1％，防腐剂1.0～2.0ml/L。
[0017]本专利技术中，所述试剂R1中，缓冲液为MES、MOPS、PB、HEPES中的至少一种。一些实施方案中，缓冲液优选为MOPS；所述缓冲液的pH优选为7.0
‑
7.5。
[0018]本专利技术中，所述试剂R1中，增敏剂为PEG6000、PEG8000、PEG10000中的一种或几种，一些实施例中具体为PEG6000。
[0019]本专利技术中，所述试剂R1中，无机盐为NaCl、KCl、CaCl2、MgCl2中的一种或几种，一些实施例中具体为NaCl。
[0020]本专利技术中，所述试剂R1中，表面活性剂为吐温系列、Triton X系列、胆酸钠、脱氧胆酸钠、异十三醇聚乙二醇醚等中的一种或几种；一些实施方案中具体为吐温系列，具体地，所述表面活性剂包括但不仅限于吐温80。
[0021]本专利技术中，所述试剂R2中，缓冲液为MOPS、MOPSO、HEPES、TAPS、甘氨酸中的一种或几种；一些实施例中具体为pH7.9、20mM MOPS缓冲液。
[0022]本专利技术中，所述试剂R2中，稳定剂为蔗糖、海藻糖、甘油、甘露醇等中的一种或几种；在一些实施例中具体为蔗糖。
[0023]本专利技术中，所述试剂R1和试剂R2中，蛋白保护剂独立地选自BSA、鸡卵清蛋白、酪蛋白、鱼皮明胶中的一种或几种，所述蛋白保护剂包括以上种类但不仅限于此。
[0024]本专利技术中，所述试剂R2中，抗人FDP抗体胶乳悬浊液中，所述抗体为鼠源单克隆抗体、兔源单抗隆抗体、羊源单抗隆抗体中的一种；在一些实施例中具体为鼠源单克隆抗体。
[0025]本专利技术中，所述试剂R1和试剂R2中，防腐剂独立地选自叠氮化钠、ProClin系列、卡松、BND、硫柳汞等中的一种或几种；在一些实施例中具体为Proclin300。
[0026]本专利技术还提供了检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：
[0027]步骤1：向缓冲液中加入增敏剂、无机盐、表面活性剂、蛋白保护剂和防腐剂，混匀，调节pH至6.5
‑
8.5，获得试剂R1。
[0028]步骤2：在pH值为4.0
‑
6.0的缓冲液中，将聚苯乙烯羧基胶乳溶液与NHS/EDC溶液混合，活化0.5
‑
1.0小时；
[0029]步骤3：将步骤2所得溶液中加入缓冲溶液调节pH至7.0
‑
8.0，加入蛋白交联剂，在20
‑
25℃搅拌0.5
‑
2小时；离心加入pH值为4.0
‑
6.0的缓冲液，超声分散；
[0030]步骤4：将步骤3所得溶液离心，去除上清液加入pH值为4.0
‑
6.0的缓冲液，并超声
分散均匀；加入适量NHS/EDC的溶液中进行活化0.5
‑
1.0小时；
[0031]步骤5：将步骤4所得溶液用缓冲溶液调节本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纤维蛋白和/或纤维蛋白原降解产物的检测试剂盒，其特征在于，由试剂R1和试剂R2组成；所述试剂R1包括缓冲液、增敏剂、无机盐、表面活性剂、蛋白保护剂和防腐剂；所述试剂R2包括缓冲液、抗人FDP抗体胶乳悬浊液、稳定剂和蛋白保护剂和防腐剂；所述抗人FDP抗体胶乳悬浊液由以下方法制得：取聚苯乙烯羧基胶乳溶液，加入NHS/EDC活化；然后加入蛋白交联剂，20
‑
25℃搅拌0.5
‑
2小时，离心，超声分散；向超声分散后的溶液中缓慢加入抗人FDP单克隆抗体，20
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25℃搅拌3小时，加入BSA封闭，洗脱；所述洗脱采用的表面活性剂为吐温系列；所述蛋白交联剂为BSA、精氨酸、甘氨酸中的至少一种。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括：pH6.5～8.5的缓冲液0.02～0.15mol/L，增敏剂1～20g/L，无机盐1～50g/L，表面活性剂0.1～5g/L，蛋白保护剂BSA 0.1～5g/L，防腐剂1.0～2.0ml/L；所述试剂R2包括：pH7.0～9.0的缓冲液0.02
‑
0.15mol/L，稳定剂0.1％～10％，抗人FDP抗体胶乳悬浊液0.1％
‑
1％，蛋白保护剂BSA 0.05％～1％，防腐剂1.0～2.0ml/L。3.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，缓冲液为MES、MOPS、PB、HEPES中的至少一种。4.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，增敏剂为PEG6000、PEG8000、PEG10000中的一种或几种。5.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，无机盐为NaCl、KCl、CaCl2、MgCl2中的一种或几种。6.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，表面活性剂为吐温系列、TritonX系列、胆酸钠、脱氧胆酸钠、异十三醇聚乙二醇醚中的一种或几种。7.根据权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中，蛋白保护剂为BSA、鸡卵清蛋白、酪蛋白、鱼皮明胶中的一种或几种。8.根据权利要求1或2所述的检...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊东东，
申请(专利权)人：北京安图生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：