一种咪唑-4-甲酸乙酯纯度的HPLC检测方法技术

本发明专利技术公开了一种咪唑

【技术实现步骤摘要】
Poroshell 120 Bonus RP，100*4.6mm，2.7μm，亲水性C18色谱柱，柱温为30℃，常规温度，适用于大多数仪器；流动相：水相：20mM乙酸铵溶于0.05% H3PO4水溶液，有机相：乙腈；流速为1.0 ml/min；洗脱程序：梯度洗脱；检测波长：210nm；包括以下步骤：（1）取咪唑
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甲酸乙酯、已知杂质M02用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，定量稀释制成每1ml稀释剂含咪唑
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甲酸乙酯 1.0mg、已知杂质M02 0.01mg的系统适用性溶液；（2）取咪唑
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甲酸乙酯用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，定量稀释制成每1ml稀释剂含1.0mg咪唑
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甲酸乙酯的供试品溶液；（3）取咪唑
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甲酸乙酯用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，定量稀释制成每1ml稀释剂含0.0005mg咪唑
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甲酸乙酯的定量限溶液；（4）取5μl系统适用性溶液、供试品溶液、定量限溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，完成咪唑
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甲酸乙酯的纯度的检测。
[0007]进一步，所述的梯度洗脱为先用5%乙腈洗脱1 min，再将乙腈梯度升高至70%，时间11 min，再用70%乙腈冲洗3 min，最后用0.1min回调至起始比例5%乙腈，并平衡5 min。
[0008]本专利技术的有益效果是：本专利技术采用RP亲水性色谱柱，常规C18柱，在市场上简单易得；流动相水相为20mM乙酸铵溶于0.05% H3PO4水溶液，能解决咪唑
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甲酸乙酯保留差、峰型差的问题，pH值未用pH计控制，通过添加0.05% H3PO4剂量控制，避免不同地方因pH计之间的仪器误差，而导致方法重现性差；本专利技术色谱柱柱温30℃，常规温度，适用于大多数仪器，避免多数工厂因仪器配制不够而无法检测的问题；本专利技术检测时间20min，大大提高检测效率。
附图说明
[0009]图1为本专利技术实施案例专属性叠图；图2为本专利技术对比例1样品溶液在安捷伦EC
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C18/CS
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C18/PFP/Bonus
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RP色谱柱筛选叠图；图3为本专利技术对比例2样品溶液和M02溶液在20mM乙酸铵缓冲液的HPLC图；图4为本专利技术对比例2样品溶液和M02溶液在20mM乙酸铵溶于0.1%磷酸水溶液的HPLC图；图5为本专利技术对比例2样品溶液和M02溶液在20mM乙酸铵溶于0.01%磷酸水溶液的HPLC图。
具体实施方式
[0010]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步的说明。
[0011]本专利技术对色谱柱、流动相进行筛选，最终本实施案例色谱条件能将其与纯度有效分离，建立的检测方法将分析时间控制在20分钟内，主成分及纯度与其相邻峰的分离度均≥5.7，方法专属性好，灵敏度高，线性良好，重复性佳，有一定的溶液稳定性，方法准确可靠，达到上述专利技术目的。
[0012]具体HPLC检测色谱条件如下：色谱柱：Agilent Poroshell 120 Bonus RP，100*4.6mm，2.7μm，亲水性色谱柱，柱温为30℃。
[0013]流动相：水相：20mM乙酸铵溶于0.05% H3PO4水溶液，有机相：乙腈；流速为1.0 ml/min。
[0014]洗脱程序：梯度洗脱，先用5%乙腈洗脱1 min，再将乙腈梯度升高至70%，时间11 min，再用70%乙腈冲洗3 min，最后用0.1min回调至起始比例5%乙腈，并平衡5 min；检测波长：210nm。
[0015]包括以下步骤：（1）取咪唑
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甲酸乙酯、已知杂质M02用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，定量稀释制成每1ml稀释剂含咪唑
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甲酸乙酯 1.0mg、已知杂质M02 0.01mg的系统适用性溶液。
[0016]（2）取咪唑
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甲酸乙酯用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，定量稀释制成每1ml稀释剂含1.0mg咪唑
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甲酸乙酯的供试品溶液。
[0017]（3）取咪唑
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甲酸乙酯用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，定量稀释制成每1ml稀释剂含0.0005mg咪唑
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甲酸乙酯的定量限溶液。
[0018]（4）取5μl系统适用性溶液、供试品溶液、定量限溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，完成咪唑
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甲酸乙酯的纯度的检测。
[0019]按照上述实验条件进行预验证考察，具体实施如下：（1）专属性考察：取稀释剂和上述步骤1的系统适用性溶液5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，完成专属性的考察。
[0020]结果如图1所示：咪唑
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甲酸乙酯和M02与相邻峰完全基线分离，分离度≥5.7，且空白对咪唑
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甲酸乙酯与已知杂质M02均无干扰，咪唑
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甲酸乙酯的光谱纯度1000，专属性好。
[0021]（2）灵敏度考察：取咪唑
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甲酸乙酯和已知杂质M02用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，定量稀释制成每1ml稀释剂含咪唑
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甲酸乙酯0.0005mg、含M02 0.0005mg的混合定量限溶液，取5μl定量限溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，完成灵敏度的考察。
[0022]结果：咪唑
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甲酸乙酯和M02的S/N≥16，满足接受标准（S/N≥10）。
[0023]（3）线性考察：取咪唑
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甲酸乙酯用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，并定量稀释制成一系列的在样品浓度0.05%～120%水平的线性溶液。取5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，完成线性的考察。
[0024]结果：线性方程为Y=135.9909X
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0.0558相关系数=1.0000；截距b与100X时Y的比值=0.04%，线性关系良好。
[0025]（4）重复性：取咪唑
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甲酸乙酯用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含咪唑
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甲酸乙酯 1.0mg的供试品溶液；平行配制3份。
[0026]结果：3份样品溶液咪唑
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甲酸乙酯 %Area的RSD=0.0%，杂质（包括检出的已知杂质和未知杂质）%Area的RSD≤7%，重复性佳。
[0027]（5）溶液稳定性：取咪唑
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甲酸乙酯用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，并定量稀释制成每1ml稀释剂含咪唑
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甲酸乙酯 1.0mg的供试品溶液，室温放置13.7h后，重新进样。
[0028]结果：样品溶液室温放置13.7小时内，咪唑
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甲酸乙酯峰%Area与0h比值=100%，各杂质%Area与0h相比，绝对差值本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种咪唑
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甲酸乙酯纯度的HPLC检测方法，所述咪唑
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甲酸乙酯分子式为C6H8N2O2，结构式为，其特征在于：采用反相高效液相色谱法，紫外检测器，HPLC检测条件如下色谱柱：Agilent Poroshell 120 Bonus RP，100*4.6mm，2.7μm，亲水性C18色谱柱，柱温为30℃；流动相：水相：20mM乙酸铵溶于0.05% H3PO4水溶液，有机相：乙腈；流速为1.0 ml/min；洗脱程序：梯度洗脱；检测波长：210nm；包括以下步骤：（1）取咪唑
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甲酸乙酯、已知杂质M02用50%乙腈水溶液作为稀释剂溶解，定量稀释制成每1ml稀释剂含咪唑
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甲酸乙酯 1.0mg、已知杂质M02 0.01mg的系统适用性溶液；（2）取咪唑
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【专利技术属性】
技术研发人员：梅青，柴金柱，胡中志，胡进，张佳，王世俊，
申请(专利权)人：武汉海特生物创新医药研究有限公司，
类型：发明
国别省市：