血栓弹力图凝血激活检测试剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种血栓弹力图凝血激活检测试剂及其制备方法，该试剂包括以下组分：缓冲液、盐离子化合物、高岭土、磷脂、组织因子酯化物、抗氧化剂、水解明胶、冻干保护剂以及防腐剂，所述水解明胶的质量浓度为0.1％

【技术实现步骤摘要】
血栓弹力图凝血激活检测试剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及凝血检测领域，特别涉及一种血栓弹力图凝血激活检测试剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]TEG是一种全血粘弹性检测技术，粘弹性检测的本质是对阻力或摩擦力的记录，通过在模拟人体体内环境中全血标本的血液粘弹性变化来反映血液凝固的动态变化，用物理学原理监测从凝血因子激活到形成血小板
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纤维蛋白、血小板聚集、形成稳定的血凝块再到纤维蛋白溶解的过程，以此来反映血凝块形成的速率、强度及稳定性(纤溶水平)，这是对凝血与纤溶的全过程进行功能性评估。TEG可以实时连续反映除血管因素外所有血液成分参与的整个的凝血过程，以此判断患者出血及血栓的风险。TEG能更敏感更全面评估凝血的异常状态，预测患者出血与死亡的风险，有利于临床医生清晰明确的制定输血策略、指导合理用药及抗血栓等临床治疗，可有效控制患者的死亡率。
[0003]快速TEG检测项目所使用的检测试剂为凝血激活检测试剂，包含高岭土、组织因子，同时激活内源性和外源性凝血途径，与普通TEG检测项目相比，检测时间更短，可在10min左右对患者凝血功能全貌进行评估。快速TEG适用于急诊创伤后凝血功能异常的诊断和实时检测。快速TEG的主要检测参数包括：TEG ACT、R、K、Angle、MA等。激活全血凝固时间(ACT)能够快速预测输血的需求，其延长提示凝血因子缺乏或血液稀释；凝血反应时间(R)指检测开始到描记幅度达到2mm的时间，用于评估凝血启动过程中凝血因子的综合作用；血液凝血时间(K)和凝固角(Angle)反映血凝块形成的速度，主要与纤维蛋白原水平和功能相关；最大振幅(MA)为血凝块的最大强度时的振幅，主要反映由凝血酶激活的血小板和纤维蛋白原在止血中的作用。
[0004]市场上现有的血栓弹力图仪以半自动为主，存在自动化能力弱，检测通道较少，人工操作误差等不足，因此全自动设备的需求和应用也越来也多。市面上现有血栓弹力图仪配套凝血激活检测试剂，不管是半自动还是全自动，均需要对凝血激活检测试剂进行复溶，然后吸取检测试剂到测试杯中，才能进行下一步操作，操作过程繁琐。如CN108982865A描述冻干试剂在半自动血栓弹力图中的检测过程：从2
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8℃环境中取出试剂，室温平衡一段时间后加20ul水复溶，再吸取10ul复溶试剂加入测试杯，之后再加入氯化钙溶液和检测样本。CN108761104A公开了一种液体凝血激活剂的操作流程：将冷藏试剂常温放置，恢复至室温。装载测试杯，移取氯化钙溶液和凝血激活剂，再加入检测样本。CN207516385公开了一种快速血栓弹力图仪检测试剂盒：将试剂盒分为血样试剂瓶和助剂试剂瓶。抽取1mL血样，依次与装有组织因子的助剂试剂瓶、装有磷脂的助剂试剂瓶和装有高岭土的助剂试剂瓶内试剂混合，转移入血样试剂瓶存放，然后配合血栓弹力图进行上机检测。目前，市售主要产品如乐普医疗及Haemonetics等凝血激活检测试剂盒均为西林瓶装样冻干粉，为保证检测试剂的密封性，冻干结束后进行真空压塞，并加盖铝塑盖，若密封不当，可能会试剂盒失活。同时测试前需加入纯化水复溶，上下颠倒混匀后再转移至测试杯中用于检测。此过程中复溶不
充分，转移操作过程产生的误差均影响检测结果准确性。大多数全自动设备配套凝血激活检测试剂盒与半自动设备一致，仍采用西林瓶装样试剂，操作步骤复杂。深圳沃德生命科技有限公司研制出一种单人份试剂卡，但为了保证试剂密封性，需要对试剂卡进行铝封操作，同时还需要对检测试剂进行复溶、转移。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种血栓弹力图凝血激活检测试剂及其制备方法。本专利技术在多元冻干保护剂基础上增加了现有技术中未使用过的水解明胶，不但保证了试剂的稳定性，同时冻干后的试剂具有优越的抗潮能力，使得试剂冻干在试剂杯后无需进行压膜密封等特殊封装，试剂取出即可用，无需开盖、加水复溶、转移试剂等操作。本专利技术的试剂直接在测试杯中冻干，并且不需要进行压膜密封处理，免去了检测前复溶和转移过程，减化检测过程中的操作流程，降低因过多操作流程带来的检测误差，使检测更方便，同时也更加适用于全自动血栓弹力图仪。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种血栓弹力图凝血激活检测试剂，包括以下组分：缓冲液、盐离子化合物、高岭土、磷脂、组织因子酯化物、抗氧化剂、水解明胶、冻干保护剂以及防腐剂，所述水解明胶的质量浓度为0.1％
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10％。
[0007]其中，水解明胶能够显著提高凝血激活检测试剂的稳定性，能有效避免凝血激活试剂在长期保存及运输过程中出现受潮而失活的问题。
[0008]优选的是，所述缓冲液为4
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羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)、三羟甲基氨基甲烷(tris)和磷酸盐缓冲液(PBS)中的任意一种，所述缓冲液的pH为7.0
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7.5，浓度为50
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200mM。
[0009]优选的是，所述盐离子化合物为氯化钠或氯化钙或氯化钾，且盐离子化合物的浓度为50
‑
200mM。
[0010]优选的是，所述高岭土的质量浓度为0.1％
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10％。
[0011]优选的是，所述磷脂为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、兔脑磷脂、磷脂酰肌醇中的任意一种或多种，且磷脂的浓度为1
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100mg/L。
[0012]其中，磷脂是凝血激活检测试剂的主要成分，参与内源性凝血途径。磷脂富含不饱和脂肪酸，易被氧化和水解。
[0013]优选的是，所述组织因子酯化物的浓度为0.001
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0.1mg/mL。
[0014]优选的是，所述抗氧化剂为丁基羟基茴香醚(BHA)、甜菜碱、抗坏血酸、茶多酚中的任意一种或多种，且抗氧化剂的质量浓度为0.1％
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10％。
[0015]其中，加入抗氧化剂保证磷脂的稳定性。
[0016]优选的是，所述冻干保护剂包括BSA、甘氨酸、海藻糖、甘露醇中的任意一种或多种，且冻干保护剂的质量浓度为0.1％
‑
10％。
[0017]其中，中BSA、甘氨酸能够提高对凝血因子的保护作用。
[0018]优选的是，所述防腐剂为Proclin 300，防腐剂的质量浓度为0.01％
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1％。
[0019]优选的是，该血栓弹力图凝血激活检测试剂的制备方法包括以下步骤：
[0020]S1、配制缓冲液体系：向缓冲液中加入盐离子、水解明胶、保护剂、防腐剂，调节pH为7.0
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7.5；
[0021]S2、配制磷脂混合液：向S1得到的缓冲液体系中加入抗氧化剂，抗氧化剂充分溶解
后，加入磷脂，研磨使磷脂溶解；
[0022]S3、配制高岭土母液：将高岭土加入S1制备的缓冲液中，超声处理5
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20min，搅拌均匀；
[0023]S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血栓弹力图凝血激活检测试剂，其特征在于，包括以下组分：缓冲液、盐离子化合物、高岭土、磷脂、组织因子酯化物、抗氧化剂、水解明胶、冻干保护剂以及防腐剂，所述水解明胶的质量浓度为0.1％
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10％。2.根据权利要求1所述的血栓弹力图凝血激活检测试剂，其特征在于，所述缓冲液为4
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羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷和磷酸盐缓冲液中的任意一种，所述缓冲液的pH为7.0
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7.5，浓度为50
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200mM。3.根据权利要求1所述的血栓弹力图凝血激活检测试剂，其特征在于，所述盐离子化合物为氯化钠或氯化钙或氯化钾，且盐离子化合物的浓度为50
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200mM。4.根据权利要求1所述的血栓弹力图凝血激活检测试剂，其特征在于，所述高岭土的质量浓度为0.1％
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10％。5.根据权利要求1所述的血栓弹力图凝血激活检测试剂，其特征在于，所述磷脂为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、兔脑磷脂、磷脂酰肌醇中的任意一种或多种，且磷脂的浓度为1
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100mg/L。6.根据权利要求1所述的血栓弹力图凝血激活检测试剂，其特征在于，所述组织因子酯化物的浓度为0.001
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0.1mg/mL。7.根据权利要求1所述的血栓弹力图凝血激活检测试剂，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄梦璐，梁伟国，赵颖，孙海旋，王弼陡，李富阳，杨语谌，陈明，
申请(专利权)人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所，
类型：发明
国别省市：