一种非特异性凝集抑制因子去除试剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种非特异性凝集抑制因子去除试剂及其制备方法。该方法包括以下步骤：(1)将高岭土和蒙脱石粉分别加入至酸液中，混合均匀后静置，并去除上清；(2)再向步骤(1)所得产物中加入与步骤(1)所用量相同的酸液，混合均匀后静置，并去除上清；(3)向步骤(2)所得产物中加入缓冲液，然后高压灭菌；(4)待灭菌产物冷却至2～8℃后，加入胰蛋白酶溶液即可。本发明专利技术以高岭土、蒙脱石粉、猪源胰蛋白酶三种成分复配，制备了非特异性凝集因子因子去除试剂，可有效去除血清中非特异性凝集抑制因子。用该非特异性凝集抑制因子去除试剂处理血清后，处理后的血清的血凝抑制抗体效价与受体阻断酶处理的血清血凝抑制抗体效价相当。断酶处理的血清血凝抑制抗体效价相当。

【技术实现步骤摘要】
一种非特异性凝集抑制因子去除试剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于诊断用深恶制品
，具体涉及一种非特异性凝集抑制因子去除试剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]血凝抑制试验(HI)是判断多种病毒(如猪流感病毒、新城疫病毒、猪细小病毒)感染情况及检测抗体水平最常用的血清学方法。多种动物(猪、豚鼠、鸡、家兔)血清中存在非特异性凝集因子和非特异性凝集抑制因子，这两类因子如果不去除，会造成HI结果偏差，出现假阴性(抗体效价偏低)或假阳性(抗体效价偏高)。在HI试验前，需要对某些动物血清进行处理。
[0003]常用的非特异性凝集抑制因子去除试剂为25％高岭土。但按照常规方法使用的高岭土，不能有效去除血凝抑制试验中非特异性凝集抑制因子或去除血凝抑制试验中非特异性凝集抑制因子所导致的不稳定，造成HI抗体效价偏高或HI效价不稳定。
[0004]由于对非特异性凝集抑制因子了解不断深入，发现受体阻断酶能有效去除血清的的非特异性凝集抑制因子。但由于受体阻断酶成本较高，需要开发一种价格便宜的非特异性凝集抑制因子去除试剂。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种非特异性凝集抑制因子去除试剂及其制备方法，能在保证HI抗体效价不受影响的同时，保证结果的稳定性。
[0006]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0007]一种非特异性凝集抑制因子去除试剂的制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)将高岭土和蒙脱石粉分别加入至酸液中，混合均匀后静置，并去除上清；所述高岭土在酸液中的终浓度为0.01～0.1g/mL，蒙脱石粉在酸液中的终浓度为0.01～0.1g/mL；
[0009](2)再向步骤(1)所得产物中加入与步骤(1)所用量相同的酸液，混合均匀后静置，并去除上清；重复上述过程2～3次；
[0010](3)向步骤(2)所得产物中加入缓冲液，并调节其pH值为7～9，然后于100～130℃高压灭菌30～50min；
[0011](4)待灭菌产物冷却至2～8℃后，加入胰蛋白酶溶液，于2～8℃搅拌30～60min即可。
[0012]本专利技术的技术原理如下：
[0013]蒙脱石粉具有较强的离子交换能力、吸附性、吸水后其体积膨胀可成胶体状；高岭土具有较弱的离子交换能力、具有较好的吸附性、在水中具有悬浮性和分散性。并从猪的胰脏中提取了一种胰蛋白酶
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丝氨酸蛋白水解酶，它能将受体多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断，从而阻断受体在血凝抑制中发挥作用。
[0014]本专利技术利用蒙脱石粉与高岭土离子交换能力的互补性、双重吸附性能、蒙脱石粉的成胶性和高岭土的悬浮性，胰蛋白酶可切断受体中的赖氨酸和精氨酸的羧基的特性，配合制成了该非特异性凝集抑制因子去除试剂。
[0015]进一步地，酸液为稀盐酸，其浓度为1～3mol/L。
[0016]进一步地，酸液中高岭土的终浓度为0.03g/mL，蒙脱石粉的终浓度为0.02g/mL。
[0017]进一步地，缓冲液为PBS缓冲液，其包括以下终浓度的组分：
[0018]0.001～0.01g/mL NaCl、0.001～0.005g/mL Na2HPO4、0.0001～0.001g/mL KCl以及0.001～0.005g/mL KH2PO4。
[0019]进一步地，采用浓度为2～5mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7.2。
[0020]进一步地，灭菌温度为121℃。
[0021]进一步地，胰蛋白酶溶液的体积浓度为1～5％，其加入量为灭菌产物体积的0.5～1％。
[0022]进一步地，胰蛋白酶溶液的体积浓度为1％。
[0023]进一步地，胰蛋白酶溶液中使用的是猪源胰蛋白酶。
[0024]进一步地，胰蛋白酶为丝氨酸蛋白水解酶。
[0025]一种非特异性凝集抑制因子去除试剂，其采用上述方法制备得到。
[0026]本专利技术的有益效果：
[0027]本专利技术以复合型吸附剂高岭土、蒙脱石粉、猪源胰蛋白酶三种成分复配，制备了非特异性凝集因子因子去除试剂，可有效去除血清中非特异性凝集抑制因子。用该非特异性凝集抑制因子去除试剂处理血清后，处理后的血清的血凝抑制抗体效价与受体阻断酶处理的血清血凝抑制抗体效价相当。
具体实施方式
[0028]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0029]实施例1
[0030]一种非特异性凝集抑制因子去除试剂，其制备方法如下：
[0031](1)向800mL去离子水中溶解8g NaCl、1.44g Na2HPO4、0.2g KCl、0.2gKH2PO4，充分溶解后，加去离子水定容至1000mL，配制成PBS缓冲液；
[0032](2)取36％浓盐酸43mL加入到457mL的双蒸水中，配制成1mol/L稀盐酸溶液；
[0033](3)称取NaOH 40g，加入到200mL的双蒸水中，配制成5mol/L的氢氧化钠溶液；
[0034](4)称取猪源胰蛋白酶1g，加入到100mL 0.01mol/L的PBS中。
[0035](5)以500mL的1mol/L稀盐酸溶液一份，每份稀盐酸溶液中加入高岭土15g，蒙脱石粉10g，混合均匀静置，沉降后，小心移除上清；另加入500mL的1mol/L稀盐酸溶液，混合均匀静置，沉降后，小心移除上清，重复2次；
[0036](6)向沉淀中加入500mL PBS缓冲液，混匀后静置，沉降后，移除上清，重复3次。
[0037](7)第3次移除PBS缓冲液后，用5mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7.2。
[0038](8)加入适量的PBS缓冲液，定容至100mL，然后121℃，30min高压除菌冷却到5℃。
[0039](9)加入1％的胰蛋白酶1mL，在4℃。磁力搅拌器搅拌30min，得到血凝抑制试验非特异性凝集抑制因子去除试剂。
[0040]实施例2
[0041]一种非特异性凝集抑制因子去除试剂，其制备方法如下：
[0042](1)向800mL去离子水中溶解8g NaCl、1.44g Na2HPO4、0.2g KCl、0.2gKH2PO4，充分溶解后，加去离子水定容至1000mL，配制成PBS缓冲液；
[0043](2)取36％浓盐酸43mL加入到457mL的双蒸水中，配制成1mol/L稀盐酸溶液；
[0044](3)称取NaOH 40g，加入到200mL的双蒸水中，配制成5mol/L的氢氧化钠溶液；
[0045](4)称取猪源胰蛋白酶1g，加入到100mL 0.01本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种非特异性凝集抑制因子去除试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将高岭土和蒙脱石粉分别加入至酸液中，混合均匀后静置，并去除上清；所述高岭土在酸液中的终浓度为0.01～0.1g/mL，蒙脱石粉在酸液中的终浓度为0.01～0.1g/mL；(2)再向步骤(1)所得产物中加入与步骤(1)所用量相同的酸液，混合均匀后静置，并去除上清；重复上述过程2～3次；(3)向步骤(2)所得产物中加入缓冲液，并调节其pH值为7～9，然后于100～130℃灭菌30～50min；(4)待灭菌产物冷却至2～8℃后，加入胰蛋白酶溶液，于2～8℃搅拌30～60min即可。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酸液为稀盐酸，其浓度为1～3mol/L。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酸液中高岭土的终浓度为0.03g/mL，蒙脱石粉的终浓度为0.02g/mL。4.根据权利要求1所述的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐静，向军，邱文英，李敏，孔雪英，龚文波，邢刚，曾红梅，
申请(专利权)人：华派生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：